孙汶生
- 作品数：209 被引量：372H指数：9
- 供职机构：山东大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金海外青年学者合作研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学哲学宗教更多>>
- 人破伤风免疫噬菌体抗体库的建立及鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的:建立人破伤风免疫噬菌体抗体库,筛选抗破伤风类毒素的抗体基因,并在大肠杆菌中表达可溶性Fab段。方法:从破伤风类毒素免疫志愿者中分离淋巴细胞,提取细胞总RNA,用一组人IgGFab基因特异性引物,从合成的cDNA中经PCR扩增出抗体轻链(VL+CL)和重链Fd(VH+CH1)基因,分别经XbaⅠ/SacⅠ和SpeⅠ/XhoⅠ酶切克隆入噬菌粒pComb3。用破伤风外毒素作为抗原进行筛选富集获得特异性抗破伤风类毒素的噬菌体抗体,切去噬菌体外壳蛋白基因Ⅲ(gⅢ),表达可溶性人抗破伤风类毒素的Fab段。结果:经核苷酸序列分析证实,所获得的基因为人IgGFab基因;用ELISA鉴定表明,表达的人IgGFab抗体能特异性地与破伤风外毒素结合。结论:利用噬菌体抗体库技术筛选可得到与破伤风外毒素特异性结合的人抗破伤风类毒素基因工程抗体。
- 刘军莉王群张蘋高尚先孙汶生张利宁
- 关键词：破伤风类毒素噬菌体
- PCR-ELISA定量检测as-hTERT对HepG2.2.15细胞端粒酶活性的抑制作用被引量：1
- 2002年
- 目的 :采用PCR ELISA方法探讨人类端粒酶催化亚单位 (hTERT)基因关键区段的反义寡核苷酸 (as hTERT)对HepG2 .2 .1 5细胞端粒酶活性的抑制作用。方法 :通过PCR合成as hTERT及无关对照序列 ,体外作用于HBVDNA转染的HepG2 .2 .1 5细胞 ,用PCR ELISA定量检测反义核酸作用后的端粒酶活性 ,MTT法观察as hTERT对细胞生长的抑制作用 ,ELISA法检测as hTERT对HBsAg和HBeAg表达的影响。结果 :as hTERT作用浓度为 1 0 μmol/L时 ,定量检测端粒酶活性 ,A450 nm值为 0 .42 ,低于无关序列与生理盐水对照的A450 nm值 (分别为 1 .46、1 .49) ,as hTERT可抑制细胞生长 ,对HBsAg和HBeAg的最佳抑制率分别为 76%和5 6%。结论 :as hTERT在体外可明显降低HepG2 .2 .1 5细胞的端粒酶活性 ,抑制细胞的生长 ,并可影响HBV抗原表达。
- 刘素侠孙汶生马春红韩丽辉宋静
- 关键词：反义寡核苷酸类
- 针对HBV调节基因ENⅡ的ASON抑制HBV复制表达的体外研究被引量：2
- 2000年
- 目的 :筛选出高效特异而无毒的抗HBV反义寡核苷酸片段。方法 :以 2 2 15细胞为模型 ,设计合成针对HBVENⅡ的反义硫代寡苷酸 (ASON) ,ELISA法检测ASON对宿主细胞分泌表达HBsAg和HBeAg的抑制作用 ,MTT法检测ASON对细胞增殖代谢的影响。结果 :ASON对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为 92 %和 75 % ,与非互补序列对照组 (抑制率均为 11% )相比差异有显著性意义 (P <0 0 0 1) ,用药前后MTT比色结果和活细胞比率差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论
- 丁培芳孙汶生马春红张志传马京香王潍
- 关键词：乙型肝炎病毒调节基因
- 一种内皮抑素结合物及其制备方法
- 本发明公开了一种内皮抑素结合物及其制备方法，由内皮抑素分子上的自由氨基结合肝素及其盐类或聚乙二醇及其衍生物构成，其中：所述结合肝素及其盐类的内皮抑素分子上的自由氨基的修饰率是1.22％～54.13％；所述结合聚乙二醇及其...
- 王凤山杨盛林王晓燕曹吉超马春红孙汶生谭海宁
- 文献传递
- 多轨学习模式(MPL)的建立及其在医学免疫学教学中的应用
- 教学改革的方案:21世纪是生命科学时代、智能时代和信息时代,高等学校培养的人才不仅要具备扎实的科学基础知识、具有独立获取知识的能力和创新能力;还要有善于抓住机遇,跟踪、占领科技发展前沿的能力。我们在继承传统教学优点的基础...
