张伟然
- 作品数：9 被引量：32H指数：3
- 供职机构：天津医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 芹菜素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞系非P53依赖性凋亡的研究被引量：9
- 2013年
- 目的:探讨芹菜素(Apigenin)对乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡的影响。方法:常规培养MDA-MB-231细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法评价芹菜素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。荧光染色法观察细胞形态学变化。流式细胞术(FCM)Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。Western blot检测不同浓度芹菜素对Caspase-3,PARP,突变型P53,P73,PIG3,Bax,Bcl-2等凋亡相关蛋白表达的影响。RNA干扰技术检测P73对凋亡及下游靶基因PIG3表达的影响。结果:MTT结果显示,芹菜素10、20及40μM分别处理细胞24 h,发现芹菜素可有效抑制MDA-MB-231细胞增殖,且具有浓度依赖性和时间依赖性,实验组与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05),两组组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);荧光染色结果显示,对照组未观察到凋亡细胞,芹菜素10μM、20μM及40μM组细胞中均可见凋亡小体,其数目随芹菜素浓度的增加而逐渐增加,具有浓度依赖性;流式细胞术结果显示,与对照组比较,芹菜素10μM,20μM及40μM组早期凋亡率逐渐增加,呈明显的量效关系,实验组与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,与对照组相比,芹菜素10μM、20μM及40μM组Caspase-3、PARP剪切带含量明显增加,P73、PIG3及Bax表达增加,而突变型P53与Bcl-2表达减少,且具有浓度依赖性。RNA干扰结果显示,与阴性对照组相比,p73-siRNA可有效抑制芹菜素诱导的PIG3表达,Caspase-3和PARP剪切含量也相应降低,实验组与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:芹菜素可通过非P53依赖性凋亡有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,其机制可能与下调突变型p53表达,上调P73介导的PIG3表达,以及Bax/Bcl-2比值增加有关。
- 张伟然张斌刘博文曹旭晨
- 关键词：芹菜素乳腺癌凋亡突变型P53
- 芹菜素诱导乳腺癌MCF-7细胞株蛋白激酶B相关性自噬性死亡被引量：2
- 2013年
- 目的 探讨芹菜素对乳腺癌MCF-7细胞株增殖的影响及其机制.方法 常规培养MCF-7细胞,用噻唑蓝（MTT）法评价芹菜素（0、10、20、40、80 μmol/L）处理乳腺癌MCF-7细胞株24、48 h的增殖抑制率；DNA ladder检测芹菜素（0、10、20、40 μmol/L）处理24 h对MCF-7细胞株凋亡的影响；、丫啶橙（AO）染色观察芹菜素（0、10、20、40μmol/L）处理24 h后MCF-7细胞自噬泡的形态及数量,然后通过流式细胞术对细胞自噬率进行定量分析；Western blot法检测芹菜素（0、10、20、40 μmol/L）处理24 h后自噬相关蛋白LC3、蛋白激酶B（Akt）及其磷酸化水平的变化；Akt cDNA瞬时转染MCF-7细胞,使其过表达,流式细胞术检测细胞自噬率的变化.结果 MTT显示,芹菜素明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,具有浓度依赖性及时间依赖性；DNA ladder并未显示出明显的阶梯状条带,提示芹菜素不能有效的诱导MCF-7细胞凋亡；AO染色显示芹菜素可诱导MCF-7细胞株自噬,且流式细胞术显示细胞自噬率具有浓度依赖性,芹菜素20、40 μmol/L组与对照组比较差异有统计学意义（P ＜0.01）；Western blot显示,芹菜素可增加LC3Ⅱ的表达,同时降低Akt的磷酸化水平；自噬抑制剂3-甲基腺苷（3-MA）可使MCF-7的增殖抑制率降低,与对照组比较,差异有统计学意义（P ＜0.05）；Akt cDNA瞬时转染使Akt的表达明显增加,AO染色流式细胞术结果示Akt的过表达使得自噬率降低,与control cDNA转染组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 芹菜素不能有效地诱导乳腺癌MCF-7细胞株凋亡,而是通过诱导自噬性死亡的方式抑制其增殖,该过程与芹菜素抑制Akt相关通路的活性相关.
