何文瑞
- 作品数：7 被引量：24H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪瘟病毒衣壳蛋白与宿主丝/苏氨酸蛋白激酶N1相互作用的鉴定
- 2015年
- 为筛选并鉴定与猪瘟病毒(CSFV)衣壳(C)蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交技术以CSFV C蛋白为诱饵从猪外周血单个核细胞(PBMC)c DNA表达文库中筛选与之相互作用的宿主蛋白,共筛选到6种蛋白,分别为ATP5B、SON3、PKN1、PCBP1、RPS20和IQGAP1,根据Gene Ontology分析结果,这些蛋白分别参与细胞的增殖和代谢等过程。本研究选取丝/苏氨酸蛋白激酶N1(PKN1)进行进一步验证,经酵母共转化试验、免疫共沉淀试验和GST pull-down试验证实,宿主PKN1蛋白与CSFV C蛋白之间存在特异性结合。本研究首次证明PKN1与CSFV蛋白之间的相互作用关系,为进一步研究PKN1蛋白在CSFV感染过程中发挥的作用奠定了基础。
- 何文瑞廖亚金李素冯烁董泓陈佳宁仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒C蛋白
- 应用酵母双杂交方法筛选与猪瘟病毒N^(pro)蛋白相互作用的宿主蛋白
- 2014年
- 为研究猪瘟病毒(CSFV)与宿主细胞间的相互作用,本研究采用酵母双杂交方法以猪瘟病毒Npro蛋白为诱饵,从猪外周血单个核细胞(PBMC)cDNA表达文库中筛选与之相互作用的蛋白,经共转化试验表明,共筛选到12个与Npro蛋白相互作用的宿主蛋白,应用Cytoscape 2.8.2软件绘制了蛋白质间相互作用关系图,根据GO分析结果,这些蛋白分别参与细胞代谢、细胞生长、免疫等过程,经双分子荧光互补(BiFC)试验表明筛得的部分宿主蛋白与CSFV Npro具有相互作用。本研究中筛选得到的蛋白质对CSFV复制的影响有待进一步深入研究。
- 董泓李素贺番廖亚金何文瑞孙元罗玉子胡永浩仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒
- 进口胎牛血清中牛病毒性腹泻病毒的分离及鉴定被引量：11
- 2016年
- 目的对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)进行分离及鉴定。方法Trizol法提取待检胎牛血清中的病毒RNA后,利用套式RT-PCR扩增BVDV,并利用生物信息学Lasergene 7.0软件对其核苷酸序列进行同源性分析。取生长状态良好的MDBK细胞,按1%比例加入待检胎牛血清,收获F1代BVDV FBS2014,反复冻融3次后,再次接种MDBK细胞,连传4代。采用荧光定量RT-PCR法、间接免疫荧光试验及抗原捕获ELISA法对收获的病毒进行鉴定。结果扩增产物大小均与预期相符,与已报道的BVDV-1 NADL株的核苷酸序列一致性为92.2%,属于BVDV-1a亚型毒株;分离的病毒经鉴定为BVDV,命名为BVDV FBS2014,病毒基因拷贝数为10~4拷贝/μl,感染MDBK细胞可见特异性绿色荧光;各代次的病毒收获液中BVDV的基因拷贝数均大于10^(4.92)拷贝/μl,BVDV抗原检测结果均为阳性。结论购买的进口胎牛血清中成功分离到可致MDBK细胞产生细胞病变的病毒,经鉴定所分离的病毒为BVDV,命名为FBS2014株,该病毒属于BVDV-1a亚型毒株。
- 王竞晗李素何文瑞赵权仇华吉
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒胎牛血清
- 细胞硫氧还蛋白2与猪瘟病毒E2蛋白的相互作用及其对猪瘟病毒复制的调控作用
- 猪瘟(classical swine fever，CSF)被世界动物卫生组织(OIE)列为必须上报的动物烈性传染病之一，临床上以高热稽留、高死亡率、免疫抑制和繁殖障碍为主要特征。CSF的病原是猪瘟病毒(classical...
- 何文瑞
- 关键词：猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2
- 文献传递
- 猪外周血单个核细胞cDNA酵母表达文库的构建及与猪瘟病毒E2蛋白相互作用细胞蛋白的筛选被引量：10
- 2013年
- 为研究猪瘟病毒(CSFV)蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用,本研究通过SMART技术合成猪外周血单个核细胞(PBMC)双链cDNA,以携带与载体pGADT7-Rec重组位点同源序列的特异引物经long-distance PCR扩增双链cDNA。纯化双链cDNA并与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌株Y187,经同源重组构建PBMC cDNA酵母表达文库。以CSFV E2蛋白为诱饵进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证。结果显示筛选到17个与CSFV E2蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,基因注释(GO)分析表明这些蛋白分别参与免疫、代谢、细胞生长与增殖、生物调节等过程,为研究它们与CSFV E2的相互作用奠定了基础。
- 廖亚金李素贺番何文瑞董泓冯烁孙元仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒PBMCCDNA文库酵母双杂交E2蛋白
- 猪瘟病毒N^(pro)蛋白与宿主蛋白β-actin相互作用的鉴定被引量：1
- 2014年
- 为研究与猪瘟病毒(CSFV)Npro蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交方法从猪外周血单个核细胞cDNA表达文库中筛选获得与Npro蛋白相互作用的宿主蛋白β-actin,经共转化试验和免疫共沉淀试验表明两者存在特异的相互作用,激光共聚焦试验显示两者共定位于细胞浆。本研究表明Npro蛋白与宿主细胞β-actin蛋白存在相互作用的关系。
- 冯烁李素王竞晗董泓何文瑞仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒Β-ACTIN相互作用
- 猪瘟病毒C蛋白与宿主β-actin相互作用的鉴定被引量：1
- 2014年
- 为了研究猪瘟病毒(CSFV)和宿主间的相互作用,采用Co-IP方法,利用CSFV C蛋白从PK-15细胞中钓取与其相互作用的宿主蛋白质,经SDS-PAGE电泳,银染,选取差异条带,进行质谱分析,选取β-actin蛋白作为研究的对象。经内源性Co-IP试验和GST pulldown试验进一步证实CSFV C蛋白和β-actin可以特异性结合,激光共聚焦试验表明两者共定位于细胞质。本研究表明CSFV C蛋白与宿主细胞β-actin蛋白存在相互作用,为深入研究CSFV蛋白质与宿主蛋白质间相互作用提供了实验依据。
- 董泓李丹陈佳宁李素何文瑞冯烁贺番廖亚金孙元胡永浩
- 关键词：猪瘟病毒C蛋白Β-ACTIN
