- 蓝光照射致视网膜色素上皮细胞凋亡途径的研究
- 吕建平蔡善君武志鹏李海辉宫鑫
- 蓝光照射对人视网膜色素上皮细胞钙离子-蛋白激酶C信号通路的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 观察蓝光照射对人视网膜色素上皮细胞钙离子（Ca2-）-蛋白激酶C（PKC）信号通路的影响.方法 体外培养并鉴定人视网膜色素上皮（RPE）细胞,取第4代人RPE细胞随机分组进行实验.采用蛋白免疫印迹法测定培养细胞PKC蛋白表达,检测佛波酯（PMA）和钙磷酸结合蛋白（calphostin C）对PKC活性的影响,确定PMA与calphostin C影响PKC活性的最适宜浓度.采用非放射性核素法测定蓝光照射处理对培养细胞PKC活性的影响.采用20 W,波长450～500 nm医用蓝光灯作为光源,光照强度（2000±500） Lux,照射6h,24 h后终止培养,以此制造体外培养人RPE细胞光损伤.将培养细胞随机分成5个组,即无光照、单纯光照、光照联合硝苯地平、光照联合calphostin C、光照联合PMA组.其中,无光照组不接受光照;单纯光照组仅接受光照;光照联合硝苯地平组接受光照和0.1 mmol/L的硝苯地平;光照联合calphostin C组接受光照和100.0 nmol/L的calphostin C;光照联合PMA组接受光照和100.0 nmol/L的PMA.用乙酰氧基甲基酯Ca2＋荧光探针标记各组培养细胞,激光扫描共焦显微镜测定各组细胞内Ca2＋浓度.比较各组细胞内Ca2＋浓度差异.结果 经鉴定,体外培养人RPE细胞成功.100.0、200.0 nmol/L PMA处理的RPE细胞中PKC蛋白相对表达量高于0.1、1.0、10.0、50.0 nmol/L PMA处理的RPE细胞,差异有统计学意义（F=217.537,P＜0.05）,但100.0、200.0 nmol/L PMA处理组间PKC蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义（P=0.072）.100.0、200.0 nmol/L calphostin C处理的RPE细胞中PKC蛋白相对表达量低于5.0、25.0、50.0、75.0 nmol/L calphostin C处理的RPE细胞,差异有统计学意义（F=164.543,P＜0.05）,但100.0、200.0 nmol/L calphostin C处理组间PKC蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义（P=0.385）.蓝光照射处理后,RPE细胞的PKC活性显著升高,与未接受蓝光照射处理的RPE细胞的PKC活性比较,差异有统计学意义（t=-
- 武志鹏蔡善君吕建平李海辉宫鑫宿罡汪利敏王丽丽
- 关键词：眼损伤病理生理学视网膜色素上皮光刺激
- 蓝光照射致人视网膜色素上皮细胞凋亡的机理探讨
- 目的 探讨蓝光照射致人视网膜色素上皮(RPE)凋亡的细胞机制.方法 根据不同目的,设置不同分组方法.建立体外培养人RPE凋亡模型方法,采用倒置显微镜观察RPE细胞形态;TUNEL法检测细胞凋亡,计算凋亡指数(AI);流式...
