采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,简称MALDI-TOF-MS)技术对水稻作物的3种主要病原真菌进行分析,以获得稳定的指纹图谱。从菌物预处理方法、基质、点样方法等3个方面进行比较,对影响MALDI-TOF-MS分析结果的主要因素进行优化。结果表明,菌物预处理方法对检测结果的影响最大,热处理法在细胞壁较厚的真菌样品处理中可以获得较完整的生物信息;构建稻粒黑粉病病菌(Tilletia horrida)、稻曲病病菌(Ustilaginoidea virens)、恶苗病病菌(Fusarium moniliforme)的MALDI-TOF-MS鉴定规范化方法,扩充MALDI-TOF-MS指纹图谱数据库,可简便、快速、准确地对细胞壁加厚的真菌样品进行鉴定。
[目的]研究蜂蜜中蛋白质提取的有效方法,优化蜂蜜蛋白电泳条件。[方法]该试验使用丙酮、钨酸钠、硫酸铵、尿素-硫脲4种方法提取蜂蜜中的蛋白并进行比较,然后进行双向电泳分析,对影响双向蛋白电泳的IPG胶条的选择、蛋白质上样量、等电聚焦时间等主要因素进行优化。[结果]试验表明,采用硫脲法提取蜂蜜蛋白获得的蛋白含量最高,硫脲法和丙酮沉淀法获得的蛋白纯度最好,而硫脲法因干扰物质较少、易于裂解适于双向电泳技术,采用硫脲法提取的蜂蜜蛋白选择IPG胶条p H 5~8,蛋白上样量为150μg,等电聚焦时间达到32 000 V·h的情况下能充分地聚焦,获得的双向电泳图谱最佳,优化后的洋槐蜜双向电泳图谱上可检测到326个蛋白点,重复性和分辨率均较好。[结论]蜂蜜类含糖样品中使用硫脲法提取蛋白能减少糖类物质干扰。
目的:建立Illumina Miseq深度测序筛查酸奶中微生物的方法,分析酸奶中微生物的多样性。方法:以9种酸奶样品为研究对象,提取酸奶中细菌基因组DNA,应用高通量测序技术测定细菌的16S r DNA v1-v3变异区序列,得到9种样品中微生物群体分布和丰度、以及不同样品间的菌种差异与进化关系。结果:酸奶中微生物主要为厚壁菌门(Firmicutes),占据99.6%之高,其中厚壁菌门主要以链球菌属(Streptococcus、87.1%)、乳杆菌属(Lactobacillus、10.3%)、乳球菌属(Lactococcus、0.3%)组成,9种酸奶中有3种同时含有链球菌属和乳杆菌属,其余6种样品中链球菌属几乎占据全部(>97%)。结论:Illumina Miseq深度测序技术可快速精确深入掌握酸奶中微生物多样性,结果对比显示不同酸奶菌种同质化程度高,其中链球菌属占绝对优势,同时发现部分酸奶标签标示不符。
