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LC-MS/MS检测血浆中1-磷酸鞘氨醇含量分析方法的建立被引量：1: 2013年; 目的:建立可以快速检测人血浆中1-磷酸鞘氨醇(S1P)的LC-MS/MS定量分析方法。方法:采用C17-S1P作为内参,甲醇一步法进行蛋白沉淀,随后进行正相电喷雾离子化LC-MS/MS分析。流动相为甲醇-0.1%甲酸水(95∶5,v/v),流速0.2ml/min,每个样品的分析时间为4min。结果:对于所有的质控样品,批内和批间精确度均小于12%。测定人血浆S1P的浓度为67.6ng/ml。结论:该方法可以快速、灵敏、特异性地检测血浆中S1P的含量。; 兰天吴腾吴平香黄娟王丽京黄河清; 关键词：血浆 1-磷酸鞘氨醇液质联用

SphK1-S1P信号通路的激活参与糖尿病大鼠肾损伤的研究被引量：7: 2013年; 目的观察鞘氨醇激酶1-1-磷酸鞘氨醇(SphK1-S1P)信号通路在链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏中的激活情况。方法观察STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏中SphK1-S1P信号通路的激活情况。分别检测大鼠肾脏功能及病理指标。采用液质联用分析SphK1活性及S1P含量。并采用免疫组织化学、Real-time PCR和Western blot法检测了SphK1的表达。结果 STZ诱导的糖尿病大鼠血糖、肾重体质量比、24h尿蛋白显著升高,糖尿病大鼠肾脏系膜区肥大,细胞外基质扩展。同时,糖尿病大鼠肾脏中SphK1-S1P信号通路被激活,表现为SphK1表达和活性增加,以及S1P生成增加。结论糖尿病大鼠肾脏中存在SphK1-S1P信号通路的激活,可能参与了糖尿病大鼠肾损伤过程。; 兰天常秀亭勾红菊吴腾王丽京黄河清; 关键词：纤维连接蛋白糖尿病肾病 STZ

SphK1信号通路对高糖诱导的系膜细胞FN表达的影响被引量：1: 2013年; 目的研究阻断鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SphK1)通路对高糖诱导的大鼠系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMC)中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的抑制作用。方法采用RealtimePCR检测SphK mRNA水平;Western blot检测FN的蛋白表达。结果 SphK1抑制剂二甲基鞘氨醇(N,N-Dimethylsphingosine,DMS)显著降低高糖诱导的FN表达;转染SphK1 siRNA可有效消除高糖诱导的FN上调效应。结论 SphK1通路在高糖诱导的肾小球系膜细胞FN表达过程中发挥着重要的调节作用。; 兰天黄凯鹏吴腾勾红菊王丽京黄河清; 关键词：纤维连接蛋白糖尿病肾病系膜细胞

ApoE^(-/-);SAP-Tg小鼠模型的构建被引量：1: 2013年; 目的为研究SAP蛋白在动脉粥样硬化中的作用及机制,拟构建ApoE-/-;SAP-Tg小鼠模型。方法分别选取6~8周龄的雄性ApoE-/-小鼠与血清淀粉样蛋白P转基因(SAP-Tg)6周龄的雌性小鼠杂交,得到的杂交后代以剪尾方式提取基因组DNA,用PCR法检测小鼠的基因型。结果雄性ApoE-/-小鼠与雌性SAP-Tg小鼠杂交得F1代后自交,在F2代获得ApoE-/-;SAP-Tg基因型小鼠,模型构建成功。结论将ApoE-/-小鼠与SAP-Tg小鼠杂交2代后成功建立了ApoE-/-;SAP-Tg小鼠模型,并可通过筛选出的F2代ApoE-/-小鼠和ApoE-/-;SAP-Tg小鼠交配进行繁育筛选工作。; 吴腾邢丽英勾红菊兰天郑凌云顾取良温定文王丽京; 关键词：小鼠

虎杖苷抑制肝星状细胞活化研究被引量：8: 2013年; 目的:研究虎杖苷的抗肝纤维化药理作用。方法:采用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激人肝星状细胞株(LX-2)诱导肝纤维化细胞模型,采用虎杖苷(20μM)进行干预。Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:虎杖苷能显著抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞α-SMA的表达。结论:虎杖苷具有显著改善肝纤维化的作用,有望成为新型的抗肝纤维化药物。; 兰天勾红菊吴腾吴平香王丽京; 关键词：虎杖苷肝纤维化转化生长因子-Β1 Α-平滑肌肌动蛋白

