刘宏 作品数:204 被引量:352 H指数:10 供职机构: 第三军医大学西南医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 第三军医大学西南医院临床创新基金 重庆市应用基础研究项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 生物学 建筑科学 更多>>
构建肿瘤坏死因子-α免疫微球的实验研究 被引量:2 2005年 前瞻性构建肿瘤坏死因子-α免疫微球,以期为将来进一步研究能应用于特异性清除TNF-α的血液净化方法,奠定实验基础。采用以PSM为载体,依次包被PLL及rHTNF-αM cA b的方法而制备的免疫微球,分别以异硫氰酸荧光素标记,应用倒置显微镜及荧光显微镜观察、分光光度计测定等方法,探讨吸附微球的包被条件。结果显示,20℃、pH 9.5、60 m in三者为PLL包被PSM的最佳条件。包被后的洗脱液检测结果显示PLL含量无明显变化,说明PLL在PSM表面包被较为牢固。在相同温度及包被时间内,应用浓度为0.2%的戊二醛溶液进行的rHTNF-αM cA b对PLL的包被结合牢固。实验表明,所构建的肿瘤坏死因子-α免疫微球,达到了预期的目的,可以作为一种新颖的免疫吸附材料。该方法简单,价格便宜,为相关实验研究提供了一种崭新方法。 王勤 吴雄飞 王军霞 刘宏 李敛 金锡御关键词:肿瘤坏死因子-Α 聚苯乙烯 多聚赖氨酸 大鼠内皮祖细胞的分离培养与鉴定 被引量:10 2007年 目的 研究大鼠骨髓来源的内皮祖细胞的分离培养和鉴定方法.方法 纤维连接蛋白提前包被培养瓶和培养板中的盖玻片.密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓单个核细胞,EGM-2完全培养基,贴壁法,37℃, 5%CO2,饱和湿度的恒温培养箱中原代培养.部分培养瓶细胞消化后计数.其余培养瓶和培养板中盖玻片细胞继续培养,细胞近融合时传代,分别在第6、9、12和24天进行细胞鉴定.内皮祖细胞鉴定:免疫细胞化学的vWF和VEGFR-2染色;内吞DiI标记的乙酰低密度脂蛋白(DiI-AcLDL)和结合FITC标记的荆豆凝集素-1(FITC-UEA-1)的激光共聚焦显微镜观察.结果 培养细胞的形态学改变:骨髓单个核细胞种植24h后部分细胞开始贴壁、变大,倒置显微镜下贴壁细胞透亮度增强,并逐渐伸出伪足样突起,呈小杆状或梭形.培养第3天贴壁细胞开始增殖,呈"集落"样生长,外周梭形细胞较多.第6天梭形细胞显著增多,培养至第12天左右,梭形细胞首尾相连,呈“毛细血管”样排列.培养第6天的细胞数量级为10^6~10^7/瓶.内皮祖细胞的鉴定:激光共聚焦显微镜观察显示细胞DiI-acLDL和FITC-UEA呈红绿免疫双荧光阳性.培养第6天细胞VEGFR-2和vWF免疫细胞化学染色呈阳性.结论 大鼠的骨髓单个核细胞可以培养为内皮祖细胞,且数量级达到10^6~10^7,可以满足动物实验研究的需要. 赵洪雯 余荣杰 李敛 刘宏 干磊 吴雄飞 曾玲关键词:内皮祖细胞 西南医院亲体肾移植供受者亲属关系的认证总结 本文总结本院在亲体肾移植工作中对供、受者亲属关系的认证方面的经验。在目前供肾极度短缺的情况下,亲体供肾是尸体肾移植的重要补充。但在巨大经济得益的驱使下,仍有不少违法分子伪装亲属关系,进行器官买卖。因而要求进行亲体肾移植的... 刘宏 李敛 周强 蔡治涛 李翌 吴雄飞关键词:亲体肾移植 亲属关系 供受者 文献传递 供肾活检对亲体肾移植供体肾功能保护的价值评估 被引量:5 2008年 目的观察供肾切除术中活检对供者潜在肾脏疾病诊断及术后制订肾功能保护措施的价值。方法2006年3月~2007年12月共收治54例供肾捐赠者,分别于术前通过血红蛋白、尿常规、血肌酐、血糖、超声、肾功能显像、CT血管成像评估其肾脏情况。取肾术中于阻断肾血管前采用16G自动活检枪行移植肾活检,肾活检标本行常规及免疫病理检查。结果54例供者术前检查均未发现明显肾脏疾病征象,分肾肾小球滤过率(GFR)(44.5±5.1)mL/min;术中肾活检发现肾脏病理改变6例,其中3例为IgA肾病,2例为FSGS样改变,1例有节段性新月体。结论移植术中供肾活检有利于发现常规无创检查难以发现的供肾潜在肾脏疾病,便于移植术后供、受者有针对性的治疗和疾病预防,供者术前肾穿刺活检病理对供肾选择具有重要参考意义。 刘宏 李敛 余荣杰 赵洪雯 吴雄飞关键词:亲体肾移植 肾活检 供体 反义α肌动蛋白基因腺病毒载体转染5/6肾切除大鼠抑制肾纤维化进展的研究 2008年 目的观察大鼠血管平滑肌α肌动蛋白基因反义腺病毒载体(pAdanti-α-SMA)转染5/6肾切除大鼠对其肾脏纤维化进程的影响。方法建立pAdanti-α-SMA转染5/6肾切除大鼠模型。