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张发洲: 作品数：13 被引量：12H指数：2; 供职机构：广州军区广州总医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金军队杰出人才基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>

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三种方法检测生殖器疱疹病毒的比较: 2012年; 近年来生殖器疱疹发病率逐渐上升，^1其临床表现多样，且无症状者多见，有症状时，传染性强；无症状感染者及复发性生殖器疱疹复发的间歇期存在排毒，也可能具有传染性。。我们采用ELISA、细胞培养和PCR法对84份生殖器疱疹标本进行了检测，现将结果报道如下。; 张玲杨慧兰宣敏樊建勇龙朝钦张发洲薛礼长; 关键词：生殖器疱疹病毒复发性生殖器疱疹无症状者 ELISA 传染性

单纯疱疹病毒Ⅱ型多功能蛋白ICP27对Vero细胞凋亡作用的研究: 单纯疱疹病毒2型（HSV-2）是一种常见的人类至病菌,感染人腰部以下的皮肤和粘膜而主要引起生殖器疱疹。HSV-2感染人体后,便能在骶尾神经节内建立终身性的潜伏感染,而潜伏的病毒可因多种因素而激活,经外周感觉神经顺向移至皮...; 张发洲; 关键词：单纯疱疹病毒2型细胞凋亡; 文献传递

HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达被引量：2: 2011年; 目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)多功能蛋白感染细胞多肽27(ICP27)真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并检测其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。方法提取病毒株HSV-2333 DNA,用高保真DNA聚合酶对多功能蛋白ICP27基因进行高保真扩增,用双酶切连接至真核表达载体pCDNA3.0中。pCDNA3.0-ICP27经双酶切、测序验证,并通过脂质体介导质粒瞬时转染Vero细胞,经RT-PCR和Western blot检测ICP27蛋白的表达。结果 pCDNA3.0-ICP27经双酶切可切出目的片段,测序结果经比对,与基因库中的序列完全一致。转染后经RT-PCR和Western blot检测,证实转染重组质粒组有ICP27蛋白表达,而转染空质粒组及未转染组没有检测到ICP27的表达。结论成功构建了HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并能在Vero细胞中表达。; 龙朝钦杨慧兰张发洲薛礼长; 关键词：单纯疱疹病毒2型真核表达载体质粒

顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型的建立: 2011年; 目的:建立常见凋亡诱导剂顺铂(Cisplatin)诱导非洲绿猴肾细胞(Vero)凋亡的模型,为进一步研究抗凋亡基因在细胞凋亡中的分子机理打下基础。方法:分别以不同浓度的顺铂处理Vero细胞48h,用噻唑蓝(MTT)比色法、Gimesa染色、流式细胞术检测,观察处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果:以未处理的细胞作为对照组,1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞生存率分别为(79.02±6.10)%、(68.84±4.42)%、(56.66±4.07)%、(46.83±3.76)%、(29.04±5.93)%(P<0.01);经顺铂诱导后细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;流式细胞仪检测,0、1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞后凋亡率分别为1.66%±0.19%、16.65%±1.26%、24.82%±1.03%、36.22%±1.04%、48.49%±1.24%、43.34%±1.17%(P<0.01)。结论:本实验成功建立顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。; 浦洋薛礼长吕芳彪樊建勇张发洲龙朝钦; 关键词：非洲绿猴肾细胞细胞凋亡顺铂

HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达: 目的构建HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并检测其在Vero细胞中的表达.方法提取病毒株HSV-2333DNA,用高保真DNA聚合酶对多功能蛋白ICP27基因进行高保真扩增,用双...; 龙朝钦杨慧兰张发洲薛礼长

单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体开放读码框3对Vero细胞凋亡的影响被引量：4: 2012年; 目的研究单纯疱疹病毒2型（HSV-2）潜伏相关转录体（LAT）开放读码框3（ORF3）对顺铂诱导的非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）凋亡的影响。方法构建重组质粒pEGPF—ORF3，并转染Vero细胞，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）验证目的基因的表达。顺铂诱导Vero细胞凋亡，通过荧光显微镜观察凋亡小体，Giemsa染色检测细胞核形态，噻唑蓝法（MTr法）检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞凋亡情况。实验结果采用SPSSl3．0进行分析，各组间两两比较采用单因素方差分析和t检验。结果成功克隆HSV-2333株ORF3基因，构建pEGFP—ORF3真核表达载体，RT—PCR验证该真核表达载体能在Vero细胞中高效表达。转染pEGFP—ORF3的Vero细胞经顺铂诱导凋亡后Giemsa染色，显示胞核蓝染，胞质淡浅，细胞形态正常。M．rr法分析显示，细胞增殖在转染pEGFP—ORF3组（2．56±0．21）与未经任何处理的正常对照组（2．66±0．13）比较，差异无统计学意义（P〉0．05），但高于顺铂诱导凋亡的正常对照组（1．65±0．11）和pEGFP—C2组（1．56±0．18），差异均有统计学意义（P〈0．05）；流式细胞仪分析细胞凋亡率，转染pEGFP—ORF3组（4．03％±1．04％）与正常对照组（2．13％±0．09％）比较，差异无统计学意义（P〉0．05），但低于空质粒pEGFP—C2组（19．45％±2．05％），且差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HSV-2LATORF3在Vero细胞中具有抗顺铂诱导的凋亡作用。; 杨慧兰薛礼长樊建勇张发洲龙朝钦张玲; 关键词：开放读码框架细胞凋亡

