吴应积
- 作品数：66 被引量：176H指数：6
- 供职机构：内蒙古大学更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金教育部“春晖计划”国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 滑鼠蛇肝线粒体DNA的限制酶图谱被引量：1
- 1989年
- 用六种限制性内切酶BamHⅠ、EcoRⅠ、PstⅠ、BglⅠ、BglⅡ和SalⅠ对滑鼠蛇肝脏线粒体DNA(mtDNA)进行酶解。发现BglⅡ、PstⅠ、BamHⅠ、BglⅠ和EcoRⅠ在滑鼠蛇肝mtDNA上分别有1、2、3、3和4个切点。SalⅠ不能切割滑鼠蛇肝mtDNA。根据滑鼠蛇肝mtDNA的单酶、双酶完全酶解及部分酶解片段的数目和分子量,建立了滑鼠蛇肝mtDNA的限制酶图谱。
- 吴应积罗进贤
- 关键词：线粒体DNA限制酶图谱
- 用精原干细胞移植技术制作转基因动物的研究前景被引量：10
- 2005年
- 在生物科学、生物医学、畜牧业科学和生物反应器的研究中,转基因动物是非常有用的工具.然而,最常用的制作转基因动物的方法,如原核显微注射和核移植效率都非常低.在最近10年中,研究人员利用精原干细胞移植技术发明了一系列新方法.其中的一些方法一旦与遗传修饰方法相结合,就会形成一套制备转基因动物的新方法.本文综述了与转基因动物制作相关的精原干细胞移植研究成果,如精原干细胞移植技术、精原干细胞的冷冻保存方法、精原干细胞移植受体的准备、精原干细胞的长期增殖和传代培养、精原干细胞的遗传修饰及外源基因的遗传特性等,描述了用精原干细胞移植技术制作转基因动物的一整套方法.根据所用供体和受体的不同,将这种新的转基因动物制作方法分为两类:同种移植法和同体移植法.这一研究领域的进展虽然迅速,但是每一种方法仍然有潜在的困难有待于克服.本文对这些新方法的优点和目前存在的问题进行了探讨.
- 吴应积罗奋华旭日干
- 关键词：精原干细胞睾丸转基因动物哺乳类干细胞移植生物科学
- 用精原干细胞移植技术制作转基因动物的研究前景
- 在生物科学、生物医学、畜牧业科学和生物反应器的研究中,转基因动物是非常有用的工具。有多种方法产生转基因动物。最通用的制作转基因动物的方法是原核显微注射法和核移植法。然而, 这些方法往往效率很低,引起嵌合体(在原核显微注射...
- 吴应积罗奋华旭日干
- 文献传递
- 三索线蛇与过树容蛇肝线粒体DNA的纯化与限制酶图谱
- 1990年
- 用Sepharose 4B凝胶柱过滤和NaCl离心法纯化了三索线蛇及过树容蛇肝线粒体DNA(mtDNA),它们的分子长度分别为17.75kb及19.70kb。分别用EcoRⅠ,XbaⅠ,BamHⅠ及BglⅡ等4种限制酶消化这两种mtDNA,结果表明:EcoRⅠ,XbaⅠ,BamHⅠ和BglⅡ在三索线蛇肝mtDNA上分别有1,1,2及3个切点;在过树容蛇肝mtDNA上各有4,1,1和2个切点。根据mtDNA的单酶、双酶和部份酶解片段的分析,建立了三索线蛇及过树容蛇肝mtDNA的限制酶图谱。
- 罗进贤陈守才吴应积
- 关键词：MTDNA物理图
- 大鼠精原干细胞的高效分离和纯化方法被引量：6
- 2011年
