彭炜
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同病毒载体感染内耳组织的比较研究
- 2009年
- 目的通过血清5型重组腺病毒和血清2型重组腺相关病毒感染大鼠内耳组织的比较研究，筛选出更适合内耳基因治疗的病毒载体。方法一定体积的血清5型重组腺病毒液和血清2型重组腺相关病毒液经圆窗膜注入鼓阶外淋巴液，通过荧光共聚焦显微镜、免疫组化、Western免疫印迹及听性脑干反应等方法对两种载体所携带报告基因的表达部位、表达时程以及两种病毒本身对内耳组织细胞生活状态的影响加以比较。结果血清5型重组腺病毒和血清2型重组腺相关病毒所携带的增强型绿色荧光蛋白报告基因均可在前庭膜、血管纹、基底膜、盖膜、螺旋神经节区及转染对侧耳表达。rAAV2携带的EGFP蛋白第14天表达开始明显增多，第60天仍可检测到高表达。rAd5携带的EGFP蛋自在耳蜗组织内的表达高峰维持在第1～21天，在30天时表达明显减弱。结论腺病毒的优势在于其基因表达的迅速和高效，而腺相关病毒载体以其长的表达时程，低组织细胞毒性在内耳基因转染中表现出独特的优势。
- 杨阳孔维佳胡钰娟钟毅赵学艳彭炜
- 关键词：腺病毒腺相关病毒增强型绿色荧光蛋白内耳
- 内耳拟老化大鼠模型对噪声损伤易感性研究被引量：3
- 2010年
- 目的:应用本研究小组建立的内耳拟老化模型,研究其对噪声损伤的敏感性,并探讨线粒体DNA缺失(mtDNA)在大鼠对噪声损伤易感的可能作用。方法:2月龄Wistar大鼠32只随机分为4组,A组每日皮下注射D-半乳糖150mg/kg体重,持续8周;继而暴露于声强为110dBSPL的噪声环境中,每日连续刺激4h,持续2d。B组每日皮下注射0.9%生理盐水150mg/kg体重,持续8周,然后给予噪声暴露,噪声条件同A组。C组用药方法同A组,D组用药方法同B组,C组和D组均不予噪声暴露。造模后2周测试ABR反应阈改变,并测试各组大鼠膜迷路总超氧化物歧化酶活力(T-SOD)、丙二醛(MDA)水平,同时应用巢式PCR(nestPCR)方法检测大鼠膜迷路mtDNA4834缺失突变,并对PCR产物进行测序。结果:A组大鼠ABR反应阈改变[(66.250±6.409)dBSPL]较B组[(35.625±4.955)dBSPL]明显提高,差异有统计学意义(P<0.01)。A组T-SOD显著下降,MDA水平明显提高,与B组差异有统计学意义(P<0.01)。大鼠内耳组织mtDNA4834缺失突变率分别为:A组87.5%(7/8),B组12.5%(1/8),C组75.0%(6/8),D组0(0/8)。结论:内耳拟老化模型大鼠对噪声性聋易感,大鼠内耳组织mtDNA缺失突变可增加模型大鼠对噪声性听力损伤的易感性。
- 许黎胡钰娟孔维佳师洪彭炜胡媛
- 关键词：D-半乳糖噪声暴露线粒体DNA突变
- 病毒与非病毒载体转染新生大鼠血管纹边缘细胞的比较研究
- 2008年
- 目的通过病毒与非病毒载体对原代培养的新生大鼠内耳血管纹边缘细胞转染情况的比较,选择出适合边缘细胞的基因治疗载体。方法用质粒(pEGFP-N1)、血清5型重组腺病毒(rAd5)以及血清2型重组腺相关病毒(rAAV2)三种载体转染新生大鼠(≤72小时)耳边缘细胞,通过对转染效率、细胞凋亡以及细胞活性的检测将三种载体加以比较。结果对边缘细胞的转导效率依次为rAd5>rAAV2>pEGFP-N1,AnnexinⅤ-APC/7-AAD双染法检测转染阳性细胞的损伤情况依次为rAAV2rAd5>pEGFP-N1。结论病毒载体相对于非病毒载体以其高转导效率、低细胞毒性在对原代培养的新生大鼠耳边缘细胞的转染中表现出明显优势。与血清2型重组腺相关病毒比较,相对高效、低毒性的血清5型重组腺病毒更适用于原代培养的新生大鼠血管纹边缘细胞的基因转染研究。
- 杨阳孔维佳李隽胡钰娟钟毅郝亚楠赵学艳彭炜
- 关键词：转染边缘细胞
- 锰超氧化物歧化酶基因转染对大鼠内耳的抗氧化保护被引量：1
- 2009年
- 目的探讨外源性锰超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase，MnSOD）基因表达对拟老化模型大鼠内耳氨基糖苷类抗生素损伤的保护作用。方法雌性SD大鼠按150ms／（kg·d）给于半乳糖皮下注射连续8周，制备拟老化大鼠模型；在第9周按500mg／（kg·d）给于阿米卡星腹腔注射连续1周，制备氨基糖苷类损伤大鼠模型。将携带MnSOD基因的重组腺相关病毒（rAAV2-MnSOD）液经蜗窗膜注入拟老化大鼠或氨基糖苷类损伤大鼠的耳蜗外淋巴，通过免疫组化凋亡检测、耳蜗基底膜铺片、caspase-3蛋白测定、酶活性测定和听性脑干反应（ABR）检测等方法观察MnSOD基因在对抗内耳氧化应激损伤中的作用。结果外源性MnSOD基因的转染使得内耳MnSOD从基因和蛋白水平的表达均得到了有效提升（P值均〈0．05），减少了氨基糖苷类抗生素损伤后氧化应激导致的拟老化大鼠内耳细胞的凋亡。结论外源性MnSOD基因能部分对抗氨基糖苷类抗生素所致氧化应激对拟老化大鼠内耳的损伤。
- 杨阳孔维佳胡钰娟李隽钟毅赵学艳郝亚楠彭炜
- 关键词：内耳超氧化物歧化酶转染氨基糖苷类氧化性应激
- 不同程度饮食限制对半乳糖诱导的老年性聋的影响
- 彭炜孔维佳
- 重组病毒rAAV_2-IRES-EGFP/MnSOD的构建及其表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建含有大鼠源性锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因的重组病毒rAAV2-IRES-EGFP/Mn-SOD,检测其在大鼠耳血管纹边缘细胞和耳蜗组织内的表达。方法将大鼠心肌组织来源的SOD基因克隆入融合表达载体pEGFP-N1中,再以限制性酶切方法克隆入真核表达载体pSNAV2.0-IRES-EGFP中,最后将其包装为rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD病毒颗粒,用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、RT-PCR及Western印迹检测MnSOD基因的表达。结果真核表达载体pEGFP-N1/MnSOD和pSNAV2.0-IRES-EGFP/MnSOD经酶切、PCR和测序鉴定均检测到MnSOD基因的完整序列,被rAAV2-EGFP/MnSOD感染的耳边缘细胞和内耳组织中MnSOD蛋白的表达均高于空白对照耳。结论成功构建了大鼠源性MnSOD基因的重组病毒rAAV2-IRES-EGFP/MnSOD,并使其在大鼠耳边缘细胞和大鼠耳蜗组织中成功表达,为抗氧化基因治疗内耳疾病的研究奠定了基础。
- 杨阳孔维佳李隽胡钰娟彭炜钟毅郝亚楠
- 关键词：锰超氧化物歧化酶边缘细胞
