庄翠竹
- 作品数：7 被引量：4H指数：2
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- 7-脱氢胆固醇还原酶基因在小鼠胚胎腭突发育中的作用
- 目的:
研究7-脱氢胆固醇还原酶基因(Dhcr7)在小鼠胚胎腭突发育中的表达及表达量变化，Dhcr7表达下调对腭突发育融合的影响，及Dhcr7在腭突发育中参与的音猬因子(Shh)信号通路的研究。
方法:
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- 庄翠竹
- 关键词：腭突器官培养音猬因子
- 文献传递
- 小鼠胚胎腭突体外培养观察
- ＜正＞目的:为研究腭裂易感基因对小鼠腭板发育的影响及其致腭裂发生的机制,建立C57BL/6J小鼠体外培养模型并观察其在体外生长情况。材料与方法:取14.5天C57BL/6J胎鼠的腭突进行体外器官培养,连续培养48h。并分...
- 肖文林庄翠竹马秀兴
- 关键词：腭突小鼠器官培养
- 文献传递
- 小干扰RNA抑制胚胎腭突间充质细胞7-脱氢胆固醇还原酶基因的表达被引量：2
- 2012年
- 目的观察小鼠胚胎腭突间充质（EPM）细胞中7-脱氢胆固醇还原酶基因（Dhcr7）的表达，筛选出针对EPM细胞Dhcr7的最有效小干扰RNA（siRNA）序列。观察RNA干扰（RNAi）沉默Dhcr7的表达后，对EPM细胞增殖的影响。方法化学合成3条针对Dhcr7mRNA的siRNA，阳性脂质体介导转染EPM细胞。荧光显微镜观察转染效率，Westernblot法检测Dhcr7蛋白表达变化，噻唑蓝（MTT）检测沉默后增殖率的变化。结果siRNA转染效率为72．6％。3条siRNA对EPM细胞Dhcr7基因表达都有抑制作用，siRNA-3抑制作用最明显，达60．2％，与阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。Dhcr7沉默后EPM细胞增殖抑制率为56．4％，与阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论筛选出针对EPM细胞Dhcr7最有效的siRNA序列。siRNA可抑制EPM细胞Dhcr7基因表达，Dhcr7表达降低可抑制EPM细胞增殖。
- 庄翠竹马秀兴肖文林张春阳王双义
- 关键词：RNA干扰
- 7-脱氢胆固醇还原酶在腭突发育中的表达被引量：1
- 2014年
- 目的:观察7-脱氢胆固醇还原酶(Dhcr7)基因在小鼠胚胎腭突发育中表达量的变化。方法:在体视显微镜下取E13.5、E14.5和E15.5的小鼠胚胎的腭突,免疫组织化学(IHC)观察Dhcr7蛋白在腭突中的表达定位,逆转录式聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Dhcr7 mRNA的表达变化,Western blot法检测蛋白的表达变化。结果:Dhcr7主要表达在胚胎腭突间充质细胞(EPM);E13.5、E14.5和E15.5 mRNA相对表达量(Dhcr7/β-actin)分别是0.692±0.084、0.595±0.051和0.369±0.061;E13.5与E14.5比较,P>0.05;E13.5、E14.5分别与E15.5比较,P<0.01;蛋白相对表达量(Dhcr7/GAPDH)分别是0.857±0.008、0.840±0.005和0.300±0.007,E13.5与E14.5相比,P>0.05;E15.5分别与E13.5和E14.5相比P<0.01。结论:Dhcr7在腭突发育中的关键阶段有表达,并且表达量与其生长发育有密切关系。
- 庄翠竹肖文林孙桂兰许尧祥岳金薛令法王双义
- 关键词：腭突小鼠胚胎
- 7-脱氢胆固醇还原酶基因沉默对体外培养小鼠腭突融合的影响
- 2015年
- 目的通过RNA干扰抑制7-脱氢胆固醇还原酶(Dhcr7)基因在培养腭突中的表达,研究Dhcr7基因对腭突融合的影响。方法根据C57BL/6J小鼠Dhcr7基因特异性的siRNA序列构建pAdTrack-CMV-siDhcr7,阳性克隆的pAdTrack-CMV-siDhcr7质粒进行体外重组,筛选出抗卡那霉素的重组腺病毒p Ad Easy-1-siDhcr7质粒,酶切后制备腺病毒载体DNA转染胚胎腭突。取妊娠13.5 d的小鼠胚胎腭突共30对随机分为3组,每组10对。正常对照组、空白腺病毒对照组和实验组均用不含胆固醇培养基培养腭突,其中空白腺病毒对照组加入空白腺病毒,实验组加入Dhcr7siRNA腺病毒。