余巍
- 作品数：6 被引量：13H指数：3
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组人巨细胞病毒嵌合肽的表达纯化及活性研究
- 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染在人群中非常普遍,主要是呈隐性或亚临床感染,近年来发现该病毒不只在新生儿、免疫抑制及免疫缺陷患者中导致广泛的临床症状和死亡,而且可能与人类三大疾病-...
- 余巍
- 关键词：毕赤酵母高密度发酵活性研究
- 文献传递
- 小鼠口服猪卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α的抗生育研究被引量：4
- 2004年
- 目的:评价口服卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒诱发的黏膜免疫反应、抗生育作用和对卵巢结构的影响,探讨用黏膜免疫避免卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的可行性。方法:制备pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒,10只昆明系小鼠口服免疫,第3周和第6周分别加强免疫一次,剂量为0 5mL/只,含pVAX1-pZP3αDNA50μg;对照组10只雌小鼠口服相同剂量不含pVAX1-pZP3α的壳聚糖。免疫前和免疫后隔周取小鼠血清、阴道冲洗液,用ELISA法检测抗pZP3IgA和IgG。首次免疫后第12周雌雄合笼交配,统计雌鼠怀孕情况;解剖取出双侧卵巢,制作石蜡切片,光镜观察卵巢病理学变化。结果:免疫组80%小鼠的血清和50%小鼠的阴道冲洗液可检测到抗pZP3IgA,反应强度与持续时间有明显的个体差异;免疫组5只小鼠未怀孕,对照组全部怀孕,抗生育效果与合笼时抗pZP3IgA反应有关;免疫组未怀孕小鼠卵巢组织结构与免疫组怀孕小鼠及对照组小鼠无差别。结论:口服pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒免疫小鼠能诱发生殖道黏膜免疫反应,发挥抗生育作用,对卵巢组织结构没有影响。黏膜免疫是克服卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的一种值得深入研究的方法。
- 董志炜潘善培谢琪璇肖銮娟孙彩军余巍何柳媚
- 关键词：卵透明带避孕疫苗
- 一种快速筛选巴氏毕赤酵母高表达克隆的新方法被引量：4
- 2004年
- 目的:为了准确、快捷地筛选到高表达的毕赤酵母工程菌株。方法:利用毕赤酵母的生理特点和免疫印迹的特异性,将转化子接种到MM板上至形成克隆,贴上NC膜,待NC膜被分泌产物湿润后,揭下NC膜,进行ELISA-dot鉴定,选出高表达克隆进行扩增、培养,并作SDS-PAGE和Westernblotting进一步确定。结果:该法的筛选结果与SDS-PAGE和Westernblotting相符。结论:与传统方法相比,该法具有高通量,快速,简便的优点,适合毕赤酵母工程菌株的筛选。
- 谢琪璇肖銮娟潘善培余巍彭雅林张春雪
- 关键词：毕赤酵母克隆技术菌株筛选斑点印迹
- 巴斯德毕赤酵母高密度发酵表达rHC MVp的研究被引量：1
- 2005年
- 目的:提高人巨细胞病毒嵌合肽(rHCMVp)在巴斯德毕赤酵母中的表达量,并进行发酵罐高密度发酵。方法:将生长培养基的菌体离心后等量接入诱导培养基中(包括不同体积分数的甲醇、pH值)培养,通过菌体密度检测和发酵液上清的SDS -PAGE结果分析不同条件、不同诱导时间对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响,并依据优化条件进行高密度发酵。结果:摇瓶培养时,转化子在体积分数1%的甲醇pH 6 0的条件下诱导72h ,A6 0 0 (菌体密度)为4 5 2 ,目的蛋白表达量达到10 2mg/L。2L发酵罐进行了高密度发酵,经体积分数1%甲醇诱导4 8h ,最终A6 0 0 (菌体密度)达到12 4 ,每升发酵液中含目的蛋白5 7 2 1mg。结论:通过条件优化,进行高密度发酵,获得大量的rHCMVp。
- 余巍谢琪璇潘善培肖銮娟熊波李文星董志炜
- 关键词：巴斯德毕赤酵母发酵
- 重组人巨细胞病毒嵌合肽基因在毕赤酵母中的克隆和表达被引量：3
- 2005年
- 为了在毕赤酵母中表达带有组氨酸纯化标记的重组人巨细胞病毒嵌合肽 (rHCMVp) ,根据其基因序列 ,设计引物从pPIC9K rHCMVp上扩增得到目的基因片段 ,并导入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电击将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母X33细胞中 ,筛选获得表达量较高的重组菌株 ,研究了该菌株生长的培养条件 ,包括不同诱导时间、甲醇浓度、pH值对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响。 2L发酵罐进行了高密度发酵 ,经 1 %的甲醇、pH6 0的条件下诱导48h ,最终菌体密度OD60. 0 达到 1 80 ,每升发酵液中含目的蛋白 78. 7mg ,产量比摇瓶提高了 4 8倍。rHCMVp可通过高密度发酵大量获得。
- 谢琪璇余巍潘善培肖銮娟彭雅林张春雪
- 关键词：人巨细胞病毒HCMV诱导型目的基因毕赤酵母重组质粒
- 蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用被引量：1
- 2005年
- 目的 建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法 利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果 洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y A进行估算,X为待测蛋白含量(mg) ,Y为洗脱峰面积(mAU×ml) ,A为1g L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU)。将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3 )的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Low ry法测定结果相似。结论 该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值。
- 谢琪璇郑育声彭雅林肖銮娟余巍潘善培
- 关键词：层析蛋白纯化
