张发强
- 作品数：14 被引量：69H指数：6
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
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- 应用竞争聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨竞争聚合酶链反应 (C- PCR)在乙型肝炎病毒 (HBV)临床检测中的意义。方法 根据中国人群最常见的 HBV病毒 adr亚型基因组序列合成一对 HBV特异的引物 ,并制备内对照 DNA ,将适量的内对照DNA加入到常规 HBV DNA PCR检测反应体系中 ,使其与 HBV靶序列共扩增。结果 在 2 0 μl C- PCR反应体系中 ,加入约 10 0～ 5 0 0拷贝内对照 DNA能够有效的获得共扩增信号 ;在 12 0个临床血清标本的 C- PCR扩增中识别出 5个不能有效扩增的标本。结论 C- PCR能够有效地指示临床标本 HBV DNA体外扩增的假阴性。
- 王玲杨朋李双庆许淑惠曹桂群张发强张美霞陈清英夏庆杰刘凯唐方张远征
- 关键词：乙型肝炎病毒聚合酶链反应假阴性
- RNA干扰逆转肝细胞癌多药耐药被引量：7
- 2008年
- 目的筛选高效dsRNA/mdr1,以备研究RNA干扰逆转肝细胞癌多药耐药之用。方法首先根据siRNA设计原则,以多药耐药基因(mdr1)为靶基因,设计并选择4~5条siRNA/mdr1,经BLAST后体外转录法合成dsRNA/mdr1,用Oligofectamine试剂分别转染HepG2/mdr1,然后从mRNA、蛋白(P-gp)表达水平和细胞功能变化评价HepG2/mdr1耐药性被逆转的程度,比较各个dsRNA/mdr1的逆转效率,筛选出有效的siRNA/mdr1。结果成功合成5条dsRNA/mdr1(其中1条为阴性对照),dsRNA/mdr1-4mRNA表达(18.73±1.33)%、蛋白表达变化(79.1±1.6)%^(16.8±0.4)%与其他各组细胞比较,有显著性差异;细胞内柔红霉素(DNR)累积量也较其他组明显增加(平均荧光强度79.58,阳性率84.25%,P<0.05)。结论体外转录法结合脂质体转染适用于筛选高效siRNA,肯定了siRNA干扰序列能够有效阻抑mdr1基因编码蛋白p170的功能。
- 潘光栋严律南王新平杨家印夏庆杰闫乃红陈清英张发强
- 关键词：肝细胞癌多药耐药RNA干扰
- 人内皮抑素重组腺病毒的构建及鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的:利用Adeasy1系统,构建并鉴定人内皮抑素(hES)重组腺病毒。方法:从真核表达载体pEGFP-N1-ASP-hES中将ASP-hES扩增,亚克隆至pAdTrackCMV穿梭质粒中,与pAdEasy1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组为腺病毒载体。线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达。结果:重组腺病毒载体经PCR鉴定正确,病毒滴度为1×108PFU/ml。结论:成功构建了人内皮抑素重组腺病毒Ad-ASP-hES,为内皮抑素基因治疗新生血管的进一步研究奠定了基础。
- 闫乃红陈清英曹桂群王玲张发强夏庆杰
- 关键词：内皮抑素腺病毒转染293细胞
- 女性A型血友病F基因突变分析被引量：2
- 2006年
- 报道罕见的女性A型血友病1例,并对其凝血因子进行基因突变分析。患者,女,65岁,因为跌倒后右胸痛2d入院,院内查体提示胸壁皮下血肿,双下肢等长,髋屈曲及内旋受限。测定凝血指标提示APTT61.3s,正常血浆纠正后为41.3s,而PT、FIB、TT均正常。有既往出血史。F活性为2%,F活性为200%,vWF:Ag为120%,vWF:RCof100%,vWF:CBA128%,F结合分析正常;髋关节X片提示:双侧髋臼发育不良,髋关节骨关节炎。临床诊断为血友病A型。提取该患者外周血DNA,根据NM000132之凝血因子F基因序列设计合成了其第14外显子特异的引物,行聚合酶链反应扩增,并对扩增产物进行测序分析,测序结果与标准序列进行比较,发现该患者出现4111A→C杂合突变,使1314位氨基酸由苏氨酸变为脯氨酸,产生一错意突变,该突变未见其它文献报道。
- 周静闫乃红贾永前卢亦路余江曹桂群陈清英王玲张发强夏庆杰
- 关键词：基因突变女性
- PPAR-γ经其配体激活后对胆管癌细胞侵袭力的影响及相关基因表达的调控
- 2007年
- 目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)经其配体吡咯列酮(pioglitazone,PGZ)激活后,对胆管癌细胞体外侵袭力的影响及机制。方法体外培养人肝门胆管癌细胞系QBC939细胞。实验分为实验组(又分为不同PGZ浓度组)和对照组(无PGZ干预);MTT法检测PGZ对QBC939细胞的增殖抑制率;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PGZ对QBC939细胞基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响;Matrigel侵袭实验和过河实验检测PGZ对QBC939细胞体外侵袭力和运动能力的影响。结果MTT结果显示干预12h、其PGZ5～40μmol/L时,细胞毒性作用不明显(P>0.05)。荧光定量PCR结果显示,PGZ能分别下调和上调MMP-7 mRNA、TIMP-1 mRNA的表达,但TIMP-1 mRNA在实验组和对照组之间的差异无统计学意义。Matrigel侵袭实验和过河实验显示,随着PGZ浓度的升高,透过Matrigel膜的QBC939细胞数减少、过河时间延长,有剂量-效应关系(P<0.01)。结论PPAR-γ经其配体PGZ激活后能抑制QBC939细胞的体外侵袭力,其机制可能与调控MMP-7的表达及抑制细胞运动有关。
- 李敏程南生熊先泽吴良洪陈清英张发强曹桂群
- 关键词：胆管癌过氧化物酶体增殖物激活受体-Γ吡咯列酮侵袭力
- 成都地区HBV基因型分布研究被引量：7
- 2007年