Slit2蛋白对深静脉血栓作用的实验研究被引量：3: 2014年; 目的探讨Slit2过表达对深静脉血栓形成的影响。方法利用Slit2过表达转基因小鼠进行下腔静脉结扎造模,观察血栓形成的情况,测量出血时间、血栓重量长度比,HE染色观察血栓形成的病理形态,并同时设立C57小鼠对照组。结果成功建立了小鼠下腔静脉血栓模型;在造模48h后Slit2过表达转基因小鼠与C57小鼠相比,裸血栓重量长度比明显减小;出血时间延长;Slit2过表达小鼠形成的血栓中白色血栓所占比例较小,而C57小鼠则白色血栓所占比例较大。结论 Slit2过表达能通过抑制白色血栓形成,从而有效抑制深静脉血栓的形成。; 勾红菊王丽京兰天吴腾吴平香顾取良郑凌云温定文丁彦青; 关键词：SLIT2

p110δ突变失活上调血管MMPs表达并引发血管壁结构损伤被引量：2: 2014年; 目的：研究p110δD910A基因突变失活（p110δ-mutant）对动脉血管结构的影响及机制。方法：选取8周龄雄性的野生型（WT）小鼠与p110δ-mutant小鼠（n=20;20-25 g）,取胸主动脉进行石蜡包埋,HE染色,采用免疫组化、免疫荧光以及real-time PCR等方法,研究p110δ突变对小鼠动脉血管形态变化的影响及机制。结果：与WT相比,p110δ突变失活后小鼠主动脉血管壁变薄,管腔变大。p110δ突变失活后主动脉血管壁形态紊乱,弹力纤维局部断裂,血管中内皮细胞凋亡。p110δ突变失活后主动脉血管α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达量、胶原Ⅰ和胶原Ⅳ含量减少。p110δ突变失活后主动脉血管中的基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和MMP-9的mRNA水平明显升高。结论：PI3K活性在维持小鼠动脉血管的正常形态中起重要作用,p110δ突变失活后可能通过上调基质金属蛋白酶的表达促进血管壁结构的破坏。; 邢丽英郑凌云吴玉娥曾翠玲桂亚丽方海燕吴腾王丽京李卫东; 关键词：基质金属蛋白酶

血清淀粉样P蛋白缺失对小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响: 2012年; 目的观察血清淀粉样P蛋白(serum amyloid P component,SAP)缺失对小鼠动脉粥样硬化形成的影响。方法构建载脂蛋白E(Apolipoprotein E)和SAP双基因敲除小鼠(ApoE-/-;SAP-/-)作为实验组,ApoE-/-小鼠作为对照组。2组小鼠各12只,组内雄雌小鼠各半。在小鼠第8周龄时,体质量约20 g,此时开始同时给予2组小鼠高脂饮食,于第16周龄时获取小鼠全血分离得到血清进行血脂分析,处死小鼠后获取其心脏,胸腹主动脉进行油红O染色并进行病理统计。结果双基因敲除小鼠组的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显高于对照小鼠(P<0.01),低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的比值和动脉粥样硬化指数(AI)小于对照组小鼠且差异显著(P<0.01),而总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度无显著性差异(P>0.05);主动脉根部切片和胸腹主动脉的油红O染色结果表明SAP缺失明显减轻了小鼠动脉粥样硬化斑块面积(P<0.01)。结论 AP缺失可能通过上调HDL从而抑制ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成。; 李小强王尽淘桂亚丽唐富天兰天温定文吴腾王丽京; 关键词：高密度脂蛋白动脉粥样硬化

检测生物样品中SphK1活性的LC-MS/MS分析方法的建立: 2013年; 目的建立并确证一种快速、灵敏、高效的测定生物样品中SphK1活性的液质联用(LC-MS/MS)分析方法。方法采用C17-Sph作为底物,通过测定产物C17-S1P的生成量来评价SphK1的活性进行体外酶促反应。终止反应后,生物样品经液-液萃取,真空干燥,复溶,进行LC-MS/MS分析。通过测定产物C17-S1P的生成量来评价SphK1的活性。结果 C17-S1P标准曲线的线性范围为10～1 000 ng mL-1,相关系数r2>0.998,最低检测限(LLOQ)为10 ng mL-1。HEK293细胞转染了野生型SphK(SphKWT)后,SphK1活性显著增加。相反HEK293细胞转染了突变型SphK(SphKG82D)后,SphK1活性接近正常水平。结论该方法能够灵敏快速地测量SphK1活性,为研究SphK1信号通路及其相应靶标药物提供了有效的分析手段。; 兰天吴腾常秀亭勾红菊吴平香黄河清王丽京; 关键词：鞘氨醇激酶 1-磷酸鞘氨醇液质联用

SphK1突变抑制高糖培养的系膜细胞纤维连接蛋白过度表达的研究: 2013年; 目的研究鞘氨醇激酶-1(SphK1)突变是否抑制了高糖培养的系膜细胞中纤维连接蛋白(FN)的过度表达。方法采用Western blot检测FN的表达。结果系膜细胞转染了SphK1突变质粒后可消除高糖诱导的FN上调效应。结论本研究结果证明了SphK1在高糖诱导的系膜细胞FN表达过程中发挥着重要的调节作用。; 兰天吴腾勾红菊黄娟王丽京黄河清; 关键词：纤维连接蛋白系膜细胞

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吴腾

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