康巧华
- 作品数：21 被引量：51H指数：5
- 供职机构：北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 人细胞核dUTPase的克隆表达及其酶学活性被引量：5
- 2003年
- 以阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)患者脑cDNA文库质粒为模板 ,用PCR方法扩增得到人细胞核dUTP焦磷酸酶 (dUTPase)的cDNA ,将其克隆到谷胱甘肽 S 转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 4T 1中 ,并在大肠杆菌BL2 1中获得高效表达 .表达的融合蛋白GST dUTPase经过谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析 ,凝血酶酶切和SephacrylS 10 0纯化 ,得到高纯度dUTPase蛋白 .通过SDS PAGE ,氨基酸组成分析 ,N端氨基酸序列测定以及HPLC测Mr 结果与期望值一致 .通过检测该酶水解dUTP释放的焦磷酸 (PPi)来测定表达产物dUTPase蛋白及GST dUTPase融合蛋白的酶活性 ,发现两蛋白都具有正常的酶水解dUTP活性 ,但融合蛋白的活性比dUTPase蛋白低 7～ 8倍 .同时研究了Mg2
- 陈巧林任宏伟康巧华王宗元茹炳根
- 关键词：DUTPASE克隆酶学活性
- 酵母双杂交系统检测金属硫蛋白(MT)间的相互作用
- 2002年
- 金属硫蛋白 3(MT 3) ,又称神经生长抑制因子 ,为金属硫蛋白家族中惟一具有生物活性的成员。为了验证其在细胞内是否形成二聚或多聚体 ,构建酵母双杂交系统用于检测。结果表明 :MT 3与MT 3之间在酵母细胞内能发生相互作用 ,进一步用酵母双杂交实验还表明MT 3与MT 1间也存在弱相互作用。由此提示 ,在机体细胞中 ,MT 3可以以同源或异源二聚体的形式存在。
- 康巧华陈巧林刘峰任宏伟茹炳根
- 关键词：金属硫蛋白-3酵母双杂交系统相互作用神经生长抑制因子分子生物学方法
- 人胎盘G-蛋白Rab3a cDNA的克隆
- 2002年
- 为了获取全长的小分子G 蛋白Rab3a ,以用于研究Rab3a与其他蛋白相互作用关系 ,本实验以人胎盘总cDNA为模板 ,PCR扩增到人Rab3acDNA全编码区。产物回收后克隆于质粒pYESTrp2的BamHI XhoI位点 ,测序结果表明 ,本实验获得的Rab3acDNA包含了起始和终止密码子。与PCR引物设计的参照Rab3a比较有 5个核苷酸变异 ,与翻译的氨基酸序列完全一致。
- 康巧华季清洲茹炳根
- 关键词：G-蛋白RAB3ACDNA人胎盘基因克隆氨基酸序列
- G蛋白Rab3a cDNA的克隆与表达被引量：7
- 2002年
- 利用PCR法 ,从人胎盘总cDNA中扩增得到Rab3acDNA的全编码区 .序列分析表明 ,扩增得到的Rab3acDNA有 5个核苷酸发生了变异 ,但翻译的氨基酸与发表的完全一致 .将扩增得到的Rab3acDNA克隆于原核融合表达载体pGEX 4T 1中 ,在E .coliBL2 1中经IPTG诱导表达 .为了进一步鉴定表达产物 ,对纯化后的Rab3a蛋白进行了SDS PAGE、N端氨基酸测序、质谱分子量测定及氨基酸组成分析鉴定 .结果显示 ,表达蛋白的分子量约 2 5kD ,N端氨基酸序列为MASATDSR ,氨基酸组成分析表明 。
- 康巧华陈巧林季清洲任宏伟茹炳根
- 关键词：G蛋白RAB3A克隆
- 金属硫蛋白-3研究进展被引量：5
- 2001年
- 金属硫蛋白－３（ＭＴ－３）是近年来发现的一种脑特异性金属硫蛋白。本文综述了其在分布、蛋白结构及基因调控方面的特点；着重介绍了其在中枢神经系统中的功能及结构与功能关系的研究进展；总结了国外对其与老年性痴呆症的可能关系的研究。
- 康巧华任宏伟茹炳根
- 关键词：金属硫蛋白-3中枢神经系统AD
- 用低G/C%含量引物通过PCR扩增家蝇细胞色素P-450 cDNA被引量：13
- 1998年
- 根据昆虫细胞色素Ｐ－４５０基因的多型性和遗传多态性，以苯巴比妥钠诱导、室内饲养的杀虫剂敏感种群雌性家蝇ＭｕｓｃａｄｏｍｅｓｔｉｃａｖｉｃｉｎａＭａｃｑｕａｒｔ为材料，提取总ＲＮＡ，以Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－纤维素亲和层析分离出总ｍＲＮＡ；以此为模板反转录合成总ｃＤＮＡ。再以总ｃＤＮＡ为模板，以Ｐ－４５０ＣＹＰ６Ａ１ｃＤＮＡ序列为参考设计一对低Ｇ／Ｃ％含量引物，进行ＰＣＲ扩增，获得１．５ｋｂ左右的预期目的片段。
- 康巧华陈年春周顺伍齐顺章
- 关键词：家蝇细胞色素P-450CDNAPCR遗传多态性
- 酵母双杂交系统筛选与GIF相互作用的G-蛋白Rab3a及dUTPase的研究
- 生长抑制因子(growth ynhibitory factor,GIF),又称金属硫蛋(metallothionein-3,MT-3)特异地分布于脑组织,在与Alzheimer's病脑提取物共存的情况下,对神经细胞的生长...
- 任宏伟康巧华陈巧林茹炳根
- 关键词：酵母双杂交系统RAB3A
- 文献传递
- 乙草胺和嗪草酮水基性制剂的研制及其应用被引量：5
- 1999年
- 改变传统的将乙嗪合剂加工成乳油或可湿性粉剂的惯例,研制出一种新型的水基性除草剂———28 % 乙嗪悬乳剂。温室盆栽试验表明,乙草胺与嗪草酮混用对防除某些杂草有互补作用。采用孙云沛法测定表明,两者混用对牛筋草和苘麻有增效作用,对马唐和反枝苋有相加作用。对杂草马唐、藜和反枝苋使用后测定,28 % 乙嗪悬乳剂对玉米、大豆、花生的选择性指数分别为2-57 ,2-28 和2-14 ,2-17 。经1996 ～1998 年田间试验表明,除沙性土壤外,28 % 乙嗪悬乳剂可以在大豆、玉米、花生地作为土壤处理型除草剂安全使用,适宜的剂量为2250 ～3000 g/hm2 ,对一年生单、双子叶杂草的防效在多雨年份可达94-2 % ～99-0 % ,干旱年份可达81-2% ～84-5 % 。并对28% 乙嗪悬乳剂的关键加工技术,物化性能和安全使用技术作了论述。
- 卢向阳方矩生徐筠康巧华
- 关键词：乙草胺嗪草酮除草剂
- 神经生长抑制因子的功能结构域双体研究
- 神经生长抑制因子(Neuronal Growth Inhibitory Factor,GIF)又名金属硫蛋白-Ⅲ(Metallothionein-Ⅲ,MT-Ⅲ),是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白,而...
- 季清洲康巧华周妍娇任宏伟茹炳根
- 文献传递
- 神经生长抑制因子与阿尔茨海默病被引量：1
- 2001年
- 季清洲康巧华茹柄根
- 关键词：神经生长抑制因子阿尔茨海默病Β-淀粉样蛋白锌离子病理