- 蔡善君汪利敏武志鹏李海辉宫鑫吕建平王丽丽
- 蓝光致人RPE细胞分泌VEGF及PEDF变化及与Ca2＋-PKC信号通路的关系被引量：8
- 2015年
- 目的 探讨蓝光照射致体外培养人RPE细胞分泌VEGF、色素上皮衍生因子（PEDF）、RPE细胞内三磷酸肌醇（IP3）和二酰甘油（DAG）的浓度变化,分析Ca2＋-蛋白激酶C（PKC）信号通路之间的相互作用.方法 实验研究.将体外培养的第4代人RPE细胞随机分为6个组,A组：无光照组;B组：蓝光光照组;C组：蓝光光照＋PKC激动剂佛波酯（PMA）组;D组：蓝光光照＋PKC抑制剂钙磷酸结合蛋白（Calphostin C）组;E组：蓝光光照＋硝苯地平组;F组：蓝光光照＋钙磷酸结合蛋白组＋硝苯地平组.用（2 000±500）lux蓝光照射体外培养人RPE细胞6h,终止培养24 h,采用ELISA测定各组RPE细胞分泌VEGF、PEDF、RPE细胞内IP3和DAG的浓度,采用流式细胞仪检测A、B及F组细胞的凋亡率.结果 A～E组的VEGF浓度分别为（584.38± 10.66）、（700.70±5.88）、（698.21±6.66）、（623.87±3.12）、（648.30±4.91） ng/L.其中B、C、E组的VEGF浓度高于A组,差异有统计学意义（P=O.002,0.002,0.016）.A～E组的PEDF浓度分别为（75.96±1.70）、（71.82±1.67）、（72.43±0.58）、（86.31＋1.35）、（93.716±1.24） μg/L.其中B、C组PEDF浓度低于A组（P=0.004,0.011）.B组和C组的VEGF/PEDF比值显著高于A组（P=0.008,0.027）,E组和D组的VEGF/PEDF比值低于B组（P=0.016,0.015）.A～E组的IP3浓度分别为（9 108.42±0.74）、（117.23±1.05）、（137.12±2.70）、（139.17±1.39）、（149.60±0.76） μg/L.B、C、D、E组IP3浓度均高于A组（P=0.003,0.007,0.000,0.000）,并且C、D、E组IP3浓度均高于B组（P=0.011,0.000,0.000）.A～E组的DAG浓度分别为（995.47±13.61）、（1070.10±10.07）、（1046.39±7.90）、（1041.12±9.76）、（1273.13±10.89） pmol/L.B、C、D、E组DAG浓度均高于A组（P=0.000,0.000,0.000,0.000）,与B组比较,组DAG的浓度增高（P=0.000）,而C、D组DAG浓度降低（P=0.021,0.007）.A、B和F组的细胞凋亡率分别是（10.26±1.87）％、（25.06±2.66）％和�
- 汪利敏蔡善君武志鹏宫鑫吕建平宿罡王丽丽
- 关键词：光刺激视网膜色素上皮血管内皮生长因子A
- 蓝光照射对人视网膜色素上皮细胞L-型钙通道及细胞内游离钙离子浓度的影响
- 目的：建立人视网膜色素上皮细胞(retinalpigmentepithelium,RPE)蓝光损伤模型,探讨L-型钙通道是否参与蓝光致人RPE细胞光损伤过程,蓝光照射与钙通道中心脏亚型(α1C或Cav1.2)、神经内分泌...
- 宫鑫
- 关键词：光损伤L-型钙通道钙离子浓度蓝光照射人视网膜色素上皮细胞
- 文献传递
- 蓝光所致人视网膜色素上皮细胞损伤与细胞内钙离子含量变化的关系被引量：4
- 2013年
- 背景 对蓝光照射所致视网膜色素上皮（RPE）细胞损伤与细胞内钙离子含量变化关系的深入研究可能对探讨视网膜变性类疾病的发生机制及防治具有重要意义. 目的 建立人RPE细胞蓝光损伤模型,探讨RPE细胞损伤与细胞内钙离子含量变化的关系.方法 将人RPE细胞系培养传代,锥虫蓝染色评估细胞活力.第4代人RPE细胞分别用（2000±500） lx蓝光照射3、6、9、12h,终止细胞培养24 h后,采用TUNEL法检测不同时间点细胞的凋亡情况,确定最适宜的光照度.然后将RPE细胞分为无光照组、光照组、硝苯地平组、光照＋硝苯地平组、（-）BayK8644组、光照＋（-）BayK8644组.除无光照组外,其他各组细胞均用蓝光照射6h,终止细胞培养24h,采用激光扫描共焦显微镜检测细胞内游离钙离子含量,激发光波长为488 nm,发射光波长为505 nm,每组随机选取30个细胞,扫描细胞图像,采用分析软件分析各组细胞内游离钙离子的荧光强度.结果 锥虫蓝染色证实RPE细胞的活力均在90％以上,TUNEL染色和免疫组织化学染色证实光照3h组未见细胞凋亡,而光照后6、9、12h发现不同数量的凋亡细胞.硝苯地平组RPE细胞内游离钙离子荧光强度比无光照组和光照＋硝苯地平组低,差异均有统计学意义（均P=0.000）；光照组、（-）BayK8644组、光照＋（-）BayK8644组RPE细胞内钙离子荧光强度高于无光照组,差异均有统计学意义（均P=0.000）；光照＋硝苯地平组与无光照组相比较,（-）BayK8644组与光照＋（-）BayK8644组比较,差异均无统计学意义（P=0.339、0.410）. 结论 光照度（2000±500）1x、光照6h、终止培养24 h为建立蓝光照射致人RPE细胞损伤模型的最适合条件.蓝光照射所致的人RPE细胞损伤与细胞内游离钙离子含量增加有关.