培养48 h后固定腭突并提取Dhcr7 mRNA和蛋白,采用扫描电子显微镜(SEM)观察腭突融合情况,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分析Dhcr7 mRNA和蛋白的含量。结果 SEM检测显示,正常对照组和空白腺病毒对照组在培养48 h时两侧腭突融合,形成连续的上腭;而实验组几乎没有生长,两侧腭突之间有很宽的裂隙。RT-PCR和Western blot检测显示,实验组Dhcr7 mRNA和蛋白表达与正常对照组和空白腺病毒对照组相比均明显减少,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Dhcr7基因在腭突中的表达下调后,腭突融合失败,说明Dhcr7基因在腭突正常发育融合中起一定的作用。
- 肖文林庄翠竹时艳许尧祥薛令法
- 关键词：小鼠腭突器官培养基因沉默
- C57BL/6J小鼠胚胎腭突体外培养模型的建立被引量：4
- 2013年
- 目的:建立近交系C57BL/6J小鼠胚胎腭突体外培养模型,为研究胚胎腭突发育提供条件。方法:无菌条件下,在体视显微镜下取怀孕13.5 d(GD13.5)的胚胎腭突,进行培养。分别于培养6、24、48 h后取出固定,行组织切片苏木精-伊红(HE)染色和扫描电镜(SEM)观察,每个时间点分别12对。结果:细胞核染色显示,6 h时,两侧腭突未融合;24 h时,两侧腭突开始融合,但是中间仍有部分腭中嵴上皮(MEE)细胞残留;48 h时,两侧腭突完全融合,中间的MEE完全消失。扫描电镜显示,6 h时,两侧腭突之间有一定裂隙;24 h时,两侧腭突已接触但能观察到腭中缝(MES);48 h时,两侧腭突已完全融合,MES消失。结论:本方法为研究腭裂发病机制提供了一个良好的体外模型。
- 张岱尊庄翠竹肖文林许尧祥王双义
- 关键词：C57BL扫描电镜
- 7-脱氢胆固醇还原酶基因沉默对体外培养腭突音猬基因-骨形成蛋白2信号通路的影响
- 2014年
- 目的 研究沉默7-脱氢胆固醇还原酶（7-dehydrocholesterol reductase,Dhcr-7）表达对体外培养腭突器官中音猬基因（sonic hedgehog,Shh）-骨形成蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP-2）信号通路的影响,探讨Dhcr-7参与腭突发育的信号通路.方法 取60只孕期（gestation day,GD） 13.5d小鼠胚胎根据简单随机抽样法平均分为3组：空白对照组（A组）：不含胆固醇培养基培养腭突;Dhcr-7基因沉默组（B组）：不含胆固醇培养基培养腭突＋Dhcr-7-siRNA腺病毒;添加胆固醇组（C组）;每组各20只.培养48 h后,A、B组更换不含胆固醇培养基,C组更换含有600 mg/L胆固醇培养基.继续培养72 h后,分别将腭突固定,组织染色和扫描电镜观察其形态变化;分别提取腭突RNA和蛋白质,应用反转录-聚合酶链反应（reverse transcriotion-polymerase chain reaction,RT-PCR）和蛋白质印迹法检测Dhcr-7、Shh和BMP-2表达量的变化.结果 组织染色和扫描电镜显示A组及C组腭突能完全融合,B组腭突未融合.Shh和BMP-2在B组的mRNA和蛋白质的表达量随Dhcr-7表达量降低而降低.B组mRNA和蛋白质的表达量Shh为0.063±0.018和0.092±0.065;BMP-2为0.054±0.018和0.049±0.021;A组mRNA和蛋白质的表达量Shh为0.667±0.093和0.639±0.078;BMP-2为0.591±0.043和0.569±0.081.A、B两组Shh和BMP-2的mRNA和蛋白质的表达量差异分别具有统计学意义（P＜0.05）;C组Dhcr-7的mRNA表达量（0.074±0.034）和蛋白质表达量（0.075±0.028）基本无变化,与B组（Dhcr-7的mRNA表达量为0.083±0.045;蛋白质表达量为0.067±0.065）相比,差异无统计学意义（P＞0.05）;RNA和蛋白质的表达量Shh（0.649±0.085和0.608±0.092）和BMP-2（0.578±0.062和0.548±0.065）均明显升高,与B组相比差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 Dhcr-7可影响Shh和BMP-2的表达,Dhcr-7通过Shh-BMP-2信号通路调控腭突发育.
- 张岱尊许尧祥肖文林庄翠竹
- 关键词：腭裂基因沉默