- 精原干细胞是精子发生的基础，是永久分化成精子的克隆源，它既可以自我更新维持体内干细胞的数量，又可以增殖分化形成各阶段的生精细胞直至成熟精子。本文以22～25日龄Wistar．Iamichi大鼠为研究对象，利用两步酶消化法分离得到睾丸曲细精管细胞悬液，根据精原干细胞与曲细精管细胞悬液中体细胞（支持细胞及少量的管周细胞）及各级分化的生精细胞贴壁能力及对细胞外基质粘附力的不同，将大鼠精原干细胞进行纯化。经纯化后，5只大鼠的睾丸可以得到约3×10’个精原干细胞，该精原干细胞在体外培养可形成克隆，并且该克隆可表达精原干细胞特异的标记基因GFRal和CDHl。本文所介绍的高效分离和纯化大鼠精原干细胞的方法，操作简便，且得到的精原干细胞具有很高的活力和增殖能力，该方法为今后大鼠精原干细胞的长期培养及操作研究奠定了基础。
- 张岩罗奋华刘林洪萨初拉于泊洋吴应积
- 关键词：精原干细胞
- 食蟹猴精原干细胞分离纯化及鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的掌握食蟹猴精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养生长特性,建立食蟹猴精原干细胞分离、纯化、培养及初步鉴定的方法。方法经手术获取2岁14天食蟹雄猴单侧睾丸,采用三步酶消化法分离获得单细胞悬液和差异贴壁法富集精原干细胞。将细胞培养于经丝裂酶素C处理的STO细胞层上,使用添加神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、GDNF家族受体α(GFRa1)三种重要生长因子的无血清培养液体外培养,20d后采用CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR对培养的食蟹猴细胞进行SSCs初步鉴定。结果通过差异贴壁法分离纯化富集的SSCs,接种到丝裂霉素C处理的STO饲养层细胞上,第2天开始分裂增殖。用含有生长因子的培养基培养2 d细胞形成小集落,5 d后细胞集落明显。培养20 d后,SSCs呈葡萄串状细胞簇,符合SSCs的形态特征,这些细胞经CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR均呈阳性表达。结论本研究成功建立食蟹猴精原干细胞的分离纯化及鉴定体系。基于STO饲养细胞的添加GDNF、b FGF和GFRa1三种生长因子的无血清培养体系可用于食蟹猴精原干细胞培养,CDH1可作为食蟹猴精原干细胞鉴定的标志物。
- 陈鑫苹许邦发罗奋华张培周红桃蔡俊宏吴应积符生苗
- 关键词：食蟹猴精原干细胞分离纯化免疫荧光染色
- 牛乳腺上皮细胞的分离培养及其生物学特性被引量：55
- 2006年
- 采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择性消化法分离、培养和纯化牛乳腺上皮细胞。形态学观察表明,培养的细胞具有典型的上皮细胞形态特征;染色体分析结果表明,培养的细胞具有正常的染色体数目。通过荧光免疫细胞染色方法鉴定了培养的细胞表达上皮细胞特异的角蛋白5和8。该细胞在添加胰岛素、氢化可的松以及羊催乳素的无血清培养液中诱导培养时,用RT-PCR方法检测到了β-酪蛋白基因的转录。这些结果表明,分离培养的细胞是乳腺上皮细胞,这些细胞在诱导培养的条件下能够转录表达β-酪蛋白。
- 多曙光吴应积罗奋华旭日干
- 关键词：牛乳腺上皮细胞细胞培养核型分析
- 海藻酸微囊法冷冻保存绵羊精原干细胞
- 2013年
