周启兵
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划黑龙江省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蛋白激酶SGK2α在大肠杆菌中的表达纯化及抗体制备被引量：1
- 2010年
- 目的该研究通过SGK2α基因的克隆、原核蛋白表达以及纯化,制备抗SGK2α抗体,为进一步研究SGK2α蛋白的生物学功能奠定基础。方法利用原核表达载体PGEX-4T-3构建重组质粒,并在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达;亲和层析法纯化重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔制备抗SGK2α多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价,免疫印迹法检测抗体的特异性。结果构建了PGEX-4T-3-SGK2α原核表达质粒,经原核表达和亲和层析获得GST-SGK2α融合蛋白,蛋白纯度在90%以上;利用GST-SGK2α融合蛋白制备多克隆抗体,抗体效价阳性且具有较强的特异性。结论利用原核表达的GST-SGK2α融合蛋白成功地制备了抗SGK2α多克隆抗体,可用于免疫组织化学和免疫印迹检测以及功能研究。
- 孙晓杰周启兵赵玫李珅吴琦郭红艳黄常志
- 关键词：重组蛋白纯化多克隆抗体
- 外源人gp96基因在肿瘤细胞中的高效表达
- 2002年
- 背景与目的:从肿瘤细胞中分离出的热休克蛋白gp96制备物免疫小鼠可产生抗相应肿瘤的特异性保护性细胞毒性T细胞免疫应答,为肿瘤免疫治疗开辟了一条新的可行性途径。但通常gp96在细胞中的表达水平较低,从有限的细胞或组织中获得的gp96制备物难以满足研究的需要。因此,本研究拟为制备高质量和充足的gp96而建立高表达gp96的单克隆细胞株。方法:构建人gp96cDNA的重组表达质粒pcDNA-hgp96并将其转染HeLa细胞,G418筛选稳定转染的阳性细胞克隆,然后用Western印迹分析单克隆细胞株的gp96表达量。结果:成功构建了人gp96的重组表达质粒,建立了稳定转染的单克隆细胞株,并筛选出一株高表达gp96的单克隆细胞。结论:成功建立了高表达gp96的单克隆细胞株,为gp96抗肿瘤免疫的研究奠定了基础。
- 岳培彬杨树德黄常志赵玫杜菲林梁余权周启兵
- 关键词：热休克蛋白GP96抗肿瘤免疫免疫应答
- 血清和糖皮质激素调节蛋白激酶2α过表达通过Wnt/β-Catenin信号通路抑制肝癌细胞株BEL7402增殖被引量：4
- 2010年
- 血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(SGK)家族参与调节生长因子和激素的信号转导.为了研究SGK家族成员SGK2α在细胞中的功能,构建了真核表达质粒pEGFP-N1-SGK2α并瞬时转染HEK293细胞,通过激光共聚焦显微镜观察发现融合蛋白SGK2α-GFP主要定位于细胞浆,免疫共沉淀实验发现SGK2α与糖原合成激酶3β(GSK3β)存在相互作用.利用PCDNA6-V5-HisB-SGK2α质粒转染肝癌BEL7402细胞,建立稳定表达SGK2α蛋白的细胞系,通过细胞增殖实验发现,SGK2α的过表达使BEL7402细胞生长速度减慢、细胞倍增时间延长.裸鼠成瘤实验发现,与对照组细胞相比表达SGK2α的BEL7402细胞在裸鼠中的成瘤能力明显降低.免疫印迹实验证实,SGK2α的过表达不影响GSK3β的表达,但却使β-catenin和Cyclin D1的表达下调.提示影响Wnt/β-catenin信号通路关键分子的表达可能是外源性SGK2α蛋白过表达抑制BEL7402细胞增殖的分子机制.
- 孙晓杰周启兵赵玫李珅郭红艳吴琦黄常志
- 关键词：肝癌细胞增殖WNT/Β-CATENIN信号通路