- 王晓燕高立芬石永玉刘素侠王群韩丽辉朱法良梁晓红王嘉宁张磊赵伟高成江马春红孙汶生张利宁
- 关键词：研究型
- 文献传递
- 刀豆蛋白A活化小鼠巨噬细胞机理的初步探讨被引量：4
- 2003年
- 探讨了刀豆蛋白A(ConA)活化巨噬细胞 (M)的机理。以ConA 5 0 0 μg腹腔注入预处理小鼠 4 8h ,并以PBS作对照 ,免疫组织化学染色法检测诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)的表达 ;分别以原位杂交及流式细胞仪检测NF κBP6 5mRNA与NF κBRelA蛋白的表达 ;RT PCR了解TNF α、IL 1βmRNA的表达情况。ConA刺激后 ,iNOS在胞浆中表达增多 ;ConA处理组NF κBP6 5mRNA及NF κBRelA蛋白的表达均增加 ,RT PCR方法测到TNF α、IL 1βmRNA的表达水平也显著提高 (P <0 0 1)。ConA作用于M时 ,可能通过活化NF κB使iNOS、TNF α及IL 1β表达增强 。
- 高立芬孙汶生刘君炎张利宁曹英林马春红
- 关键词：刀豆蛋白A小鼠巨噬细胞信号传导TNF-ΑIL-1Β诱导型一氧化氮合成酶
- TNF相关凋亡诱导配体对肝癌细胞系生物学活性的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨新型凋亡分子TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人肝癌细胞系的作用及生物学活性的影响。方法:免疫细胞化学法检测HepG2细胞表面膜结合型TRAIL的表达,ELISA法检测HepG2细胞分泌型TRAIL的表达。MTT和TUNEL法分别进行细胞毒实验和凋亡的检测。HepG2细胞内端粒酶的活性由TRAP-PCR法检测,端粒酶催化亚单位hTERT的表达由流式细胞术进行检测。结果:HepG2肝癌细胞系表面组成性表达TRAIL分子,并有适量的sTRAIL呈分泌表达。细胞毒实验显示TRAIL能够显著抑制肝癌细胞的生长,TUNEL检测结果显示TRAIL具有诱导肝癌细胞凋亡的效应。端粒酶的活性检测显示,TRAIL能够有效抑制肝癌细胞系内端粒酶的活性以及端粒酶催化亚单位的表达。结论:TRAIL是一个有效的抑癌分子,能够通过诱导细胞凋亡、抑制端粒酶活性等途径控制肿瘤细胞的生长和进一步杀伤肿瘤细胞。
- 韩丽辉孙汶生刘素侠贾晓青王晓燕马春红高立芬张利宁曹英林
- 关键词：配体肝肿瘤HEPG2细胞
- IFN-γ对TRAIL诱导HBV相关性肝癌细胞凋亡的调节作用被引量：6
- 2003年
- 目的 以转染了HBV全基因组、并稳定表达HBV病毒颗粒的HepG2 .2 .15细胞为细胞模型 ,探讨IFN γ对新型凋亡分子TRAIL(TNF相关的诱导凋亡配体 )诱导凋亡的影响 ,并初步探索其发生机制。方法 以流式细胞仪检测IFN γ和TRAIL作用前后 ,HepG2 .2 .15细胞的凋亡率。分别用流式细胞术和半定量RT PCR的方法检测IFN γ作用 0、6、12和 2 4h后 ,细胞表面膜结合型TRAIL和TRAIL受体mRNA的表达。用HBsAg和HBeAgELISA检测试剂盒测定IFN γ作用 0、6、12和 2 4h后 ,HBV病毒颗粒的分泌表达状况。结果 TRAIL单独作用、IFN γ单独作用、TRAIL和IFN γ联合作用后 ,HepG2 .2 .15细胞的凋亡率分别为 9.12 %、5 .84%和 46 .6 8% ,表明IFN γ可以显著上调TRAIL诱导的细胞凋亡。IFN γ作用后 ,细胞表面膜型TRAIL的表达有显著上调 ,而部分与TRAIL诱导凋亡相关的TRAIL受体的表达也有不同程度的上调 ,并且IFN γ可以抑制HepG2 .2 .15细胞HBV病毒颗粒的分泌。结论 转染HBV全基因组的HepG2 .2 .15细胞对TRAIL诱导的凋亡相对耐受 ,而IFN γ却可以逆转这种耐受 ,使其变得对TRAIL诱导的凋亡敏感。其发生机制可能是通过IFN γ上调细胞表面TRAIL及其受体的表达 ,以及抑制HBV病毒颗粒的分泌实现的。
- 韩丽辉孙汶生马春红刘素侠王晓燕于建国张利宁陈有海
- 关键词：IFN-ΓTRAILHBV肝癌细胞凋亡
- CD137在SLE和RA病人外周血T细胞上的表达特点及意义被引量：9
- 2000年
- 张利宁曹英林赵文璞马春红宋静孙汶生
- 关键词：CD137系统性红斑狼疮T细胞
- 长距离PCR在血友病A携带者检测和产前诊断中的应用被引量：4
- 2004年
- 目的 建立一种重型血友病 A(hemophilia A,HA)携带者检测和产前诊断方法。方法 选择有重型 HA家族史的 2 5例 HA携带者 ,采用长距离 DNA扩增 (long distance- PCR,L D- PCR)技术 ,直接检测是否存在凝血因子 (factor ,F )基因倒位。对 L D- PCR基因诊断阳性携带者于妊娠 2 0～ 2 4周抽取夫妻静脉血和胎儿脐静脉血 ,应用 Bigg's一期法检测血浆凝血因子 F 活性 (F ∶C) ,EL ISA法检测血浆血管性血友病因子 (von Willbrand factor,v WF)浓度 ,进一步应用 L D- PCR技术进行产前诊断。应用DNA测序技术验证 L D- PCR结果。结果 在 2 5个无亲缘关系的重型 HA家系中查出 F 基因倒位携带者 8例 ,其中对 4例 L D- PCR基因诊断阳性的携带者进行了产前诊断 ,2例确诊胎儿为 HA患者而建议终止妊娠 ,另 2名为正常胎儿 ,随访 1年 ,小儿发育正常。结论 应用 L D- PCR技术结合携带者外周静脉血及胎儿脐血血浆 F ∶ C和 v WF∶Ag浓度可准确、快速进行重型 HA患者的诊断及其携带者的产前诊断 。
- 丁培芳王勤友孙汶生张雪芹滕彬申法奎
- 关键词：血友病A产前诊断
