张宝路 作品数:12 被引量:18 H指数:3 供职机构: 中国农业大学动物科技学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 辽宁省教育厅高等学校科学研究项目 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
6-磷酸葡萄糖对鸡类囊胚发育的影响 由鸡X期胚盘获得的类囊胚包含禽类胚胎干细胞,且具有较强的增殖与分化能力.体外培养12、24、36h的类囊胚细胞Stathmin基因的表达高于X期胚盘细胞,证实增殖的细胞为禽类胚胎干细胞.超微结构观察表明,类囊胚细胞在早期... 张宝路 潘求真 韩红兵 邓学梅 连正兴 李宁 李佳关键词:胚胎干细胞 文献传递 鸡胚胎干细胞能量代谢的特点 2010年 细胞能量代谢与细胞生命活动紧密相关,但目前对于鸡胎干细胞能量代谢特的研究较少.本研究利用前期建的chES细胞模型,通过电子显微发现未分化的chES细胞胞质内储存大量糖原颗和卵黄颗.逆转录-聚合酶链反应对能量代谢途中的要限速酶的基因表达分析显,未分化的chES细胞不表达丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶,与鸡胎成纤维细胞相比低表达葡萄糖转运蛋白1和磷酸果糖激酶,高表达己糖激酶1和糖原合成酶;分化中的chES细胞与成年母鸡肝脏相比少量表达PCX和PCK2,与CEF细胞相比高表达GLUT1,HK1,PFK,而GYS的表达没有显性差异.过酸希夫氏染色显,细胞养过程中未分化chES细胞中储存的糖原颗未见减少,而分化中的chES细胞的糖原颗逐渐减少.此外,通过赫斯特荧光染料33342和化丙啶双染色发现,大量未分化的chES细胞在体外养过程中死亡,而添加外源性6-磷酸葡萄糖显减少细胞死亡.上述果说明,未分化chES细胞要以糖原合成为,无糖异生代谢,而分化中的chES细胞以糖酵代谢为.未分化的chES细胞以大量消耗代谢中间产物G6P为代价进行糖原合成,造成细胞内源性G6P相对不足引起细胞死亡.因此,细胞内糖原的含量反映了chES细胞的分化程度.chES细胞在体外养时可通过添加G6P来提高生存率. 李佳 张宝路 韩红兵 曹之辰 连正兴 李宁关键词:能量代谢 糖原 细胞命运 绵羊sTLR4基因的克隆表达及定位 被引量:2 2011年 采用RT-PCR方法克隆绵羊TLR4基因的一种新型剪接体形式sTLR4,将sTLR4与EGFP构建融合蛋白表达载体。用EcoR I和Sma I分别双酶切质粒pEGFP-N1和sTLR4基因的PCR产物,采用T4连接酶进行连接,将质粒转化TOP10菌株,挑取阳性克隆采用AgeI和VspI对质粒进行双酶切鉴定。经鉴定的质粒采用电击方法转染胎儿成纤维细胞,在激光共聚焦显微镜下观察sTLR4蛋白在成纤维细胞中的定位情况。结果表明:构建的融合蛋白pEGFP-N1-sTLR4能够在成纤维细胞中正常工作,且sTLR4-EGFP融合蛋白可以在细胞膜上表达。 杜金苓 韩红兵 张宝路 连正兴关键词:转染 绵羊 基于单核细胞生物学特性的高抗病力检测试剂盒研制 李宁 连正兴 刘琳 李海 宁中华 邓学梅 孙书锋 刘云波 李俊英 潘求真 蒋桂芳 张庆才 张宇 张宝路 陈学辉 杨泽霖 简要技术说明:(1)开发了外周血单核细胞快速分离的新型淋巴细胞分离液,且具如下优点:减少了样品和分离液混合的弊端,保证了样品的有效性;缩短加样时间,并可进行多个样品的同时分离;技术更新后采血量明显下降。(2)实现了单核/...关键词:关键词:单核细胞 检测试剂盒 转基因羊的研究进展 被引量:4 2008年 张宝路 连正兴关键词:转基因羊 转基因技术 动物基因组 转基因动物 生物技术 绿色荧光蛋白基因转染猪骨髓基质干细胞 目的采用电穿孔法将带有GFP的质粒(pGFP-NEO)转染MSCs,经过G418筛选阳性克隆,用荧光显微镜检测GFP的表达情况。结果以电压150V,20ms一次脉冲进行转染。转染 GFP质粒的MSCs能在含有6418的培... 潘求真 孙书锋 韩红兵 张宝路 李海 田亮 李佳 徐曙光 连正兴 杨宁关键词:绿色荧光蛋白 基因转染 骨髓基质干细胞 文献传递 用猪骨髓间充质干细胞为供体生产猪的转基因胚胎 被引量:1 2006年 以pEGFP-N 1质粒,通过电转染的方法转染了猪骨髓间充质干细胞,经过G 418筛选,获得了阳性细胞克隆。以转染的猪骨髓间充质干细胞与体外成熟(in v itro m aturation,IVM)的卵母细胞构建克隆胚。结果表明:通过体细胞核移植技术,猪骨髓间充质干细胞可以有效地生产转基因囊胚,并且绿色荧光蛋白可用于转基因胚胎的筛选。 潘求真 潘登科 王海 张宝路 李海 韩红兵 李佳 连正兴 杨宁 李宁关键词:转基因克隆 绿色荧光蛋白 骨髓间充质 绵羊TLR4基因剪接体对免疫因子应答影响 张宝路关键词:可变剪接 基因克隆 6-磷酸葡萄糖对鸡类囊胚发育的影响 2006年 由鸡Ⅹ期胚盘获得的类囊胚包含禽类胚胎干细胞,且具有较强的增殖与分化能力。体外培养12、24、36 h的类囊胚细胞S tathm in基因的表达高于Ⅹ期胚盘细胞,证实增殖的细胞为禽类胚胎干细胞。超微结构观察表明,类囊胚细胞在早期增殖过程中以卵黄蛋白为能量的主要来源,当卵黄蛋白消耗殆尽,则细胞出现大量死亡。胚胎干细胞培养液(ESM)能够促进类囊胚细胞的增殖却不能减少死亡。在ESM基础上添加5 mm o l/L 6-磷酸葡萄糖(G 6P),不仅各期细胞增殖显著,且24 h细胞死亡数的比例(D/T)由23%下降到5.6 7%(P<0.0 5),3 6 h细胞D/T由3 0%下降到1 5.6 3%(P<0.0 5)。结果表明,在ESM基础上添加5 mm o l/L G 6P可促进类囊胚细胞的增殖,并明显改善能量匮乏导致的细胞死亡。 李佳 张宝路 潘求真 韩红兵 邓学梅 连正兴 李宁关键词:胚胎干细胞 鸡胚 大骨鸡微卫星DNA指纹与其生长性状关系的研究 利用5种鸡基因组的微卫星DNA标记,对大骨鸡共93只个体进行标记基因型与生长性状的最小二乘分析.结果表明:有2个标记ADL0146和ADL0176分别显著影响大骨鸡的部分生长性状(P<0.05).经多重比较,在ADL01... 白文林 尹荣焕 张守纯 张宝路 颜卉 姜午旗 罗光彬关键词:大骨鸡 微卫星DNA 生长性状 文献传递