- 细胞冷冻保存技术是动物研究的重要组成部分。该研究首次应用海藻酸微囊冷冻保存绵羊精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs),旨在提高绵羊SSCs的冷冻保存效率。冻存前后对绵羊SSCs存活率进行评估,在绵羊SSCs液氮冻存10 d后进行细胞培养和CDH1、PLZF、GFRα1、OCT-4、Thy-1五个精原干细胞特异分子标记蛋白的免疫荧光鉴定。结果表明,在液氮冻存1 d后,绵羊SSCs存活率从58.4%±1.4%(单细胞悬液冻存组)提高到78.7%±1.3%(海藻酸微囊包埋冻存组);液氮冻存10 d后,单细胞悬液冻存组细胞存活率降低至48.1%±0.8%,而海藻酸微囊包埋组细胞存活率仍保持在78.0%±1.5%。对液氮冻存10 d后的细胞进行体外培养,培养4 d后,海藻酸微囊包埋冻存组能形成典型的精原干细胞簇。进行细胞免疫荧光鉴定,发现在微囊包埋冻存10 d后CDH1、PLZF、GFRα1、OCT-4、Thy-1均显示阳性。海藻酸微囊的应用显著提高了绵羊SSCs的冷冻保存效率,且对绵羊SSCs的标记基因表达无显著影响。该方法的建立为其他家畜及濒危动物种质资源保存提供了依据。
- 刘代艳罗奋华孔群芳包佳婧吴应积
- 关键词：冷冻保存活率
- 制备精原干细胞滋养层细胞条件的优化被引量：5
- 2012年
- 目的:优化精原干细胞培养滋养层细胞的制备条件。方法:首先根据文献资料报道和实践经验确定丝裂霉素C作用STO细胞的浓度范围和时间范围,利用双因素优选法缩短丝裂霉素C处理STO细胞的试验范围。然后采用MTT检测法确定丝裂霉素C处理STO细胞的最佳浓度和时间。结果:滋养层细胞处理后不经过冷冻保存的情况下,17.64μg/ml 2 h处理条件的STO细胞在培养14天内细胞数量基本保持稳定,其它处理条件的细胞数量均有所增加;经冷冻保存的情况下,14.72μg/ml 2 h处理条件的STO细胞在培养14天内细胞数量基本保持稳定,其它处理条件的细胞数目均有所降低。结论:滋养层细胞处理后不经过冷冻保存的情况下,17.64μg/ml 2 h的处理条件是丝裂霉素C处理STO细胞的最佳条件;经冷冻保存的情况下,14.72μg/ml 2 h的处理条件是丝裂霉素C处理STO细胞的最佳条件。
- 刘海超张岩于泊洋吴应积
- 关键词：精原干细胞滋养层丝裂霉素CMTT法
- 海藻酸微囊替代DMSO和FBS的STO细胞冷冻保存研究被引量：3
- 2012年
- 目的:改进现有的细胞冷冻保存方法,建立一个不含二甲基亚砜(DMSO)和血清(FBS)的高效冷冻保存方法,为细胞治疗等临床实践提供优质细胞。方法:海藻酸微囊包埋鼠胚成纤维细胞(STO细胞)后用不含DMSO和FBS的冷冻保存液进行冷冻保存。设四个对照组:添加10%DMSO和20%FBS的组、仅添加10%DMSO的组、仅添加20%FBS、DMSO和FBS均不添加组。在冷冻前后对各实验组细胞用台盼兰染色,进行细胞计数,计算细胞存活率,同时利用溴乙锭的二聚物(EthD)、钙黄绿素-AM(Calcein-AM)进行染色观察细胞的形态,且进一步验证细胞存活率;解冻复苏后用MTT法评估细胞的增殖速度和生长活力。结果:冷冻保存30天后对各组的细胞数量、细胞存活率、细胞形态和解冻复苏后细胞的生长活力进行比较发现,海藻酸微囊包埋冷冻组的细胞数、细胞存活率、细胞形态和生长活力均与添加DMSO和FBS的组之间无显著性差异,而与其它三个对照组呈显著性差异。结论:使用海藻酸微囊替代DMSO和FBS保存STO细胞,能有效的维持细胞形态、数量、存活率,同时不影响细胞的生长活力,从而建立了一个不含DMSO和FBS的高效冷冻保存方法。
- 刘代艳于泊洋孔群芳包佳婧刘林洪萨初拉吴应积
- 关键词：胎牛血清冷冻保存
