刘帅
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目上海市教育委员会创新基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组杆状病毒载体介导钠碘转运体基因在胰岛细胞中表达的研究
- 2013年
- 目的探讨以杆状病毒为载体,钠碘同向转运体(NIS)基因作为报告基因监测胰岛细胞的可行性。方法通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备绿色荧光蛋白(GFP)和NIS基因重组杆状病毒(Bac-GFP和Bac-NIS)。分别以不同感染复数(MOI)的Bac-GFP感染大鼠胰岛细胞,荧光显微镜观察胰岛细胞的感染百分比和荧光表达强度;以MOI为40的Bac-GFP感染胰岛细胞,荧光显微镜下观察荧光表达时间及细胞生存状态。以不同MOI的Bac-NIS感染胰岛细胞,测定感染细胞的碘摄取情况;以MOI为40的Bac-NIS感染胰岛细胞,动态观察感染细胞摄碘能力的变化以及高氯酸钠(NaClO4)对细胞摄碘的影响。结果 Bac-GFP可高效感染SD大鼠胰岛细胞,对细胞无毒性作用;感染的胰岛细胞百分比和荧光强度随MOI的提高而上升,细胞感染百分比可高达95%以上(MOI=40),且荧光表达时间可持续2周左右。Bac-NIS感染的胰岛细胞表现出摄碘功能增强和NaClO4抑制摄碘的特性,且感染细胞摄碘的放射性计数随MOI的提高而增加;MOI为40时,Bac-NIS感染细胞摄碘的放射性计数是空白对照的12倍。结论杆状病毒介导的NIS基因在胰岛细胞中高效表达,有效介导放射性碘摄取,可用对胰岛细胞移植情况的监测。
- 刘帅潘昱张一帆
- 关键词：杆状病毒钠碘同向转运体胰岛细胞报告基因
- 胰岛β细胞的分子核医学显像进展被引量：1
- 2010年
- 糖尿病是严重威胁人类健康的常见病和多发病.糖尿病主要是由于胰岛β细胞选择性破坏或胰岛e细胞分泌胰岛素迟缓和胰岛素抵抗而使胰岛素相对不足所致.β细胞的数量只有减少50%～60%时才会出现相关的症状.由于胰腺位置较深,β细胞含量少,目前临床诊断主要采用有创性方法,且难于进行早期诊断.因此,通过无创性的方法进行β细胞相关代谢疾病的早期诊断,越来越受到人们的关注,影像学诊断也就成了关注焦点,但是如何进行β细胞数量和功能的评估仍是目前影像学诊断面临的重要课题.
- 乌海飞尹红燕刘帅张一帆
- 关键词：糖尿病胰岛素分泌细胞正电子发射断层显像术
- 钠碘转运体应用于人下咽鳞癌显像和诊断的可行性研究被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨杆状病毒介导的人钠碘转运体(human sodium/iodine symporter,hNIS)应用于人下咽鳞癌显像和诊断的可行性。方法:通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统包装分别含GFP和hNIS的重组杆状病毒(Bac-GFP和Bac-hNIS),用流式细胞仪检测Bac-GFP对人下咽癌细胞(FaDu)的转导效率,并用间接免疫荧光检测hNIS在FaDu细胞中的定位。进行hNIS介导的碘摄取、动态摄碘和NaClO4碘摄取抑制实验,并检测共转染了Bac-GFP和Bac-hNIS的FaDu细胞中的荧光强度和放射性计数。结果:在丁酸钠的作用下,Bac-GFP在感染复数为400时,对FaDu细胞的转导效率可达95.16%;hNIS可准确定位于FaDu细胞膜上,具备摄碘功能;放射性计数与荧光强度间呈线性正相关(相关系数为0.943),可通过放射性计数的变化来反映荧光强度的变化。结论:杆状病毒对FaDu细胞具有高转导效率,Bac-hNIS可有效介导FaDu细胞的碘摄取,hNIS可用于人下咽鳞癌的显像和诊断。
- 王建章刘帅王俊张美丽王安琪张一帆李彪蔡昌枰王士礼
- 关键词：钠碘转运体杆状病毒显像
- 胰岛β细胞放射性核素分子显像研究进展
- 2013年
