庞林海
- 作品数：14 被引量：38H指数：2
- 供职机构：浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪附红细胞体快速诊断方法的研究
- 根据GenBank上已报道的猪附红细胞体16S rRNA的序列设计一对特异性引物,进行PCR扩增并将产物克隆到T-vector后测序．结果表明扩增到的目的基因片段为404 bp,与GenBank上Mycoplasma s...
- 杜爱芳侯玉慧赵现锋高翔庞林海
- 关键词：猪附红细胞体PCR流行病学调查敏感性诊断率
- 文献传递
- 秀丽隐杆线虫培养特性与保存方法研究被引量：34
- 2007年
- 秀丽隐杆线虫作为一种模式线虫,已广泛应用于寄生性线虫基因功能的研究以及寄生性线虫疫苗候选抗原基因的表达。通过对秀丽隐杆线虫形态、培养条件以及保存方面的研究,发现秀丽隐杆线虫在16℃NGM培养基中生长良好,将其放入30%甘油溶液中,在-80℃冰箱中可以保存较长的时间。
- 庞林海杜爱芳李孝军侯玉慧高翔
- 关键词：秀丽隐杆线虫
- 鸡柔嫩艾美耳球虫ZJ株TA4基因的克隆及原核表达被引量：2
- 2008年
- 本试验对E. tenella ZJ株的TA4基因进行了克隆和表达。根据已报道的柔嫩艾美尔球虫TA4基因序列设计引物,以孢子化卵囊总RNA为模板,用RT-PCR的方法扩增得到一特异片段,将扩增产物克隆至pMD18-T,转化DH5-α感受态,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99.1%。然后将重组质粒和表达载体pGEX-4T2分别以EcoRⅠ、XhoⅠ酶切后构建重组表达载体pGEX-TA4,并将其转化入大肠杆菌BL21中,提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后,用IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Westernblot检测显示,TA4基因在大肠杆菌中获得表达;融合蛋白的分子量约为43ku,以包涵体形式存在;诱导6h的蛋白表达量可达到35.9%,采用抗GST抗体进行Westernblot,成功检测到了该特异性条带。
- 高翔杜爱芳张娟敏侯玉慧庞林海
- 关键词：柔嫩艾美尔球虫原核表达
- 模式生物——秀丽隐杆线虫表达系统的建立
- 秀丽隐杆线虫学名为Caenorhabditis elegans，简称C.elegans，属于线形动物门、线虫纲动物。秀丽隐杆线虫本身在自然状态下与人类的关系不大，它生活在世界各地的泥土中，以细菌为食，容易人工养殖，对人、...
- 庞林海
- 关键词：秀丽隐杆线虫肌动蛋白启动子绿色荧光蛋白基因克隆
- 文献传递
- pB-Act-EGFP表达载体的构建及不同转基因方法对GFP表达的影响
- 本文比较了不同转基因方法对绿色荧光蛋白基因在秀丽隐杆线虫中的表达效果。将pBluescript SK+表达载体和pcDNA-EGFP载体上的EGFP序列分别经Bam HI和Not I双酶切,连接筛选阳性克隆,并进行酶切鉴...
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- 关键词：秀丽隐杆线虫启动子
- 文献传递
- 猪附红细胞体体外培养方法初步探讨
- 目的:建立稳定可靠、简单易行、成本低的猪附红细胞体体外培养方法,为进一步筛选对猪附红细胞体有效的药物提供载体,也为研究猪附红细胞体的代谢过程、生物学特性和免疫机理奠定基础．方法:从 RPMI-1640、M-199、D-M...
- 杜爱芳侯玉慧赵现锋高翔庞林海
- 关键词：猪附红细胞体体外培养
- 文献传递
- 鸡柔嫩艾美耳球虫ZJ株TA4基因的克隆及原核表达
- 本试验对E．tenella ZJ株的TA4基因进行了克隆和表达。根据已报道的柔嫩艾美尔球虫TA4基因序列设计引物,以孢子化卵囊总RNA为模板,用RT-PCR的方法扩增得到一特异片段,将扩增产物克隆至 pMD18-T转化D...
- 杜爱芳高翔徐慧侯玉慧庞林海孔得翔
- 关键词：柔嫩艾美尔球虫RT-PCR原核表达
- 文献传递
- 秀丽隐杆线虫肌动蛋白启动子Act-1的克隆和分析
- 秀丽隐杆线虫作为一种模式线虫,在进化上与寄生性线虫的关系最近,并且具有线虫的一些保守分子生物学特性,如反式剪接;并且秀丽隐杆线虫是多细胞的有机体,与包括人在内的许多高级生物有一些共同的特征。因而认为选用秀丽隐杆线虫来表达...
- 杜爱芳庞林海周前进侯玉慧高翔
- 关键词：秀丽隐杆线虫启动子克隆
- 文献传递
- 秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis e/egans)培养特性研究(初报)
- 秀丽隐杆线虫作为一种模式线虫,已被应用于寄生性线虫基因的功能研究及寄生性线虫疫苗候选抗原基因的表达。本研究通过对不同温度和培养基中的虫体生长性能的观察,发现秀丽隐杆线虫在16℃NGM 培养基中生长良好,这为进一步研究奠定...
- 杜爱芳庞林海李孝军侯玉慧高翔
- 关键词：秀丽隐杆线虫发育温度
- 文献传递
- 绿色荧光蛋白在秀丽隐杆线虫中的表达被引量：2
- 2008年
- 为探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在秀丽隐杆线虫体内的异源表达,以及电穿孔技术在线虫基因转化中应用的可能性,根据秀丽隐杆线虫Act-1基因序列设计引物,以其基因组DNA为模板,进行PCR扩增,成功扩增出Act-1启动子。将PCR产物与pUCm-T载体连接后,转化至DH5α感受态细胞,筛选出阳性克隆并测序。pEG-FP-N1真核表达载体经双酶切去掉CMV启动子序列,补平自连成载体pEGFP-4.1(4.1kb)。pEGFP-4.1和T载体上的Act-1启动子序列分别经双酶切,连接筛选阳性克隆,并进行酶切鉴定构成pAct-EGFP绿色荧光蛋白表达载体。通过电穿孔法转化秀丽隐杆线虫,通过PCR检测及激光共聚焦显微镜观察发现绿色荧光基因在虫体有明显的表达。
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- 关键词：秀丽隐杆线虫启动子电穿孔法
