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大鲵病毒性出血病细胞培养灭活疫苗及制备方法和应用: 本发明公开了一种大鲵病毒性出血病细胞培养灭活疫苗及制备方法和应用，其步骤：A．EPC细胞复苏；B．EPC细胞培养，用于扩增大鲵虹彩病毒；C．GSIV病毒扩增：待EPC传代细胞在瓶底铺满时，加入感染的病毒悬液；D．GSIV...; 曾令兵肖汉兵孟彦马杰肖艺周勇高正勇孙建滨; 文献传递

大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：28: 2012年; 利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus,GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1 392 bp的片段,克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-MCP。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pMD19-T-MCP重组质粒,作为标准模板进行TaqMan实时荧光定量PCR扩增,制作标准曲线,建立了大鲵虹彩病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.990 19。组内重复试验的CT值标准偏差为0.52%。检测结果显示,该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性,与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应,特异性好,检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数,约1.1×10-3 pg/μL病毒核酸,较之常规PCR的敏感度高出约1 000倍。研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。; 周勇曾令兵孟彦周群兰张辉高正勇肖艺孙建滨; 关键词：虹彩病毒

大鲵虹彩病毒β-丙内酯灭活方法的研究被引量：17: 2013年; 为探讨β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)灭活大鲵虹彩病毒(Giant salamander iridovirus,GSIV)的最适条件,研究了BPL对GSIV的灭活方法。采用终浓度分别为0.025%、0.05%、0.1%、0.2%的BPL灭活细胞培养的GSIV,4℃条件下分别灭活24 h、48 h、72 h、96 h,通过细菌培养、细胞培养、病毒核酸PCR扩增以及鱼体感染试验进行灭活病毒的安全性检验,确定最适灭活条件。试验结果表明,GSIV经终浓度为0.1%的BPL 4℃灭活处理72 h后可完全灭活病毒,灭活病毒无细菌污染,接种对GSIV敏感的鲤上皮瘤细胞系(EPC)细胞无细胞病变效应(CPE)出现,病毒主衣壳蛋白(MCP)基因特异性引物PCR反应未扩增出靶基因产物,灭活病毒对健康大鲵的感染试验未出现疾病症状。灭活效果检测结果表明,与未灭活GSIV相比较,最适灭活条件下的GSIV结构蛋白与抗原性未发生显著变化。结论显示BPL可用来灭活GSIV,本研究确立了BPL灭活GSIV的最适条件,为大鲵虹彩病毒细胞培养灭活疫苗研究奠定了重要基础。; 孙建滨曾令兵张辉孟彦徐进周勇王芳李瑞伟刘秋凤; 关键词：虹彩病毒灭活

患病黄额闭壳龟中产酸克雷伯菌的分离与鉴定被引量：3: 2012年; 从患病黄额闭壳龟(Cuora galbinifrons)肝脏中分离到一株致病菌HE01,经人工感染健康巴西龟,可复制与自然发病相同的症状,且从人工感染病龟体内再次分离到相同的病原菌。经Biolog微生物自动鉴定系统的鉴定,以及进一步的16 S rDNA基因序列和系统发育分析都表明,此致病菌为产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)。药物敏感性试验表明,该菌株对头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮等10种药物高度敏感。; 周勇曾令兵李瑞伟高正勇孙建滨范玉顶; 关键词：药敏试验

草鱼出血病细胞疫苗微囊制备与体外释放研究被引量：4: 2013年; 以海藻酸钠、壳聚糖以及草鱼出血病细胞灭活疫苗为原材料,采用复凝聚法制备草鱼出血病口服微囊疫苗。通过单因素试验和正交试验,研究了海藻酸钠浓度、壳聚糖浓度、氯化钙浓度以及加入疫苗体积对微囊疫苗包封率的影响,确定了其最佳制备工艺。结果显示,各因素对草鱼出血病微囊疫苗包封率的影响程度由大到小依次为:海藻酸钠浓度>疫苗加入量>壳聚糖浓度>氯化钙浓度;制备草鱼出血病微囊疫苗的最佳工艺为:海藻酸钠浓度为1.5%,壳聚糖浓度为1%,氯化钙浓度为4%,加入疫苗体积为2 mL。该微囊疫苗平均粒径为(7.02±3.95)μm,平均包封率为60.53%,平均载蛋白量为8.12 mg/g,在pH 7.4的PBS溶液、生理盐水溶液中具有良好的释放性能。; 李瑞伟曾令兵张辉肖艺周勇范玉顶刘秋凤孙建滨; 关键词：草鱼出血病细胞疫苗海藻酸钠壳聚糖

大鲵虹彩病毒灭活方法比较与疫苗制备技术研究: 大鲵(Chinese giant salamander, Andrias davidianus)，俗名“娃娃鱼”，是我国珍贵的保护动物与新兴养殖品种。鉴于大鲵极高的经济价值，近几年在陕西、湖南、浙江、湖北等省大鲵人工繁育...; 孙建滨; 关键词：虹彩病毒疫苗制备

大鲵虹彩病毒TaqManreal·timePCR检测方法的建立: 2013年; 利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒（Giantsalamanderiridovirus，GSIV）主要衣壳蛋白（MCP）编码区长度为1392bp的片段，克隆到pMD19-T载体上，构建重组质粒pMD19-T—MCP。经PCR鉴定确认正确后，以10倍梯度稀释pMD19-T—MCP重组质粒，作为标准模板进行TaqMan实时荧光定量PCR扩增，制作标准曲线，建立了大鲵虹彩病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系，且线性范围宽，相关系数为0．99019。组内重复试验的Ct值标准偏差为0．52％。检测结果显示，该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性，与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤鱼上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应，特异性好，检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数，约1．1×10^-3g／μL病毒核酸，较之常规PCR的敏感度高出约1000倍。本研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强，对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。; 周勇曾令兵孟彦周群兰张辉高正勇肖艺孙建滨; 关键词：虹彩病毒

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孙建滨