- 糖尿病是严重威胁人类健康的常见病和多发病,胰岛素替代治疗是其主要的治疗手段。近年来,胰岛β细胞移植治疗1型糖尿病展示出潜在的应用前景,但如何在活体条件下无创地进行胰岛β细胞移植的监测,是目前临床应用所面临的重要问题。放射性核素分子显像技术近年来得到了快速发展,具有灵敏度高、特异性强等特点,在胰岛β细胞移植监测方面得到了广泛应用,展示了良好的应用前景。
- 刘帅张一帆
- 关键词：糖尿病分子显像
- 双启动子共表达杆状病毒载体的构建和鉴定
- 2013年
- 目的 探讨双启动子共表达杆状病毒载体作为双基因传递载体的可行性.方法 利用分子克隆技术将分别由巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）启动子介导下的增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）和胶质细胞源形神经生长因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）克隆到pFastBac Dual载体中,得到重组质粒pFastBac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF,并利用Lipofectamine 2000将其转染到HEK293T细胞,通过间接免疫荧光法检测EGFP和GDNF的表达情况.按照Bac-to-Bac杆状病毒表达系统手册进行杆状病毒的包装,将获得的重组病毒Bac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF转导Hela细胞,通过间接免疫荧光法和Western blot检测EGFP和GDNF的表达情况.结果 重组质粒pFastBac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF成功构建；重组病毒Bac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF成功包装；EGFP和GDNF实现了在293T细胞中和Hela细胞中的共表达.结论 pFastBac Dual载体为一个有效的双基因传递载体,为多基因联合治疗提供了一个强有力的病毒载体.
- 王建章王俊张美丽王安琪蔡昌枰王士礼张一帆李彪刘帅
- 关键词：杆状病毒双启动子共表达
- 杆状病毒载体介导钠碘转运体基因放射治疗肝癌的实验研究
- 2012年
- 目的探讨以杆状病毒为载体、钠碘转运体(NIS)基因介导131I放射治疗肝细胞癌的可行性。方法通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备重组的绿色荧光蛋白(GFP)和NIS基因杆状病毒(Bac-GFP和Bac-NIS)。采用流式细胞仪检测在有无丁酸钠条件下HepG2细胞的感染效率和荧光表达强度,以及在高感染复数(MOI)杆状病毒条件下对HepG2细胞的毒性。进行Bac-NIS感染HepG2细胞的动态摄碘实验和高氯酸钠(NaClO4)摄碘抑制实验,以及Bac-NIS感染HepG2细胞的131I杀伤细胞克隆形成实验。结果 HepG2的感染效率和荧光强度随着Bac-GFP MOI的增加而增加,Bac-GFP对HepG2具有较高的感染效率(MOI=200时,感染效率为65%),丁酸钠可进一步提高HepG2的感染效率。在高MOI(MOI=400)条件下,未见Bac-GFP对HepG2的细胞毒性作用,与对照组(MOI=0)比较差异无统计学意义(P>0.05)。Bac-NIS感染的HepG2细胞表现出摄碘功能和NaClO4抑制的特性。细胞克隆形成实验表明,Bac-NIS感染的HepG2细胞克隆存活率明显低于Bac-GFP感染的HepG2细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Bac-NIS可有效介导肝癌细胞的碘摄取,高效杀伤肿瘤细胞,为肝癌细胞的靶向基因放射治疗提供了实验基础。
- 乌海飞刘帅潘昱周翔尹红燕李彪江旭峰张一帆
- 关键词：杆状病毒钠碘同向转运体肝细胞癌基因治疗
