刘洪坤
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学哲学宗教更多>>
- 畜禽基因组BAC文库构建与保存技术规程
- 本标准规定了畜禽基因组BAC文库构建方法。本标准适用于猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅等畜禽的基因组BAC文库构建与保存。
- 关伟军马月辉刘长青潘春留刘洪坤甫亚斌余露露
- 关键词：家畜家禽基因
- 文献传递
- 北京油鸡α1-AGP基因结构与表达特征研究被引量：3
- 2009年
- 提取北京油鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌等不同组织的总RNA,利用RT-PCR方法检测α1-酸性糖蛋白基因(α1-AGP)mRNA的差异表达。将α1-AGP基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-C1,构建带有GFP报告基因的重组表达载体pEGFP-α1-AGP,将其导入北京油鸡体外培养细胞中,并进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明:α1-AGP基因开放阅读框长度为612bp,编码203个氨基酸,在北京油鸡肝、肺、腿肌和胸肌中有表达;转染后24、48和72h,pEGFP-α1-AGP转染率在31.3%～47.6%之间,绿色荧光主要集中在细胞核中,随着表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状,经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFP-α1-AGP融合蛋白的阳性克隆细胞株,利用RT-PCR与Westernblotting检测确认pEGFP-α1-AGP已整合到北京油鸡成纤维细胞的基因组中,在优化的条件下,阳性细胞凋亡率、形态、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P>0.05)。
- 刘长青郭俣刘帅包阿东陆涛峰刘洪坤关伟军马月辉
- 关键词：北京油鸡荧光蛋白成纤维细胞亚细胞定位
