张肇英
- 作品数：15 被引量：40H指数：4
- 供职机构：内蒙古大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 用PCR法构建乳腺特异性表达非乳蛋白基因的研究被引量：1
- 1997年
- 将ＰＣＲ法分别从绵羊和人血基因组ＤＮＡ中扩增出的绵羊β－乳球蛋白基因（ＢＬＧ）５′端调控区８９８ｂｐ的片段和人骨髓单核细胞表面分化抗原ＣＤ１４基因（ｈＣＤ１４）成熟肽１２４５ｂｐ的片段连接．连接片段插入ｐＵＣ１９ＥｃｏＲＩ－ＫｐｎＩ位点，构建成ｐＢＬＧ－ｈＣＤ１４质粒．该质粒经ＫｐｎＩ及ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄＩＩ酶切、ＰＣＲ法扩增ＢＬＧ和ｈＣＤ１４分析后，进一步用３２Ｐ－ＢＬＧ探针杂交确证．用ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄＩＩ酶切质粒片段ＢＬＧ－ｈＣＤ１４产生转基因小鼠以检测ＢＬＧ－ｈＣＤ１４在乳腺的表达能力．用免疫杂交法证实在转基因阳性小鼠乳汁中表达了ｈＣＤ１４．
- 郭继彤李雪玲于海泉王达珍张肇英
- 关键词：转基因动物乳腺基因表达
- 外源基因在转基因动物乳腺中的特异性表达研究被引量：6
- 1998年
- 动物基因工程研究最大的突破就是转基因动物研究的进展．自八十年代初第一批转基因小鼠问世以来，转基因动物的研究已从方法学研究步入了应用性研究阶段．转基因动物除作为研究工具广泛地应用于发育生物学、免疫学、遗传学以及医学等生命科学领域外，外源基因在转基因动物的特异性表达，尤其是在乳腺的表达，又可将转基因动物用作生物反应器进行生物活性蛋白的生产而应用于商业生产．在转基因动物乳腺的特异性表达研究中，寻找乳蛋白基因调控构件是非常必要的，特别是获得高效而稳定表达的基因调控构件更为重要．迄今为止，已获得了多种乳蛋白基因调控构件．在这些构件的指导下从转基因动物乳汁中生产了不同的人体非乳蛋白，且都具有生物活性．
- 郭继彤张肇英
- 关键词：转基因动物乳腺基因表达外源基因
- 用免疫手术及胚泡注射法产生小鼠嵌合体被引量：6
- 1990年
- 用免疫手术的方法分离白色(昆明白)或棕色[昆明白×C57BL/6N)F_1,自交20代以上]小鼠胚泡的内细胞团,通过显微注射术将分离出的内细胞团,注入另一品系(棕色或白色)小鼠胚泡的胚泡腔内,经体外培养后移植到假孕受体子宫内,生下了嵌合体小鼠。共注射受体胚泡137枚,注射后成活121枚,成活率为88.3％(121/137),将98枚成活的胚泡移植到14只同步假孕受体小鼠子宫,移植后成活受体11只,其中7只受体受胎,受胎率为63.6％(7/11),7只受胎的受体小鼠,共接受胚胎49枚,产仔鼠30只,产仔率为61.2％(30/49)。到目前为止共存活14只仔鼠,仔鼠存活率为46.6％(14/30)。在9只已生长出毛的仔鼠中,2只仔鼠属于毛色嵌合,新生仔鼠中另2只仔鼠的眼睛颜色与供体胚的品系相同。眼球与其它组织的嵌合性,待进一步分析,免疫手术可以快速准确地得到大量的纯内细胞团,这种方法与胚泡注射法相结合,为制备动物嵌合体提供一条有效的新途径。
- 张肇英王达珍李昱郭继彤李雪峰
- 关键词：胚胎移植小鼠
- 微注射MT-hGH基因入雄原核后兔受精卵体外发育的研究被引量：1
- 1990年