- 刘博文张斌张伟然赵洪猛曹旭晨
- 关键词：芹菜素乳腺癌自噬
- 3-甲基腺苷对芹菜素诱导乳腺癌T47D细胞系自噬和凋亡的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:研究自噬抑制剂3-甲基腺苷(3-methylaclenine,3-MA)对芹菜素诱导乳腺癌T47D细胞系自噬和凋亡的影响。方法:常规培养人乳腺癌T47D细胞,分为对照组、3-MA组、芹菜素组、3-MA+芹菜素组。MTT法检测各组的细胞增殖抑制率;GFP-LC3质粒转染观察各组细胞自噬情况;Hochest/Mito-Red/YO-PRO-1染色法观察各组细胞凋亡形态;Annexinv/PI双染法流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;western hlot法检测LC3及PARP的变化。结果:MTT示3-MA+芹菜素组的增殖抑制率明显高于其他各组(P<0.05);GFP-LC3质粒转染结果显示:对照组,3-MA组及3-MA+芹菜素组自噬不明显,而芹菜素组与其他各组相比自噬明显增多(P<0.05);3-MA+芹菜素组的凋亡细胞增多,各组凋亡率分别为(12.73±0.05)%,(18.46±0.03)%,(23.27±0.07)%,(34.14±0.05)%,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,芹菜素组LC3-Ⅱ增高,而3-MA组及3-MA+芹菜素组的LC3-Ⅱ显著减少,3-MA+芹菜素组PARP的剪切带相比其他各组明显增加。结论:自噬抑制剂3-MA抑制细胞自噬后,能够明显增强芹菜素对乳腺癌T47D细胞系的凋亡诱导效应。
- 刘博文张斌张伟然张月冯炜红李媛媛曹旭晨
- 关键词：芹菜素乳腺癌细胞凋亡
- 水通道蛋白3在表皮生长因子诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用机制研究被引量：3
- 2012年
- 目的研究水通道蛋白3(aquaporin3,AQP3)与表皮生长因子(EGF)诱导的乳腺癌细胞迁移之间的关系,并对其可能的机制进行初步探索。方法采用Westernblot法检测4种乳腺癌细胞MDA-MB-231、T47D、MCF-7、ER-ZR-70中的AQP3与EGFR的表达情况,选取高表达的细胞株进行EGF诱导,观察细胞迁移(划痕愈合实验)及AQP3表达的变化。施加CuSO4(AQP3抑制剂)后观察细胞迁移及AQP3表达的变化。为进一步证明EGF通过哪条通路来调节AQP3的表达,采用LY294002(PI3K/AKT通路抑制剂)及U1026(MAPK/ERK1/2通路抑制剂)分别进行阻断,观察AQP3的表达变化。结果 Westernblot检测发现迁移性强的MDA-MB-231细胞具有EGFR和AQP3的高表达。针对此细胞用不同浓度的EGF进行诱导,发现AQP3的反应性表达与伤口愈合程度呈现一致的趋势(r=0.885,P<0.01),采用不同浓度的CuSO4对AQP3的表达进行抑制,MDA-MB-231细胞的伤口愈合程度明显下降(r=0.959,P<0.01)。采用LY294002阻断PI3K/AKT通路后,AQP3表达下降,而U1026作用后AQP3表达无明显变化。结论在乳腺癌细胞中存在AQP3表达;在EGF诱导的乳腺癌细胞迁移中,AQP3的反应性表达起到重要的作用,而EGF可能通过PI3K/AKT通路来调节AQP3的表达。
- 杨泉涌张颖张伟然杨毅牛瑞芳张斌张霖
- 关键词：乳腺肿瘤水通道蛋白3表皮生长因子细胞迁移
- 自噬在肿瘤中的双重作用被引量：5
- 2012年
- 自噬是一种溶酶体降解途径,通过对细胞内变性蛋白或受损细胞器进行降解,以维持细胞内物质循环及代谢调节的稳定。自噬是一把双刃剑,在肿瘤微环境中,自噬既能在不利环境中提高肿瘤细胞对应激的耐受能力,维持其生存,又能在肿瘤发展的不同阶段抑制其产生和转移,甚至成为某些凋亡缺陷肿瘤细胞的死亡途径。此外,自噬的双重作用还表现在癌症治疗过程中。因此,深入探讨自噬在肿瘤中的双重作用有助于为肿瘤防治提供新思路。
- 张伟然张斌曹旭晨
- 关键词：自噬肿瘤
