孟会敏
- 作品数：8 被引量：28H指数：3
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省科技支撑计划项目山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向CD19的CAR修饰的NK细胞对B细胞淋巴瘤的杀伤被引量：2
- 2016年
- 目的:利用鼠杂交瘤技术筛选和制备治疗性CD19单克隆抗体,探讨以CD19 scFv序列构建CD19-CAR(p CD19-CAR)修饰的NK细胞对CD19^+B细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用。方法 :用偶联多肽免疫小鼠制备CD19单克隆抗体,然后用基因测序法获得抗体的序列。分析抗体序列,并通过基因合成和分子克隆技术构建pCD19-CAR片段,然后将其克隆到慢病毒载体上,病毒包装制备后,转染NK-92MI细胞。最后,用流式细胞术检测不同的pCD9-CAR-NK-92MI细胞对CD19^+细胞的杀伤率。结果:(1)成功筛出特异性强的CD19单克隆抗体-pCD19;(2)抗体检测结果显示CD19+的Ramos细胞的阳性率为84.3%,Raji为85.6%,与商业化抗体结果相似;(3)被pCD19-CAR修饰的CD19-CAR阳性率为28.72%的NK-92MI细胞对CD19^+的Ramos和Raji细胞的杀伤效率明显高于未被修饰的NK-92MI细胞株对Ramos和Raji细胞的杀伤率[(47.1±1.7)%vs(24.7±6.2)%和(51.8±7.9)%vs(27.6±9.6)%,均P<0.05];对CD19-细胞Jurkat,不论是未被pCD19-CAR修饰的NK-92MI或是被修饰的NK-92MI细胞,几乎都不存在特异性杀伤作用[(16.1±0.7)%vs(17.7±2.9)%,P>0.05]。结论:成功构建pCD19-CAR,被pCD19-CAR修饰的NK-92MI细胞能特异性的识别CD19抗原并杀伤CD19^+B细胞淋巴瘤细胞。
- 袁园秦扬游凤涛陈丹邹建炫朱学军李炳宗袁磊孟会敏张波桢安钢力杨林
- 关键词：CD19B细胞淋巴瘤
- 嵌合抗原受体修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤被引量：3
- 2016年
- 目的:探讨用特异性靶向HER2抗原的嵌合抗原受体(HER2-CAR)修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率。方法:通过PCR获得HER2-CAR片段,运用常规分子克隆技术,将其构建到慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒对NK-92MI细胞进行转染;应用流式细胞术检测细胞转染效率以及转染前后NK-92MI的IFN-γ和颗粒酶分泌差异;使用7-AAD和流式细胞术体外检测HER2-CAR-NK92MI细胞对乳腺癌细胞的杀伤效率;构建小鼠乳腺癌原位肿瘤模型进行体内细胞毒性的检测。结果:用HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌肿瘤细胞MCF-7和T47D的杀伤效率明显高于未被基因修饰的NK-92MI细胞[分别为(62.4±1.3)%vs(22.1±1.2)%和(50.0±1.9)%vs(16.9±0.6)%,P<0.01];而两者对HER2阴性的乳腺癌细胞MDA-MB-468的杀伤效率没有明显差异[(13.6±1.4)%vs(12.7±0.8)%,P>0.05]。同时,经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞相比未被基因修饰的NK-92MI细胞,IFN-γ的分泌明显升高(P<0.01)。结论:经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率明显提高,且具有特异性靶向,此为治疗乳腺癌等恶性肿瘤提供了临床依据。
- 孔潇秦扬李甲璐游凤涛朱学军袁磊孟会敏安钢力杨林
- 关键词：乳腺癌细胞
- 靶向EGFR免疫毒素BI7D12-PE38KDEL的制备及其体外活性测定被引量：3
- 2017年
- 目的:构建基于EGFR纳米抗体的免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,并检测其对EGFR肿瘤细胞的细胞毒作用。方法:采用分子克隆技术,将靶向EGFR的纳米抗体7D12以二价的形式,通过柔性连接肽(G4S)4与铜绿假单胞菌外毒素的截断形式PE38KDEL连接,构建原核表达载体p ET28a-BI7D12-PE38KDEL。然后将其转化到BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达。通过镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,并经Western blot验证。通过流式细胞技术检测该免疫毒素与EGFR阳性细胞A549、HT29、MCF-7和EGFR阴性细胞CEM、Jurkat的结合能力后,将其按照一定的浓度梯度进行细胞毒实验研究,72 h后,使用WST-1试剂检测BI7D12-PE38KDEL对上述细胞的杀伤效果。结果:通过SDS-PAGE和Western blot实验验证,成功的制备了重组免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,该毒素大部分以可溶性的方式表达。BI7D12-PE38KDEL能够与EGFR阳性的A549、HT29、MCF-7肿瘤细胞特异性的结合,并且对上述细胞的细胞毒作用与阴性对照组CEM和Jurkat相比具有极其显著性差异(P<0.01)。结论:成功地构建了基于EGFR纳米抗体的重组免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,该免疫毒素能特异性的结合并杀伤EGFR阳性的肿瘤细胞。