- 宿罡宫鑫蔡善君李海辉
- 关键词：视网膜色素上皮钙离子细胞内激动剂
- 蓝光照射对人视网膜色素上皮细胞L-型钙通道mRNA表达的影响被引量：2
- 2013年
- 目的观察蓝光照射对人视网膜色素上皮（RPE）细胞L-型钙通道mRNA表达的影响。方法体外培养的第4代人RPE细胞按随机数字表法分为无光照组、光照组、光照＋硝苯地平组和光照＋（-）BayK8644组。（2000±500）LUX蓝光照射6h，终止细胞培养24h。光照前加入硝苯地平和（-）BayK8644，浓度均为1×10^-5mmol／L。荧光定量聚合酶链（PCR）技术检测各组人RPE细胞L-型钙通道α1c亚型、α1D亚型和α1F亚型mRNA的表达。结果荧光定量PCR产物α1C、α1D、α1F和内参8-肌动蛋白的cDNA逆转录PCR扩增产物长度分别为68、157、125、186碱基对，产物的凝胶电泳结果显示扩增条带位置与以上片段相吻合。荧光定量PCR检测结果显示，光照组、光照＋硝苯地平组、光照＋（-）BayK8644组α1CtuRNA的表达均高于无光照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；光照＋硝苯地平组、光照＋（-）BayK8644组α1CmRNA的表达均高于光照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；光照＋（-）BayK8644组α1CmRNA的表达高于光照＋硝苯地平组，差异有统计学意义（P〈0．05）。光照组、光照＋硝苯地平组、光照＋（-）BayK8644组d1DmRNA的表达均高于无光照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）；光照＋（-）BayK8644组α1DmRNA的表达与光照组和光照＋硝苯地平组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；光照＋硝苯地平组与光照组α1DmRNA的表达比较。差异无统计学意义（P〉0．05）。光照组、光照＋硝苯地平组、光照＋（-）BayK8644组α1FmRNA的表达均高于无光照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；光照＋硝苯地平组、光照＋（-）BayK8644组α1FmRNA的表达均高于光照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论蓝光照射可引起人RPE细胞L-型钙通道中α1C、α1D及α1F亚型mRNA表达不同程度的增高；1×10^-5mmol／L硝苯地平不能对抗蓝光对RPE细胞I，型钙
- 宫鑫蔡善君李海辉吕建平伍志鹏宿罡谢兵
- 关键词：光刺激视网膜色素上皮钙通道
- 蓝光对人视网膜色素上皮细胞α1D亚基蛋白表达及分泌VEGF和bFGF的影响被引量：4
- 2014年
- 目的 探讨蓝光对人RPE细胞α1D亚基蛋白表达及分泌VEGF和bFGF的影响.方法 实验研究.培养的人RPE细胞分为对照组;光照组;光照＋硝苯地平组;光照＋（-）BayK8644组.分别用（2 000 ±500）lx蓝光照射6h,终止细胞培养24 h.采用酶联免疫法测定RPE细胞分泌的VEGF和bFGF;Real Time-PCR检测各组RPE细胞L型钙通道中神经内分泌亚型（α1D或CaV1.3） mRNA的表达;免疫印迹（Western blot）法检测α1D亚基的蛋白表达.各组VEGF和bFGF浓度,α1D亚基mRNA及蛋白表达比较采用方差分析,两两比较采用LSD法.α1D亚基蛋白表达量与分泌VEGF及bFGF浓度之间的关系采用相关性分析.结果 （1）4组VEGF和bFGF浓度的总体均数比较有统计学意义（F=99.441、21.310,P=0.000、0.000）.