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PRRS病毒核衣壳蛋白在大肠杆菌中的高效表达被引量：18: 2001年; 用表达非融合蛋白的原核表达载体 p BV2 2 0 ,通过 PCR技术的引物设计对猪繁殖与呼吸综合征( PRRS)病毒 BJ-4株核衣壳蛋白 ( N)基因起始密码子上游进行了改造和修饰 ,成功地构建了含有 PRRS病毒 N基因的原核重组表达载体 p BV-N。 p BV-N转化大肠杆菌 DH5α,温度诱导后菌体裂解物经 SDS-PAGE分析发现 ,在约 1 5 0 0 0处出现 1条诱导前后的 p BV2 2 0载体对照和诱导前的 p BV-N中均缺少的特异性的蛋白条带 ,分子量大小与 PRRS病毒 N蛋白相符 ,并随着诱导时间的延长而变化 ,在诱导后 4 h达到高峰。薄层扫描结果显示 ,重组 N蛋白表达量最多可占菌体总蛋白的 2 7.4 %。 Western-blotting检测 ,此 1 5 0 0 0的蛋白带可为 PRRS病毒 N蛋白的单克隆抗体所识别 ,表明该重组; 高云杨汉春刘平黄陈声郭鑫韩军黄芳芳; 关键词：PRRS病毒核衣壳蛋白原核表达 PBV220 猪繁殖与呼吸综合征 PRRS

一种通过高通量靶向测序实现猪11种腹泻病原同时检测的引物组及其应用: 本发明涉及靶标基因检测的高通量技术领域，尤其涉及一种通过高通量靶向测序实现猪11种腹泻病原同时检测的引物组及其应用。本发明所述的引物组用于扩增病原靶标基因；所述病原靶标基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.197～SEQ...; 王少林左扬周磊高广娟韩军刘园园刘平黄沈张奇沈建忠

一种利用单个B细胞PCR技术生产全猪源单克隆抗体的方法: 本发明公开了一种利用单个B细胞PCR技术生产全猪源单克隆抗体的方法，属于生物技术领域。本发明利用已有的猪抗体基因文库，设计了多套引物，利用套式PCR，从单个B淋巴细胞扩增出抗体可变区基因，进而筛选出具有中和抗体活性的全猪...; 刘平黄符芳薛美冯力; 文献传递

猪IL-21的真核表达及其与CD40L共刺激抗体分泌的活性研究: 2019年; 为研究猪白介素21(IL-21)的生物学功能,本研究在猪IL-21基因(456 bp)的3’端加上猪Ig G Fc标签序列后,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建重组质粒pcDNA-IL-21-Fc。将该重组质粒转染293T细胞瞬时表达后,利用protein A亲和纯化介质纯化转染上清中的目的蛋白,并检测其纯度与生物学活性。结果显示,构建的重组质粒pcDNA-IL-21-Fc能够在293T细胞中表达相对分子量约为44 ku的猪IL-21融合蛋白;亲和纯化后的猪IL-21融合蛋白能够与CD40L协同呈剂量依懒性地刺激猪外周血淋巴细胞(PBMCs)分泌Ig G。本研究为进一步探究猪IL-21在适应性免疫应答中的作用提供依据。; 杨贝贝符芳薛美冯力刘平黄; 关键词：真核表达蛋白纯化抗体分泌

猪NLRC5基因启动子克隆及生物信息学分析: 2021年; 为了构建猪NLR家族含CARD结构域5(NOD-like receptor family caspase recruitment domain family domain-containing 5,NLRC5)基因启动子双荧光素酶报告质粒,确认其活性,进而探索其转录调控机制,试验采用PCR方法从猪睾丸细胞(swine testicular cell,ST细胞)中扩增出猪NLRC5基因启动子,将其与pGL3-Basic载体连接,测序正确后将猪NLRC5基因启动子双荧光素酶报告质粒转染至ST细胞中,通过双荧光素酶报告检测试剂盒检测荧光素酶的表达活性,并使用生物信息学软件预测该基因启动子区域的CpG岛、调控元件及转录因子结合位点。结果表明:试验成功构建猪NLRC5基因启动子双荧光素酶报告质粒,该质粒的相对荧光素酶活性极显著高于pGL3-Basic载体(P<0.01)。NLRC5基因启动子区域中存在2个CpG岛,TATA box、CCAAT box和GC box等多种调控元件,以及IRF1、IRF3、STAT1、STAT3、STAT4和NF-κB转录因子结合位点。说明猪NLRC5基因的表达可能受甲基化的影响,同时也可能受顺式作用元件以及干扰素和NF-κB相关转录因子的调控。; 刘翔尹灵丹薛美李亮赵立媛蒋成凡王文哲冯力刘平黄; 关键词：转录因子结合位点生物信息学

