目的探讨小鼠肝纤维化时外周血和肝组织浸润的不同免疫细胞的变化及其意义。方法将C57BL/6小鼠采用数字表法随机分成肝纤维化组和对照组,每组5只,肝纤维化组腹腔注射四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4),建立肝纤维化模型,对照组注射等量0.9%氯化钠注射液。采用生化法测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)水平;HE染色、Masson染色观察肝组织病理变化;流式细胞术分析外周血和肝组织中浸润的调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)、NK1.1+、CD4+及CD8+细胞的比例变化,比较组间差异。结果流式分析显示纤维化小鼠肝组织中Tregs比例CD25+Foxp3+/CD4+为(10.63±1.50)%,明显高于对照组(1.80±0.66)%,差异有统计学意义(P<0.01),外周血的Tregs上升不明显,纤维化组与对照组分别为(7.40±0.85)%、(5.27±1.30)%;纤维化小鼠肝组织浸润的NK1.1+细胞和血液中的NK1.1+细胞占淋巴细胞的比例分别低于对照组〔(9.53±2.25)%vs(19.80±5.97)%,P<0.05;(0.38±0.13)%vs(1.06±0.63)%,P<0.05〕;纤维化小鼠肝组织和血中的CD4+细胞及CD4+/CD8+比值也有所下降,但差异无统计学意义。结论小鼠肝纤维化时,肝组织中浸润的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞升高,NK1.1+细胞下降,CD4+细胞下降。
目的:观察乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)慢性感染者外周血中调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)和自然杀伤(natural killer,NK)细胞的表达及相关性.方法:选取HBV慢性感染患者共96例,其中慢性乙型肝炎患者42例,乙型肝炎肝硬化患者30例,HBV携带者24例,抽取外周血用流式细胞分析技术检测其Tregs和NK细胞的表达情况.同时选取健康者21例作为对照组.结果:HBV慢性感染者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs占CD4+T细胞的比例整体高于健康对照组,其中乙型肝炎肝硬化患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs占CD4+T细胞的比例最高,其次为慢性乙型肝炎患者,最后为HBV携带者和健康对照组.相反,NK细胞占淋巴细胞的比例在HBV慢性感染者外周血中整体较健康对照组低,其中乙型肝炎肝硬化组表达最低,其次为慢性乙型肝炎组,最后为HBV携带者,但都低于健康对照组.进一步分析显示NK细胞的表达与Tregs呈负相关性(r=-0.3280,P<0.05).结论:不同阶段的HBV慢性感染患者外周血中Tregs和NK细胞表达不同,且两者呈明显的负相关性.
目的观察肝纤维化小鼠肝内调节性T细胞(regulatory T cell,Tregs)对具有杀伤能力的免疫细胞的影响。方法将实验小鼠分为肝纤维化组、肝纤维化+CD25抗体组、对照组3组。实验组用四氯化碳诱导小鼠肝纤维化,4周后给予小鼠腹腔注射纯化的CD25单克隆抗体(PC61培养上清),下调体内Tregs水平。对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水。流式细胞分析检测肝脏Tregs水平以及CD8+T细胞(细胞毒性T细胞表面标志)、Kupffer细胞(F4/80)以及NK细胞的表达。实时荧光定量检测不同亚型的Kupffer细胞及IFN-γ在不同组小鼠肝脏的表达。结果肝纤维化小鼠肝脏Tregs明显高于对照组,注射CD25抗体下调Tregs 50%以上。CD8+T细胞、Kupffer细胞在肝纤维化小鼠肝内表达升高,下调Tregs后均无明显改变;但NK细胞和IFN-γ在肝纤维化小鼠肝内表达明显下降,下调Tregs后表达显著上升,其中M1型Kupffer细胞在肝纤维化组表达略有降低,下调Tregs后表达升高;M2型变化不明显。结论Tregs参与对肝纤维化小鼠肝脏的免疫调控,其中对M1型Kupffer细胞和NK细胞抑制作用明显,对CD8+T细胞抑制作用不显著。
