姜永玮
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：广州市胸科医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人巨细胞病毒部分抗原基因的克隆及表达被引量：3
- 2007年
- 目的克隆表达人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)特异性强的抗原决定簇基因,制备特异性抗原。方法从感染HCMV的细胞上清液中提取病毒基因组DNA,用PCR扩增HCMVpp150(ppUL32)、gp52(UL44)、pp65(ppUL83)、ppUL80a蛋白IgM抗原决定簇编码区DNA序列,将其克隆至pMD-18T载体并测序,然后克隆至表达载体pGEX-4T-1诱导表达,采用免疫印迹法(Western blotting)检测表达产物的抗原性。结果经序列测定各基因片段序列正确,并在pGEX-4T-1表达载体中得到了高效表达,表达的融合蛋白经Western blotting和ELISA分析,具有良好的抗原性,能够与HCMVIgM阳性血清发生特异性反应。结论通过基因工程技术可以有效地获取纯度较高、特异性强的HCMV抗原,为HCMV感染者的早期诊断提供检测用抗原。
- 姜永玮吴英松徐伟文陈跃瑜彭娟李明
- 关键词：人巨细胞病毒IGMPCR
- 人巨细胞病毒部分抗原决定簇基因的克隆、表达及初步应用
- 人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus HCMV)为疱疹病毒科β属的双螺旋DNA病毒，在世界范围内分布。HCMV不仅是人类先天性病毒感染的主要病原，而且是免疫功能低下人群(艾滋病患者、器官移植者、免疫抑...
- 姜永玮
- 关键词：人巨细胞病毒IGM时间分辨荧光免疫分析技术基因克隆
- 文献传递
- 噬菌体生物扩增法测定痰标本结核分枝杆菌利福平耐药性被引量：1
- 2008年
- 目的建立快速测定痰标本中结核分枝杆菌利福平(RFP)耐药性的噬菌体生物扩增法,探讨其在临床应用的可行性。方法噬菌体生物扩增法测定362份涂阳痰标本结核分枝杆菌对RFP的耐药性,并与罗氏绝对浓度法结果进行比较,对不符合的样本,用基因芯片的方法分析rpoB基因的突变情况。结果362份涂阳痰标本,培养阳性360份,菌种初步鉴定有17份样本为非结核分枝杆菌,噬菌体生物扩增法RFP耐药为123份,敏感的196份,两法结果一致的为88.6,如以绝对浓度法药敏结果为标准,则噬菌体生物扩增法测定利福平耐药的敏感性为93.3,特异性为87.9,阴性预测值为96.4,阳性预测值为78.9,准确性为89.7,涂阳等级(1+～3+)与实验的有效性相关。结论噬菌体生物扩增法测定痰标本利福平的耐药性只需2d,可作为快速筛选方法应用于临床。
- 谭耀驹陈虹蔡杏珊姜永玮
- 关键词：分枝杆菌噬菌体微生物敏感性试验利福平
- 结核分枝杆菌耐利福平和异烟肼相关基因快速检测的应用研究被引量：3
- 2008年
- 目的利用DNA芯片检测技术直接检测痰标本中结核分枝杆菌耐利福平（RFP）、异烟肼（INH）相关的耐药基因（rpoB、katG／inhA），评价DNA芯片检测技术临床应用的可行性。方法对586份涂阳痰标本使用L—J培养并用终点法确定其耐药性，同时利用DNA芯片检测技术检测痰标本中结核分枝杆菌的rpoB、katG／inhA常见基因突变位点的突变情况，比对两种方法的检测结果，对不符合的菌株测定其相应DNA序列，评估上述试验的准确性。结果（1）586份涂阳痰标本，其中3（＋）163份、2（＋）204份、1（＋）217份，培养阳性584份。耐药结果显示，对INH、RFP敏感的菌株分别为361株和327株，耐药菌株分别为223株和247株，其中低浓度耐药、高浓度敏感菌株分别为93株和59株，低浓度、高浓度均耐药菌株分别为130株和188株。（2）耐药基因特异性片段扩增阳性标本367份（62．8％）、阴性217份（37．2％）。对INH耐药相关基因（katG／inhA）突变检出率是28．4％，突发发生位点集中在katG315位密码子（89．8％）；对RFP耐药相关基因（rpoB）突变检出率是55．9％（137／247），突变发生位点主要在rpoB531和rpoB526位密码子，发生率分别是68．6％和16．1％。（3）对L-J药敏结果与DNA芯片检测结果不符的菌株进行DNA序列分析，发现有漏检现象。结论DNA芯片技术直接检测样本中结核分枝杆菌的相关耐药基因存在可行性，如直接应用于临床样本检测，关键要解决样本中DNA的提取效率、PCR的扩增效率和试验的质量控制。
- 谭耀驹唐林国陈虹谢贝邝小佳姜永玮
- 关键词：异烟肼利福平核酸杂交
- 降钙素原的克隆、表达及多抗制备被引量：2
- 2007年
- 目的合成降钙素原的全长基因,表达出降钙素原的融合蛋白并制备多抗,为降钙素原(PCT)的功能研究及单抗制备提供有力的实验基础。方法采用多引物人工一步合成基因技术合成降钙素原的全长基因,克隆至原核表达载体pGEX-4T-1表达出重组蛋白,将初步纯化的蛋白免疫小鼠制备多抗并进行Western blot鉴定。结果成功表达降钙素原重组蛋白并制备其多抗,Western blot证实所制备的PCT多抗可与所获得的融合蛋白和病人血清发生特异性反应。结论成功表达降钙素原重组蛋白并制备其多抗,为明确降钙素原来源和病理生理作用的研究奠定了基础,以及为制备其单克隆抗体提供实验材料。
- 陈跃瑜吴英松徐伟文王穗海姜永玮彭娟李明
- 关键词：降钙素原融合蛋白克隆