光照组（3 281.51±251.73、1 346.81±62.27）与光照＋（-）Bay K8644组（3 808.01±94.01、1 485.82±108.97） VEGF、bFGF浓度高于对照组（2 401.09±228.07、1 232.42±65.41）,差异有统计学意义（P=0.000,0.000,0.019,0.000）;光照＋（-）Bay K8644组（3 808.01±94.01、1 485.82±108.97）高于光照组（3 281.51±251.73、1 346.81±62.27） （P=0.000,0.006）;光照＋硝苯地平组（1 927.28±143.11、1 149.39±62.99）低于光照组（3 281.51±251.73、1 346.81±62.27） （P=0.000,0.000）.（2）4组α1D亚基mRNA表达总体均数比较有统计学意义（F=50.320,P=0.000）.光照组（210 ±23）、光照＋硝苯地平组（232±14）、光照＋（-）BayK8644组（478±80）α1D mRNA的表达均高于无光照组（100±20）,差异均有统计学意义（P =0.023、0.006、0.010）;光照＋（-）BayK8644组（478±80）高于光照组（210±23）及光照＋硝苯地平组（232±14） （P =0.032、0.039）.（3）4组α1D亚基蛋白表达总体均数比较有统计学意义（F=1 940.363,P=0.000）.光照组（0.974 2±0.014 7）、光照＋（-）Bay K8644组（0.654 9±0.005 0）α1D亚基/βactin吸光度值均高于对照组（0.503 2±0.007 5）,差异有统计学意
- 李海辉蔡善君宫鑫武志鹏吕建平宿罡谢兵
- 关键词：血管内皮生长因子A成纤维细胞生长因子2
- 蓝光照射致人视网膜色素上皮细胞内游离钙离子浓度的变化
- 宫鑫李海辉蔡善君
- 蓝光照射致人视网膜色素上皮细胞线粒体凋亡的途径及机制被引量：9
- 2015年
- 背景 研究已证实蓝光照射可导致视网膜色素上皮细胞（RPE）凋亡,但其机制目前尚不完全清楚. 目的 探讨线粒体凋亡通路是否参与蓝光照射诱导体外培养的人RPE细胞凋亡过程.方法 分离新鲜的供体视网膜,对人RPE细胞进行原代培养和传代,用角蛋白单克隆抗体行细胞鉴定.将体外培养的人RPE细胞分为无光照组、单纯光照组、光照＋硝苯地平组、光照＋钙磷酸结合蛋白C（calphostin C）组、光照＋佛波酯（PMA）组.光照组细胞用（2 000±500） lx的蓝光照射人RPE细胞6h,然后继续培养24 h后终止.采用Western blot法比较两个组间RPE细胞中凋亡相关调控因子bax、bcl-2、bcl-xl的相对表达,以评价蓝光照射对RPE细胞凋亡的影响.光照＋硝苯地平组、光照＋calphostin C组、光照＋PMA组细胞在蓝光照射前1h分别在培养基中加入相应药物,然后以（2 000±500） lx的蓝光照射人RPE细胞6h,并继续培养24 h,采用Westernblot法检测5个组细胞中caspase-9蛋白表达量的变化,观察钙通道和蛋白激酶C（PKC）通路对RPE细胞线粒体的影响.结果 培养的细胞生长良好,细胞质内充满色素颗粒,呈铺路石样排列,对角蛋白呈阳性反应.无光照组和单纯光照组均可见bax、bcl-2及bcl-xl蛋白条带,相对分子质量分别为23 000、26 000和30 000.与无光照组比较,单纯光照组bax、bcl-2和bcl-xl蛋白表达相对值（A）下降,差异均有统计学意义（t=-4.409,P=0.012;t=7.575,P=0.002;t=6.068,P=0.004）.与无光照组比较,单纯光照组、光照＋calphostin C组、光照＋PMA组细胞中caspase-9蛋白表达均升高,差异均有统计学意义（P=0.005、0.002、0.000）,而光照＋硝苯地平组与无光照组比较差异无统计学意义（P=0.191）.与单纯光照组比较,光照＋PMA组caspase-9蛋白表达升高,差异有统计学意义（P=0.005）;而光照＋硝苯地平组及光照＋calphostin C组caspase-9蛋白表达差异均无统计学意义�
- 李红吕建平蔡善君宿罡武志鹏宫鑫
- 关键词：光损伤视网膜色素上皮凋亡线粒体半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
