吕波
- 作品数：10 被引量：29H指数：3
- 供职机构：北京理工大学生命学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- K.pneumoniae XJPD-Li甘油脱水酶dhaBCE基因的克隆及序列分析
- 以肺炎克雷伯氏菌K.pneumoniae XJPD-Li的基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到了目的基因(dhaBCE)并将该基因克隆连接到PET-28a(+)表达载体。通过对该基因的序列分析,甘油脱水酶(dhaBCE...
- 吕波王丽卫徐小琳李春
- 关键词：甘油脱水酶基因克隆肺炎克雷伯氏菌
- 文献传递
- K.pneumoniae XJPD-Li甘油脱水酶高效催化特性的研究
- 利用甘油或葡萄糖等可再生资源为原料生物合成1，3-丙二醇（1，3-PD）具有生产清洁、对环境无污染的“绿色化学”特征，符合21世纪可持续发展的需要。本研究前期筛选的菌株Klebsiella pneumoniae XJPD...
- 吕波
- 关键词：甘油脱水酶基因表达
- 无细胞的合成生物技术—多酶催化与生物合成被引量：7
- 2015年
- 无细胞合成生物技术由于其高度可控及体外代谢途径构建方法多样,能够完成许多体内代谢途径无法完成的工作.其主体思想即体外多酶催化体系的构建,通过模拟生物细胞内的多酶体系,在体外反应系统中加入能进行顺序反应的多种酶,使底物经过顺序的多步反应,一次得到最终产物,使生产过程大大简化.将多酶催化体系进行共固定化,可以实现多酶体系的协同反应和底物通道效应,提高反应效率.未来几年,无细胞合成生物技术有望成为生物燃料、大宗化学品以及医药产品的低成本生物制造平台.
- 许可吕波李春
- 关键词：无细胞共固定化
- 重组β-葡萄糖醛酸苷酶键选择性的半理性改造
- 2015年
- 为了提高Escherichia coli重组表达的β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E)的键选择性,本研究以PGUS-E结构与功能关系的推测为指导,选择了可能影响PGUS-E的键选择性的R329、T369、N467位点进行定点饱和突变,利用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对键选择进行筛选,得到优势突变酶R329K、T369V。结果显示:与PGUS-E酶相比,突变酶R329K、T369V键选择性分别提高26.9%、34.3%。突变酶的酶学性质研究表明,突变酶的最适p H和温度与PGUS-E一致,但其酶催化效率下降。由此可见,R329、T369对酶催化的键选择性和酶的活性有显著影响。综上结果,本文应用饱和突变方法改善了PGUS-E的键选择性,为酶的结构和功能关系理解提供了实验依据。
- 普鸿丽吕波赵东旭李春
- 关键词：Β-葡萄糖醛酸苷酶
- β-葡萄糖醛酸苷酶键选择性高效筛选体系的构建与应用被引量：3
- 2015年
- 分子改造是提高β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E)在生产单葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)过程中的键选择性的有效方法,但高通量筛选方法的缺失是限制其发展的重要瓶颈。为解决该问题,在大肠杆菌中构建了组成型表达β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E),利用温度诱导表达噬菌体裂解酶SRRz实现原位裂解的一锅法(one-pot)甘草酸键选择性筛选体系(CELS);同时考察了启动子强度对PGUS-E外源表达的效果,优化了不同温度下裂解酶SRRz的表达对酶释放效率的影响。结果表明,CELS筛选体系成功实现了集培养、产酶、裂解和反应于一体化工艺,并将其应用于PGUS-E的非理性改造,获得了一系列键选择性显著提高的突变酶。研究证明,TIM桶状结构域中α螺旋结构的变化对甘草酸键选择性的改善有很大的影响。
- 吕波冯旭东李春
- 关键词：Β-葡萄糖醛酸苷酶生物催化分子生物学优化设计
- 重组β-葡萄糖醛酸苷酶转化甘草酸的定向性改造被引量：1
- 2013年
- 为提高重组β-葡萄糖醛酸苷酶的底物特异性,通过易错PCR方法对其进行突变并构建突变体文库,利用薄层层析和高效液相色谱对突变文库进行筛选,获得了突变株PGUS(M51)-E,其底物特异性提高了41%。突变酶的酶学特性研究发现,该突变酶的最适pH值和温度较PGUS-E无显著变化,酶活力下降了16.86%,Tm值提高了5℃;序列分析结果表明:PGUS(M51)-E共发生5处突变,其中3处发生在糖基结合域。因此,利用定向进化策略能有效提高β-葡萄糖醛酸苷酶的底物识别特异性。
- 矫丽媛吕波王金娜李春
- 关键词：Β-葡萄糖醛酸苷酶易错PCR甘草酸底物特异性
- K.pneumoniae XJPD-Li甘油脱水酶基因的定点突变及其性能研究
- 2009年
- 针对菌株K.pneumoniae XJPD-Li高效转化生产1,3-丙二醇的特性,将其甘油脱水酶与已知报道的甘油脱水酶(U60992)的序列比对分析,根据差异位点设计了Nβ47I的定点突变,利用反向PCR定点突变技术构建了甘油脱水酶(dhaBCE)的突变体质粒M1821,并在E.coli BL21(DE3)中高效表达。SDS-PAGE结果显示,诱导表达后在相对分子质量66、24、16KD出现三条特征条带,与预期结果一致。突变体M1821甘油脱水酶的比酶活为38.7U/mg,催化反应最适pH为8.0,最适温度为40℃,与未突变重组甘油脱水酶比较,最适温度降低了约5℃。
- 吕波徐小琳张根林李茜李春
- 关键词：甘油脱水酶定点突变
- 评定育肥羊饲料瘤胃未降解蛋白质中氨基酸的小肠消化率的方法
- 本发明公开了一种评定育肥羊饲料瘤胃未降解蛋白质中氨基酸的小肠消化率的方法，包括如下步骤：将瘤胃未降解残渣封入小肠尼龙袋中，然后置于盐酸胃蛋白酶溶液中培养；每隔15min从十二指肠瘘管放一个经培养后的小肠尼龙袋进入肠道；在...
- 高巍代述均陈傲东吕波
- 文献传递
- 酶分子稳定性改造研究进展被引量：18
- 2016年
- 酶催化转化在食品、医药和精细化工等领域起着越来越重要的作用。然而,目前大多数酶反应需要在较温和的条件下进行以维持其正常活性,而在实际应用的逆境中(如高热、高酸、高盐等),酶的耐受性却较差、容易失活从而导致反应效率下降,极大地限制了其推广和应用。因此,对酶分子进行抗逆改造以提高其稳定性和催化活性,是当前研究的热点也是难点。本文从化学修饰和分子改造两个方面总结了酶分子稳定性改造的新进展,从定向进化、半理性设计、理性设计和糖基化修饰4个角度重点阐述了分子改造提高酶稳定性的方法,重点介绍了糖基化作为一种新的酶分子稳定性改造技术的思路。
- 冯旭东吕波李春
- 关键词：生物化工生物催化稳定性分子改造糖基化
- CNCPS模型在安格斯肉牛育肥上的应用
- 利用康奈尔净碳水化合物-净蛋白质体系（Cornell Net Carbohydrate and Protein System, CNCPS）对肉牛饲料原料的碳水化合物和蛋白质组分进行分析，为新疆西部牧业牛场建立常用饲料营...
- 吕波
- 关键词：饲养管理肉牛育肥