- 毛春燕安钢力王祥岭翟晓晨孟会敏游凤涛杨林
- 关键词：表皮生长因子受体免疫毒素
- 建立改良型人NK细胞体外扩增技术被引量：2
- 2015年
- 目的建立一种改良型的NK细胞扩增技术。方法分离4名健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用工程细胞p APC-mb IL-21和IL-2对NK细胞进行体外扩增,应用细胞计数法和流式细胞术分别比较NK细胞的扩增倍数和NK细胞纯度,并采用CFSE/7-AAD法对肿瘤细胞K562和RPMI-8226进行细胞毒性实验检测杀伤效率。结果经过21 d的刺激培养,NK细胞平均扩增至409.4倍,细胞纯度最高可达95.86%。杀伤实验结果显示,扩增的NK细胞对K562细胞杀伤率高达85.2%。结论 p APC-mb IL-21工程细胞联合IL-2能够在体外高效的扩增出具有较高杀伤活性的NK细胞,可以为NK细胞免疫治疗奠定基础。
- 李亚芬周如苑孟会敏安钢力宗云辉游凤涛张波桢杨林
- 关键词：NK细胞体外扩增IL-21
- 嵌合体抗原受体修饰的T细胞对CD19^+套式淋巴瘤细胞的杀伤被引量：6
- 2015年
- 目的探讨靶向CD19分子的嵌合抗原受体修饰的T细胞(CD19-CAR-T)与未被基因修饰的T细胞相比,是否可以提高对CD19+的套式淋巴瘤细胞的杀伤率。方法通过基因合成和分子克隆手段构建CD19-CAR片段,将CD19-CAR片段克隆到慢病毒载体上,然后用慢病毒对T细胞进行转染。利用PCR、蛋白免疫印迹、流式细胞术检测目的蛋白在T细胞上的表达。最后用流式细胞术检测T细胞对肿瘤细胞的杀伤效果。结果未被基因修饰的T细胞对CD19阳性的Jeko-1、Rec-1、Maver-1细胞的杀伤效率分别为30%、17%和32%,而CAR-T细胞对上述3种肿瘤细胞的杀伤效率分别为78%、60%和75%。未被基因修饰的T细胞对CD19阴性的293T细胞的杀伤效率为13%,CAR-T细胞对293T细胞的杀伤效率为24%。结论经CD19嵌合抗原受体修饰的T细胞可特异性识别CD19分子,对CD19阳性的套式淋巴肿瘤细胞的杀伤效率显著高于未被基因修饰的T细胞,显示出CD19-CAR-T在套式淋巴细胞肿瘤免疫治疗的巨大潜力。
- 姜丽翠游凤涛宗云辉孟会敏安钢力张波桢杨林
- 关键词：T细胞CD19
- 抗人CD138单克隆抗体以及重组双特异性抗体的开发及应用被引量：2
- 2015年
- 目的制备鼠源抗人CD138单克隆抗体,经Western blot验证后,利用其基因序列构建重组抗人CD138抗体以及一种能够同时靶向CD138分子和CD3分子的双特异性抗体并对其功能进行验证。方法通过杂交瘤技术获得鼠源抗人CD138抗体,分子克隆构建重组抗体,Protein A纯化,综合运用Western blot(WB)、Flow cytometry(FC)、ELISA等实验方法进行相关的功能验证。结果鼠源的CD138单克隆抗体特异性强,可用于后续重组抗体的制备,而且重组的抗人CD138单克隆抗体经流式验证,同样可以与表达CD138的肿瘤细胞系(RPMI-8226,U266)进行结合,且不与CD138-的肿瘤细胞系(Jurkat)结合,在此基础上构建的双特异性抗体经功能验证,可以激活T细胞,从而对CD138+的细胞系进行特异杀伤。结论基于鼠源单克隆抗体重组构建表达的双特异性抗体anti-CD138×CD3具有靶向杀伤骨髓瘤细胞的生物活性,为细胞免疫治疗骨髓瘤疾病提供了临床研究基础。
- 陈丹邹建炫宗云辉孟会敏安刚力杨林
- 关键词：多发性骨髓瘤CD138
- PD-1和TIM-3在胃癌病人免疫组织CD3^+T细胞中的表达分析被引量：10
- 2014年
- 目的探讨在胃癌病人外周血、癌旁组织和肿瘤组织中T细胞上PD-1和TIM-3的表达状况及意义。方法应用流式细胞术检测来自胃癌病人外周血、癌旁组织和肿瘤组织及正常供体外周血的CD3+T细胞,分析PD-1和TIM-3的表达水平。结果PD-1和TIM-3在胃癌病人T细胞上表达水平明显高于正常供体。相比胃癌病人外周血,肿瘤组织TIL的PD-1和TIM-3表达水平更高。另外,PD-1和TIM-3的表达水平与胃癌病人的年龄和肿瘤大小存在相关性。通过阻断PD-1和TIM-3信号通路可以增强TIL抗肿瘤细胞毒性。结论 PD-1和TIM-3可能与胃癌的恶变有关。单克隆抗体靶向阻断PD-1和TIM-3通路有希望成为胃癌免疫治疗的新方法。
- 宗云辉何宋兵游凤涛叶思思李亚芬汤金乐孟会敏安钢力张幸鼎杨林
- 关键词：胃癌PD-1TIM-3
- La/SSB嵌合体自体抗体受体修饰的NK92MI细胞靶向性治疗自身免疫性疾病
- 理想上来说，自身免疫性疾病的治疗应该消除致病性的自身免疫细胞而不影响机体正常的保护性免疫功能。但是，可行性的策略一直很难被发现。这里，我们提出在自身抗体介导的自身免疫性疾病中，BCR 识别自身抗原，其可变区发生重排产生只...
- 孟会敏
- 关键词：自身免疫性疾病靶向治疗