IFITMs在猪肠道冠状病毒感染中的作用: 研究背景和目的 :病毒感染后细胞产生的干扰素诱导激活一系列基因统称为干扰素激活基因(IFN-stimulated genes,ISGs),其中包括宿主的病毒限制因子,如最近发现的细胞限制因子-干扰素诱导跨膜蛋白(Inte...; 刘平黄冯力符芳应兰石达; 文献传递

猪IL-22的原核表达及其活性研究被引量：2: 2016年; 为表达猪白细胞介素22(PoIL-22)并研究其活性,本研究从猪小肠上皮细胞IPEC-J2中扩增出568 bp的PoIL-22编码序列,并以其为模板进一步扩增去除信号肽的PoIL-22 471 bp序列。将该去信号肽基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达了重组蛋白PoIL-22(rPoIL-22),经过Ni-NTA亲和层析纯化。此外,以纯化的rPoIL-22刺激IPEC-J2后,能够上调IPEC-J2表达猪beta防御素2,并表现剂量依赖效应。由此证明本实验中表达的rPoIL-22具有生物学活性。rPoIL-22的制备为进一步研究其在猪粘膜免疫中的作用奠定了基础。; 应兰薛美李麟符芳冯力赵静刘平黄; 关键词：蛋白表达黏膜免疫

怀孕后期感染PRRS病毒母猪所产新生仔猪的免疫反应被引量：7: 2001年; 将PRRS病毒BJ_4株感染怀孕后期 (约 90天 )的抗体阴性和阳性母猪 ,待自然分娩后 ,观察新生仔猪的免疫应答。结果显示 ,接种PRRS病毒BJ_4的母猪没有表现出明显的临床症状 ,没有出现流产死产。新生仔猪哺初乳前血清中PRRS病毒核酸RT_PCR检测和ELISA抗体阴性 ,哺乳后特异性抗体出现 ,5～ 6周后母源抗体逐渐下降 ;2 0日龄猪瘟疫苗免疫后疫苗抗体维持时间短 ,仔猪在 40日龄后进入野毒感染的危险期。RT_nestedPCR检测血清中PRRS病毒核酸和易感仔猪病毒特异性抗体监测的结果提示仔猪群内可能存在水平传播。流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群发现CD3+ 细胞减少 ,CD4+ 细胞显著下降 ,CD8+ ,CD4+ CD8+ 和SLA_DR+ 表达细胞升高。以上结果表明在感染后病毒能够长期持续性存在 ,猪场内新生仔猪母源抗体逐渐下降后 ,通过水平传播受到感染 ,感染后免疫应答受到不利影响。; 李华杨汉春刘平黄陈艳红; 关键词：PRRS病毒新生仔猪淋巴细胞亚群孕期感染

检测犬免疫球蛋白G的夹心ELISA方法的建立: 2016年; 为建立犬免疫球蛋白G(Ig G)的检测方法,本研究以兔抗犬Ig G Fc段多克隆抗体为包被抗体,过氧化酶标记的兔抗犬Ig G(全分子)多克隆抗体为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA定量检测方法,并采用Protein A方法从犬血清中纯化犬Ig G作为ELISA检测标准品。该检测方法与小鼠、兔、马、牛、鸡及羊常见动物血清均无交叉反应,特异性好;最低检测下限可以达到4.8 ng/m L,敏感性较高。以本研究建立的ELISA方法检测犬细小阳性血清和阴性血清,阳性血清Ig G含量明显高于阴性血清;检测转染犬源化抗体序列重组质粒的细胞培养液上清,重组质粒在96 h表达量达到峰值。本研究为进一步建立稳定表达犬源化抗体的细胞系提供了特异性的定量检测方法。; 王正阳刘平黄梁琳陈建飞吕世明崔尚金; 关键词：双抗体夹心ELISA

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刘平黄