- 目的调查成都地区乙型肝炎患者外周血中乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况。方法以长片段高保真聚合酶链反应(LA-PCR)扩增乙肝病毒S基因区,结合双脱氧链末端终止法(Sanger)测序技术对该地区90例乙型肝炎患者感染的HBV进行基因分型;同时与常用的基因型特异引物扩增分型法获得的分型结果进行比较,做重复试验以证实所用方法的可靠性和准确性。结果S基因直接测序法检测成都地区人群HBV基因分型结果为B基因型57例(63.3%)、C型30例(33.3%),D型3例(3.3%),无其他基因型和混合型;基因型特异引物分型法除榆出23例(25.5%)混合基因型外,其他各例结果均与S基因测序法吻合。结论成都地区HBV优势基因型以B型为主,C型次之,偶见D型。S基因直接测序法能准确鉴定HBV基因型,并较好地反映HBV基因组变化的准种特征,总体上优于型特异引物分型法,此结论具有统计学意义(P<0.001)。
- 卢亦路王玲张发强陈清英夏增亮胡迪夏庆杰
- 关键词：乙型肝炎病毒基因型
- 小鼠肾炎模型的制备及双氢青蒿素对其炎症因子释放的影响被引量：8
- 2011年
- 目的制备小鼠肾炎模型并观察双氢青蒿素(dihydroartemisinine,DHA)对模型小鼠细胞因子肿瘤坏死因子-α(tunor necrosis factor,TNF-α)和白细胞介素-6(inter leukin-6,IL-6)的影响以及小鼠肾脏的病理变化。方法取雄性昆明种小鼠120只,随机分为正常对照组、脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)组、LPS+肾匀浆组及DHA治疗组;分别于12、24、48h取血,酶联免疫吸附试验检测血清中TNF-α和IL-6的含量,苏木精-伊红染色法观察小鼠肾脏的病理变化。结果造模48hLPS+肾匀浆组小鼠肾小球出现炎性细胞浸润,而正常对照组未见异常;LPS组及DHA治疗组仅有轻微的病理改变。LPS刺激使小鼠血清TNF-α和IL-6含量高于正常水平(P<0.01),但有随时间不断下降的趋势;LPS+肾匀浆组较正常对照组TNF-α和IL-6含量升高(P<0.01);DHA可显著下调模型小鼠血清TNF-α的水平(P<0.01),但对IL-6的影响相对较小(P>0.05)。结论运用改良的造模方法LPS+肾匀浆建立肾炎模型效果良好;DHA可以调节模型小鼠炎症因子TNF-α和IL-6的释放,具有一定的改善模型小鼠肾炎症状的作用。
- 吴苹李启杰夏増亮张发强夏庆杰
- 关键词：肾炎模型双氢青蒿素脂多糖肿瘤坏死因子-Α白细胞介素-6小鼠
- 绿色荧光蛋白标记的大鼠胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建及其表达被引量：4
- 2005年
- 目的:构建大鼠胶质细胞源性神经营养因子基因的重组腺病毒并观察其在神经干细胞上的表达,探索胶质细胞源性神经营养因子作为基因治疗神经病变的价值。方法:实验于2004-8/12在四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室进行。以新生SD大鼠大脑皮层细胞RNA为模板,反转录聚合酶链反应扩增出全长的胶质细胞源性神经营养因子基因,经测序验证后,亚克隆至穿梭质粒pAdTrackCMV中,与骨架质粒pAdEasy1同源重组为腺病毒载体。线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达,并用病毒上清转化大鼠神经干细胞,检测胶质细胞源性神经营养因子基因的表达。结果:①胶质细胞源性神经营养因子基因扩增后进行测序显示扩增片段为653bp个核苷酸,同源性比较该序列正确。②重组腺病毒载体经酶切验证为阳性克隆,转染293细胞包装后的病毒滴度为1x109PFU/mL。③转入胶质细胞源性神经营养因子的重组腺病毒的神经干细胞扩增出653bp的带。结论:成功构建了胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒并见其在大鼠神经干细胞中进行了表达。
- 闫乃红陈清英曹桂群卢亦路张发强袁琼兰夏庆杰
- 关键词：神经系统干细胞脑源性神经营养因子
- GnRH-A及其配伍对鲤鱼ZP3基因表达的影响被引量：6
- 2006年
- 运用逆转录实时荧光定量酶链反应(RT-FQ-PCR)技术,研究GnRH-A及其配伍对鱼卵成熟、受精相关基因ZP3的调控。结果显示:3种不同药物配伍分别使鲤鱼ZP3基因表达在给药处理后4、6和12 h达到峰值。提示:不同配伍药物对鱼卵成熟、受精产生影响。ZP3基因可作为促繁殖药筛选的重要指标。
- 宋艳夏庆杰扬松沛胡大芳马世荣张发强闫乃红
- 应用竞争性荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA被引量：2
- 2007年
- 目的:建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR),并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.方法:根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,和一条特异的TaqMan探针;根据上述引物序列,采用分子克隆技术制备内对照DNA;再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针;将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增.结果:在30μL CFQ-PCR反应体系中,加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线;经琼脂糖凝胶电泳分析,加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号;在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本,60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本,后经DNA纯化处理,上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果,其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.结论:CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性,适合临床推广应用.
- 刘蓉李明远张发强夏增亮闫乃红王玲卢亦路夏庆杰陈清英卢军夏军
- 关键词：乙型肝炎病毒假阴性