- 将MT-hGH基因用微注射的方法,注入兔原核卵的雄原核中,微注射的受精卵和不经微注射对照的受精卵,经体外培养9h,21h,33h,53h,77h和125h,对其活力,发育速率和发育阶段进行观察。其结果是对照组和注射组的存活率随着体外培养时间的延长而下降,对照组受精卵体外培养9h存活率为99.2％,到125h下降至68.64％;注射组受精卵体外培养9h存活率为98.2％到125h下降至62.1％,体外培养9h和体外培养125h,胚胎存活率差异极显著(P<0.01)。在相同的时间内对照组胚胎存活率略高于微注射组,两者差异不显著。体外培养胚胎的发育速率对照组和微注射组均低于体内发育,而体外培养对照组胚胎发育速率与微注射组比较无显著差异,前者略高于后者。将注射MT-hGH基因体外培养发育正常的胚胎,移入8只同步假孕受体输卵管中,3只受体妇娠期满产仔5只,目前4只仔兔生长良好,其月令体重相当于对照仔兔1.3倍。注入外源基因整合情况有待检测后另文发表。
- 张肇英王达珍扈廷茂郭继彤刘明秋李雪峰卢美霞
- 关键词：基因显微注射体外发育胚胎移植
- MT-hGH基因注入小鼠受精卵的研究
- 1993年
- 用显微注射法,将MT-hGH融合基因注入昆明白小鼠受精卵雄原核中,受注的原核卵经体外培养发育的198枚2细胞胚、45枚桑椹胚和161技胚泡,移植到54只假孕受体,其中16只妊娠产仔49只,存活到供试的仔鼠25只,小鼠长到3个月后,切尾制备DNA,经DNA斑点杂交和Southern印迹杂交检测基因整合情况,25只小鼠中3只有融合基因整合,称为转基因小鼠。仔鼠21日龄离乳后饮水中加入锌(Z。^(++)),以诱导融合基因表达,85日龄时,转基因小鼠体重比对照组重32.0％。还讨论了基因整合方式对胚胎发育的影响。
- 扈廷茂刘明秋王达珍张肇英李雪峰扈惠平卢美霞
- 关键词：分子杂交受精卵
- 已知成分培养液中兔原核卵培养到胚泡的研究
- 1999年
- 用商业化ＲＰＭＩ１６４０添加１５ｍｇｍｌ－ＢＳＡ将１５４枚兔原核卵，经体外２４ｈ、４６ｈ、７０ｈ、９４ｈ和１１８ｈ培养，分别有９８．７％（１５２／１５４）、９８．１％（１５１／１５４）、９２．９％（１４３／１５４）、８６．４％（１３３／１５４）和７５．３％（１１６／１５４）的胚胎得到进一步发育．５６．５％（８７／１５４）经１１８ｈ培养后发育成胚泡．１４０ｈ后孵化率达３５．７％（５５／１５４）．将７０枚发育的４－细胞移植到５只受体，３只妊娠（６０％）产仔５只．结果表明在ＲＰＭＩ１６４０中添加ＢＳＡ，可完成兔受精卵植入前的发育，且发育的４－细胞在植入受体输卵管后，可发育到妊娠期满并产仔．
- 郭继彤李煜山蓝山蓝王达珍
- 关键词：体外培养胚胎移植胚泡培养液
- 绵羊β-乳球蛋白基因5′端及上游调控序列的PCR扩增的方法学研究
- 2001年
- 本文对绵羊 β-乳球蛋白基因 5′端及上游调控序列的 PCR方法扩增进行了研究 .经比较分析 ,将从羊血中提取的绵羊基因组 DNA的模板用量定为 4μl( 0 .4μg/μl) ,Taq DNA聚合酶用量为 0 .83μl( 3u/μl) ,变性为 94℃ 1 min,退火为 64℃ 1 m in,72℃延伸 2 min,循环次数为32次 ,获得的 PCR产物经电泳检测 ,条带明亮 ,特异性高 ,大小为 898bp.经序列分析发现 ,与已知基因组序列一致性达 99%以上 ,可用于指导外源基因在转基因动物乳腺中表达 .