- 芹菜素诱导乳腺癌T47D细胞系p53依赖性凋亡及G2/M期阻滞被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨芹菜素(apigenin)对乳腺癌T47D细胞系凋亡及细胞周期的影响。方法:常规培养T47D细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测芹菜素对乳腺癌T47D细胞系细胞增殖的影响。荧光染色法观察凋亡细胞的形态变化流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布。Western blot检测不同浓度(0、10、20、40、80μM)芹菜素对凋亡及周期相关蛋白表达的影响。结果:随着芹菜素浓度的增加,芹菜素对T47D细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.05);凋亡荧光染色及流式细胞仪显示,芹菜素能够诱导乳腺癌T47D细胞凋亡,随着其浓度的增高,各组凋亡率分别为(2.41±0.072)%、(10.87±0.028)%、(18.02±0.056)%、(37.05±0.092)%和(78.38±0.082)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);流式周期分析显示,芹菜素能够使T47D细胞系G_2/M期阻滞,随着芹菜素浓度的增高,不同浓度组细胞G_2/M期所占的比例逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot显示P53、p21、Bax和p-Cdc2的含量及Caspase-3,PARP剪切明显增加,而Bcl-2、CyclinB1及Cdc2的含量却显著减少。结论:芹菜素能够诱导乳腺癌T47D细胞系p53依赖性凋亡及G_3/M期阻滞,从而明显抑制其增殖、
- 刘博文张斌张月冯炜红李媛媛张伟然曹旭晨
- 关键词：芹菜素乳腺癌细胞凋亡细胞周期
- 双磷酸盐在乳腺癌临床应用研究中的新进展被引量：2
- 2011年
- 双磷酸盐(bisphosphonates,BPs)抑制破骨细胞介导的骨破坏,治疗乳腺癌骨转移疗效确切,成为乳腺癌骨转移的标准治疗。但近来研究结果表明BPs具有直接和间接的抗瘤活性,这使得BPs可能用于乳腺癌辅助治疗预防转移BPs抗瘤效应还可直接诱导凋亡和抑制肿瘤趋化、移动、粘附和侵袭机制,可抑制乳腺癌细胞粘附于骨基质,间接效应还包括抑制内皮细胞增殖、血管生成以及免疫调节功能。此外,含氮BPs还有与细胞毒性药物协同效应,这些实验的结果将有可能为BPs更广泛应于乳腺癌辅助治疗奠定基础。临床数据也证实BPs不仅可以治疗骨转移,而且可以减少乳腺癌术后骨转移和内脏转移的发生,提高总生存率。也有数据提示BPs与化疗有协同作用,甚至有研究认为BPs可降低乳腺癌发生的危险但BPs的临床数据还较有限并且其抗瘤效果尚存争议有几项前瞻性临床试验正在进行以验证新一代BPs唑来磷酸在乳腺癌的抗瘤活性。
- 张斌刘博文张伟然曹旭晨
- 关键词：双磷酸盐乳腺癌
- 基质金属蛋白酶与乳腺癌上皮间充质转化关系的研究进展被引量：2
- 2012年
- 基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是基质降解代谢的主要酶类,能够促进上皮细胞与周围组织分离,乳腺癌细胞及其周围的基质细胞均具有较强分泌MMPs的能力。多项研究表明,MMPs与乳腺癌细胞发生上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)关系密切。随着研究的深入,发现多种黏附分子、生长因子及转录因子可与MMPs发生协同作用,以调控MMPs诱导的EMT。鉴于MMPs在乳腺癌EMT过程中的重要作用,MMPs已成为抗肿瘤治疗的新靶点。目前,临床上对MMPs抑制剂的研究较为广泛,但其疗效却未得到充分肯定,特异性低、副作用大成为此类药物临床推广的一大障碍。深入研究MMPs与乳腺癌EMT的关系及相关机制,将有望为乳腺癌防治提供新思路。
- 张伟然张斌曹旭晨
- 关键词：基质金属蛋白酶上皮间充质转化乳腺癌
- 芹菜素诱导乳腺癌T47D细胞株自噬的研究被引量：4
- 2011年
- 芹菜素是一种植物提取物，广泛存在于水果、蔬菜、豆类和茶叶中。我们以乳腺癌T47D细胞株为研究对象，研究了不同浓度芹菜素处理后T47D细胞自噬水平的变化，探讨其机制。
- 刘博文张斌张月冯炜红李媛媛张伟然曹旭晨
- 关键词：T47D细胞自噬芹菜素细胞株乳腺癌植物提取物
