张伟伟
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- J亚群禽白血病毒gp85基因表达及初步应用被引量：1
- 2011年
- J亚群禽白血病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)的囊膜糖蛋白GP85是亚群特异性抗原。将ALV-J的gp85基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)EcoRⅠ和SalⅠ两个酶切位点之间,经IPTG诱导在大肠杆菌中以His-Tag融合蛋白的形式获得了高效表达,Western blot显示该表达产物具有生物学活性。GP85蛋白经纯化、复性后免疫家兔,制备了抗ALV-J GP85的多克隆抗体。以纯化的蛋白为抗原包被ELISA检测板,对疑似血清样本进行了实验室检测,检出率较高。本研究为ALV-J的诊断和流行病学调查奠定了基础。
- 张伟伟杨宗伟陈宗艳王超李传峰刘光清
- 关键词：囊膜糖蛋白ELISA
- J亚型禽白血病病毒的拯救与鉴定被引量：2
- 2011年
- 为鉴定含J亚群禽白血病病毒(ALV-J)全长cDNA分子克隆(pBlALV)的感染性,首先将pBlALV转染CEF细胞,拯救出病毒(rALV),然后连续传代3次,对拯救病毒进行增殖培养。分别利用RT-PCR、westernblot、IFA等方法,对拯救病毒进行鉴定,并应用实时荧光定量PCR方法对拯救病毒的复制动力学进行了测定。研究结果证明,本研究成功拯救出了具有感染性的rALV-J,为研究禽白血病的致病机理和探讨新的防制措施等提供了良好的ALV的反向遗传操作技术平台。
- 王超缪华先谢宝婵张伟伟吴润刘光清
- 关键词：J亚群禽白血病病毒ALV-J感染性克隆
- J亚群禽白血病病毒的LTR体外启动活性分析被引量：2
- 2011年
- 为分析J亚群禽白血病病毒LTR基因的体外启动活性,将其克隆至含有萤光素酶报告基因的pGL3载体中,构建了LTR重组质粒及其缺失不同区段的重组质粒,转染DF-1细胞测定萤光素酶的表达情况。结果显示,缺失U3时萤光素酶的表达量明显降低,缺失U5时萤光素酶的表达反而上升,这表明U3区可能具有强启动子功能,而U5区可能具有负调控功能。在此基础上,为鉴定LTR各区段是否具有增强子作用,将U3、RU5基因分别插入pGL3-promoter载体,转染DF-1细胞,测定萤光素酶的表达情况。结果显示,含有U3序列的重组质粒萤光素酶的表达量最高,而含有U5序列的重组质粒萤光素酶的表达量很低,表明U3区具有增强子作用,而U5区含有负调控功能。
- 张伟伟王超杨宗伟陈宗艳李传峰刘光清
- 关键词：J亚群禽白血病病毒长末端重复序列强启动子负调控萤光素酶
- J亚型禽白血病病毒抗体检测方法的建立及LTR体外启动活性分析
- J亚群禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus Subgroup J,ALV-J)自上个世纪发现以来,以垂直和水平两种传播形式在世界各国肉种鸡及商品肉用型鸡群中广泛流行,以诱发肿瘤、引起肉种鸡死亡和消瘦为主...
- 张伟伟
- 关键词：禽白血病病毒囊膜糖蛋白长末端重复序列间接ELISA基因启动子
- 文献传递
- 兔出血症病毒感染性克隆的优化被引量：1
- 2011年
- 为避免细胞外转录步骤,使RHDV感染性克隆的转录和病毒拯救过程一步化,试验通过PCR反应在RHDV cDNA序列的5′端添加T7启动子核心序列,3′端添加具有自身切割功能的核酶核心序列.然后,将RHDV基因组的不同cDNA片段装配到pTVT转录载体中,构建了含有RHDV全长cDNA序列的重组质粒pTVT-RHDV.在转染能稳定表达T7RNA聚合酶的BHK细胞后,将收获的细胞培养物感染MA104细胞.分别用逆转录PCR、间接免疫荧光检测以及一步生长曲线等方法对拯救病毒进行了鉴定.结果表明,试验成功拯救出了RHDV,优化了RHDV感染性克隆的构建过程.
- 杨宗伟张伟伟陈宗艳李传峰吴润刘光清
- 关键词：兔出血症病毒病毒拯救全长CDNA
- Ⅰ型鸭肝炎病毒RNA聚合酶基因的克隆及原核表达
- 2011年
- 根据Ⅰ型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV-Ⅰ）ZJ-Ⅴ株基因组序列（GenBank登录号：EF382778）,设计了一对扩增RNA聚合酶基因（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）的特异性引物,以ZJ-Ⅴ株基因组为模板,扩增DHV-Ⅰ的RdRp基因。运用DNAStar软件对ZJ-Ⅴ株病毒与GenBank上已发表的其他不同DHV毒株的RdRp基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,结果表明,ZJ-Ⅴ株与A型DHV-ⅠR85952株（DQ226541）的同源性为97.1%,亲缘关系最近,与2株台湾新型（B型）DHV之间为76.9%和77.0%,与C-GY株和4株韩国新型（C型）DHV株之间为76.2%~76.5%,亲缘关系较远。将RdRp基因克隆至原核表达载体pET-32a（＋）,获得重组表达质粒pET-RdRp,转化宿主菌E.coli BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示RdRp蛋白分子量约为65 kDa,Western blot检测证明RdRp蛋白能与Ⅰ型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应,具有良好的免疫学活性。本文为进一步研究DHV-Ⅰ的复制机理奠定了基础。
- 王超付玉志张伟伟陈宗艳李传峰杨宗伟吴润刘光清
- 关键词：原核表达