- 李雪玲郭继彤于海泉王达珍张肇英
- 关键词：PCR
- 小鼠早期胚胎内细胞团分化潜能的研究
- 1995年
- 用免疫手术去除小鼠早期胚胎的外层细胞或滋养层细胞后，其内细胞团（ＩＣＭ）经２４ｈ体外培养后能够重新形成滋养层，从晚期桑椹胚、早期胚泡和晚期胚泡分离的ＩＣＭ的滋养层分化率分别为７０．３％、６９．３％和１１．１％，晚期胚泡ＩＣＭ的滋养层分化率明显低于早期胚泡和桑椹胚的滋养层分化率。实验结果表明小鼠早期胚泡的ＩＣＭ仍然具有较强的分化为滋养层的能力，但晚期胚泡的ＩＣＭ分化为滋养层的能力明显减弱．从而推断晚期胚泡的ＩＣＭ在分化方向上发生了重要的内在变化。
- 李昱张肇英王达珍郭继彤
- 关键词：ICM早期胚胎细胞分化胚胎
- 免疫学方法鉴定小鼠早期胚胎性别的研究被引量：14
- 1994年
- 用免疫学方法制备的Ｈ─Ｙ抗血清，通过细胞毒性试验检测昆明白系小鼠早期胚胎细胞表面的雄性特异性Ｈ─Ｙ抗原，从而鉴定早期胚胎的性别。将８─１６细胞期胚胎培养在Ｗｈｉｔｔｅｎ＇ｓ培养液中，并加入Ｈ─Ｙ抗血清和正常豚鼠血清，培养２４ｈ后，镜检胚胎可分为有反应和无反应两类。胚胎中一个或多个卵裂球溶解为有反应（Ｈ─Ｙ阳性）为雄性胚胎；胚胎完好无损为无反应（Ｈ─Ｙ阴性）为雌性胚胎。实验结果表明，１５２８枚胚胎经处理后４７．９％的胚胎为Ｈ─Ｙ阳性，５２．１％为Ｈ─Ｙ阴性，与昆明白系小鼠自然性别比率（♂５１．２％，♀４８．８％）比较两者无显著差异。Ｈ─Ｙ阴性胚胎经染色体核型分析，雌性胚胎鉴别准确率为８０％。
- 王达珍郭继彤李煜于海泉李雪玲张肇英
- 关键词：性别胚胎
- 产生乳腺定位表达人CD14的转基因小鼠研究被引量：2
- 1998年
- 将来自ＰＣＲ法合成的绵羊β－乳球蛋白基因（ＢＬＧ）５′端８９８ｂｐ上游区和人单核细胞表面分化抗原基因（ｈＣＤ１４）成熟肽１２４５ｂｐ片段构建的ＢＬＧ－ｈＣＤ１４融合基因纯化后，注入小鼠受精卵原核．实验共注射受精卵１１４９枚，经体外培养发育到２－细胞期的胚胎计９６８枚，发育率为８４．２％．从发育的胚胎中选择６３４枚移植到４６只假孕受体．其中１４只妊娠产仔，妊娠率３０．４％．妊娠受体共移植胚胎２０７枚，产仔４３只，产仔率２０．８％．经ＰＣＲ法检测８只为ＢＬＧ阳性整合，整合率２５．８％．检测泌乳的转基因阳性雌性小鼠，其中一只经过用生物素标记的鼠抗人ｈＣＤ１４单克隆抗体与琼脂糖凝胶转移片段简易杂交检测。
- 郭继彤于海泉李雪玲王达珍张肇英
- 关键词：转基因小鼠乳腺蛋白