中波紫外线对人血小板线粒体活性影响的初步观察被引量：2: 2011年; 目的:观察中波紫外线对人血小板线粒体活性的影响,探讨其作为评测光损伤敏感系统的可行性。方法:以不同能量的中波紫外线照射人血小板,观察血小板计数(PLT)、血小板体积分布宽度(PDW)、血小板比容(PCT)、血小板平均体积(MPV)、血小板细胞活性、线粒体活性的变化。结果:接受不同能量的中波紫外线照射血小板,其血小板计数、血小板体积分布宽度(PDW)、血小板比容(PCT)、血小板平均体积(MPV)、血小板生物活性均无明显变化(P>0.05),而线粒体活性则明显降低(P<0.05)。结论:人血小板线粒体活性对中波紫外线的照射敏感并与其剂量呈依赖关系,可很好反映中波紫外线对生物体光损伤作用。; 黄茂芳刘仲荣杨慧兰张玲薛礼长张发洲; 关键词：中波紫外线血小板线粒体活性

pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体在Vero细胞中的表达特性及其对细胞活性的影响被引量：1: 2010年; 目的:研究单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框3(ORF3)的表达特点及其对细胞活性的影响。方法:双酶切和测序验证本实验室构建的HSV-2 LAT ORF3真核表达载体pEGFP-C2/LAT-ORF3的可用性,并将其转染入vero细胞,通过荧光和RT-PCR检验其在细胞中的表达,用MTT法进行细胞活性分析。结果:融合蛋白在细胞核中大量集中,且影响了绿色荧光蛋白在细胞中的分布;重组质粒对Vero细胞没有损伤作用。结论:HSV-2 LAT ORF3可抵消空质粒对细胞的损伤作用;其作用靶点可能主要存在于细胞核中,为阐明HSV-2 LAT ORF3在潜伏复发中的功能提供了实验基础。; 薛礼长杨慧兰张发洲龙朝钦; 关键词：绿色荧光蛋白 VERO细胞

单纯疱疹病毒Ⅱ型ICP27对Vero细胞凋亡作用的研究被引量：2: 2013年; 目的探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型转录前蛋白ICP27对Vero细胞凋亡作用及其参与细胞凋亡的可能途径。方法用前期构建成功的pcDNA3．0-ICP27质粒瞬时转染Vero细胞，MTr法检测pcDNA3．0-ICP27转染Vero细胞的活性，Giemsa染色及流式细胞术检测转染后ICP27在细胞凋亡中的作用，实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2mRNAs的变化和对凋亡执行蛋白Caspase-3的活性的检测以探讨ICP27参与细胞凋亡的途径。结果pcDNA3．0-ICP27转染Vero细胞后，M1Tr法检测发现其活性明显低于转染pcDNA3．0及空白转染的Vero细胞活性；Giemsa染色后发现转染pcDNA3．0-ICP27的Vero细胞变圆，细胞核破裂，流式细胞检测发现pcDNA3．0-ICP27转染的Veto细胞发生的凋亡率更高。凋亡执行蛋白Caspase-3的活性明显高于转染pcDNA3．0及空白对照；荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2mRNAs的变化，转染重组质粒的Vero细胞中BaxmRNAs表达量上调，Bcl-2mRNAs表达降低，Bax／Bcl-2明显高于正常培养的Vero细胞及转染pcDNA3．0质粒的Vero细胞。结论ICP27对Vero细胞有促进细胞凋亡的作用。而这种作用可能是使Bax及Bcl-2在细胞中的比例发生变化而导致的。; 龙朝钦杨慧兰张发洲薛礼长杜华; 关键词：HSV-2 真核表达凋亡

单纯疱疹病毒2型感染细胞多肽27真核表达质粒的构建及表达: 目的：构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞多肽27(ICP27)真核表达质粒.方法：应用PCR技术从HSV-2333株的基因组中扩增ICP27基因,并连接至真核表达载体pEGFPC2,对阳性克隆进行菌落PCR 、酶...; 张发洲杨慧兰

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