实验分组,A组:正常对照;B组:5/6肾切除大鼠;C组:pAdanti-α-SMA转染的5/6肾切除大鼠。统计20周后存活率及血肌酐,行肾脏病理检查和肾脏损伤指数评分,行α-SMA、TGF-β1、PDGF-BB的免疫组化并用Tiger920图像分析仪做半定量分析。结果各组存活率为95.0%、58.8%、82.9%;各组平均血肌酐为:39.74、132.57、88.65;各组肾损伤总指数:0.79、16.91、1.43;各组α-SMA+细胞Tiger920图像分析仪结果:1.22、1.81、1.37。结论pAdanti-α-SMA转染可延缓大鼠肾脏纤维化进程。 干磊 李敛 赵洪雯 刘宏 吴亿 吴雄飞关键词:腺病毒 5/6肾切除大鼠 核因子-κB对ApoE^(-/-)小鼠肾动脉粥样硬化斑块破裂肾损害的实验研究 被引量:3 2008年 目的探讨核转录因子-κB(NF-κBp65)在ApoE-/-小鼠肾动脉粥样硬化斑块破裂肾损害发生中的作用及其对细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达和单核巨噬细胞浸润的影响。方法采用ApoE-/-小鼠制作动脉粥样硬化性肾动脉狭窄动物模型。选择肾动脉粥样硬化斑块造成肾动脉狭窄程度小于50%的ApoE-/-小鼠,按斑块分为:破裂组和未破裂组;选择同条件喂养的C57BL/6J野生型小鼠为对照组。取各组肾动脉及肾脏:采用免疫印迹(Western blot)法检测NF-κBp65及ICAM-1表达;采用免疫组化法检测单核巨噬细胞(F4/80)表达。结果(1)无论在血液、肾动脉及肾脏组织中,NF-κBp65在破裂组明显高于未破裂组(P<0.05),而未破裂组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);(2)ICAM-1、F4/80的表达变化与NF-κBp65的趋势相同。结论肾动脉粥样硬化斑块发生破裂,首先是动脉炎症引起,继而波及到下游的肾脏发生炎症性损害。NF-κB的活化在其中占有重要地位。 黄朝晖 赵洪雯 刘宏 吴雄飞 王汉民关键词:动脉粥样硬化斑块 核转录因子 黏附分子 免疫金银染色观察缺血再灌注损伤后肾小管整合素α3分布改变 2002年 目的 观察在体缺血再灌注损伤对肾小管上皮细胞整合素α3分布的影响。方法 采用整合素α3抗血清 ,对比使用常规免疫组化和免疫金银染色。结果 免疫金银法染色显示 ,正常肾小管上皮细胞整合素α3仅于细胞基底侧极性分布 ,再灌注后细胞顶端出现整合素α3银染颗粒。结论 再灌注后肾小管整合素α3出现由基底侧向顶端的弥散 ,这一改变有可能对上皮细胞的脱落和小管梗阻产生影响。 刘宏 吴雄飞 金锡御关键词:免疫金银法 整合素 移植肾切除可逆转移植肾功能衰竭患者的促红细胞生成素抵抗 被引量:1 2008年 目的研究移植肾切除对移植肾功能衰竭患者促红细胞生成素(EPO)抵抗的治疗作用。方法以移植肾功能衰竭进行规律性血液透析的患者为观察对象,在移植肾切除术前、术后采用EPO及补充造血原料治疗肾性贫血,检测患者血红蛋白、C反应蛋白、血清肌酐、血清铁蛋白水平。结果规律性透析患者移植肾切除术前采用EPO治疗3月血红蛋白水平改变不明显,血清C反应蛋白显著高于正常;移植肾切除后3月血红蛋白升高明显,血清C反应蛋白恢复正常,血红蛋白水平改变与C反应蛋白呈明显负相关。结论移植肾切除可逆转移植肾功能衰竭患者EPO抵抗,改善肾性贫血。 刘宏 李敛 余荣杰 赵洪雯 吴雄飞关键词:促红细胞生成素抵抗 C反应蛋白 移植肾切除 海带多糖对大鼠阿霉素肾病的抗炎症性损伤治疗作用 被引量:12 2008年 目的观察海带多糖对阿霉素肾病大鼠肾组织的抗炎症性损伤治疗作用。方法建立大鼠慢性阿霉素肾病模型,设正常对照组、阿霉素肾病组、海带多糖治疗组,观察比较各组大鼠尿蛋白定量、肾功能、肾组织炎性细胞浸润、外周血淋巴细胞类肝素酶(heparanase,Hpa)mRNA表达,以及肾组织Hpa、IL-6、IL-8表达变化。结果海带多糖治疗组尿蛋白定量、肾功能、肾组织间质炎性细胞浸润、外周血淋巴细胞Hpa mRNA含量、肾组织Hpa、IL-6及IL-8表达均不同程度低于阿霉素肾病对照组。结论海带多糖对阿霉素肾病具有治疗作用,其机制可能通过抑制Hpa以及促炎性因子表达,从而发挥抗炎性损伤治疗作用。 余荣杰 赵洪雯 李敛 刘宏 干磊 吴雄飞关键词:海带多糖 阿霉素肾病 炎细胞浸润 类肝素酶 术前供肾活检在亲体肾移植供肾评估中的作用 本文观察术前供肾活检在亲体肾移植供体术前评估中的作用及必要性。研究表明:对供肾的准确评估是亲体肾移植顺利进行的关键因素。我们的研究显示,术前无创检查正常的供肾术中活检发现有约19.32%存在不同程度的组织学改变。术中活检... 刘宏 李敛 周强 蔡治涛 李翌 吴雄飞关键词:肾移植 文献传递