魏海涛
- 作品数：8 被引量：28H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- A组轮状病毒NSP1基因克隆表达及免疫学性质研究被引量：4
- 2010年
- 轮状病毒(rotavirus,RV)非结构蛋白1(non structural protein1,NSP1)在病毒与宿主的相互作用中发挥着重要的功能。运用基因克隆和表达技术在大肠杆菌中表达了TB-Chen株RVNSP1蛋白,进行了NSP1的免疫学性质和RV感染细胞中NSP1蛋白的合成与分布以及NSP1的系统进化和基因分型研究。结果表明,大肠杆菌BL21(DE3)能高效表达重组NSP1蛋白(rNSP1),rNSP1表达量约占菌体总蛋白的34.4%。rNSP1能诱导免疫豚鼠产生特异性血清抗体。Western blot及免疫荧光检测结果表明,抗rNSP1血清抗体能特异性识别自身蛋白,对SA11、Wa株的NSP1蛋白有交叉反应性;免疫荧光结果还表明,SA11感染的MA104细胞中合成的NSP1蛋白在细胞质中区域化聚集形成辐射状排列的颗粒状结构,而Wa株的NSP1不能形成此样结构。至今发现的A组RV至少可以分为16个不同的NSP1基因型,TB-Chen株NSP1为A2型。不同基因型有独特的敏感宿主范围,同一基因型可能感染不同种动物,同一种动物也可能感染不同基因型。基因型A4型和A16型仅在鸟类病毒株中出现;而且鸟类中只有A4型和A16型。研究结果为进一步研究NSP1蛋白质的结构功能及其应用开发奠定了很好的基础。
- 魏海涛张艳范耀春李传印文喻玲陈元鼎
- 关键词：轮状病毒免疫学性质基因分型
- A组轮状病毒NSP6蛋白表达及免疫学性质研究(英文)被引量：2
- 2009年
- 轮状病毒(RV)NSP6与NSP5由同一基因片段编码,至今对NSP6性质了解很少。用基因重组表达和免疫学方法,重组表达了A组人RVNSP6蛋白,进行了NSP6的动物免疫及其抗原反应性、免疫原性研究以及RV感染细胞中NSP6的合成及亚细胞分布研究。研究结果表明,NSP6可在原核系统中高效表达,表达蛋白占菌体总蛋白的34.2%;NSP6免疫豚鼠血清抗体可特异性识别菌体细胞中表达的NSP6和SA11及Wa病毒感染的MA104细胞中合成的NSP6蛋白;病毒感染细胞中合成的NSP6在感染后3h就可检测到,12h表达量达到最高;NSP6在病毒感染细胞质中呈弥散状分布,并主要积聚在细胞核的周围,未观察到毒质体样结构。研究结果对深入了解RVNSP6的结构与功能具有重要的意义,具有重要的潜在应用价值。
- 李传印范耀春文喻玲张艳魏海涛陈元鼎
- 关键词：轮状病毒免疫学特性细胞内分布
- 轮状病毒疫苗的研究进展被引量：8
- 2010年
- 轮状病毒(Rotavirus,RV)是世界范围内引起婴幼儿腹泻的主要病原体。RV疫苗的研制工作已取得了很大进展,但仍存在较大缺陷。目前投入使用的3种RV疫苗虽然能够对重症腹泻起到良好的保护作用,但却不能很好地预防RV感染,因此继续研制新的RV疫苗十分重要。本文对RV及RV疫苗的研究进展作一综述。
- 张艳魏海涛陈元鼎
- 关键词：轮状病毒属轮状病毒疫苗
- TB-Chen株轮状病毒NSP5/NSP6及基因型的初步研究被引量：7
- 2009年
- TB-Chen病毒是一株分离自中国胃肠炎患儿的A组轮状病毒。研究结果表明,TB-Chen病毒的NSP5和NSP6由第10基因组节段编码,该节段全长816bp。NSP5含200个氨基酸,由第22~624位核苷酸（nt）编码,预测分子量为21.9 kD,等电点为7.86。NSP6含92个氨基酸,由第80~355位nt编码,预测分子量为11 kD,等电点为9.65。对编码NSP5和NSP6的ORF核苷酸序列的分子进化分析结果表明,A组RV的NSP5至少可分为7个不同的基因型（H1~H7型）,TB-Chen株NSP5属于H2型;NSP6至少可分为8个基因型（h1~h8型）,TB-Chen株NSP6属于h2型。这是首个对A组人RV的NSP6基因分型的研究结果的报道,并且我们建议NSP6的基因型以英文字母＂h＂代表,如TB-Chen株的NSP5/NSP6基因型为H2h2,69M株的NSP5/NSP6基因型为H7h7,Wa株与KU株的NSP5/NSP6基因型为H1h8。
- 文喻玲李传印范耀春张艳魏海涛陈元鼎
- 关键词：分子进化基因型分析
- 一种简捷检测重组痘苗病毒蚀斑的方法被引量：1
- 2009年
- 目的建立一种简捷准确测定重组痘苗病毒滴度的方法.方法重组痘苗病毒vTF7-3经胰酶处理后,在37℃,吸附MA104细胞单层2h,覆盖不同的覆盖物.(1)琼脂法:细胞单层覆盖琼脂-MEM营养层,放37℃,5%CO2孵箱培养3～4d后,用含中性红的第二层营养琼脂覆盖,4h后计数病毒蚀斑;(2)甲基纤维素法:细胞单层覆盖甲基纤维素-MEM营养液,放37℃,5%CO2孵箱培养3～4d后,吸出营养液,用结晶紫染色20min后计数病毒蚀斑.结果琼脂法和甲基纤维素法中痘苗病毒vTF7-3的蚀斑均呈圆形,大小均匀,边缘清晰光滑,但甲基纤维素法中痘苗病毒的斑型较大,滴度较高,操作简单.琼脂法蚀斑平均滴度为1.27×109/mL,甲基纤维素法蚀斑平均滴度为1.54×109/mL,统计学分析二者差异无统计学意义(P>0.05).结论琼脂法和甲基纤维素法均可用于测定重组痘苗病毒滴度,甲基纤维素蚀斑法优于琼脂法.
- 文喻玲李传印范耀春张艳魏海涛陈元鼎
- 关键词：重组痘苗病毒甲基纤维素
- A组轮状病毒NSP1基因的克隆表达及免疫学性质研究
- 轮状病毒（rotavirus，RV）属于呼肠病毒科（Reoviridae）轮状病毒属（Rotavirus），是一个直径约为70nm，无包膜，具有三层衣壳蛋白组成的正二十面体双链RNA病毒。RV是引起哺乳类和鸟类及人类腹泻...
- 魏海涛
- 关键词：轮状病毒免疫学性质亚细胞分布基因分型
- 文献传递
- A组轮状病毒VP5~*和VP8~*的表达和免疫学性质研究(英文)被引量：6
- 2010年
- 轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的主要病原,VP4是RV重要的抗原蛋白,在早期病毒与细胞黏附过程中发挥重要作用,包括受体结合和细胞渗透。在细胞黏附过程中,VP4易被切割成VP5*和VP8*2个片段并以此增强病毒感染性。为了深入研究VP5*和VP8*的免疫学性质,进一步评价其应用前景,从TB-Chen株RV基因组中编码VP4蛋白基因上克隆了VP5*和VP8*开放读码框核苷酸序列,构建了表达质粒,在原核大肠杆菌系统中重组表达了VP5*和VP8*蛋白,进一步分析了它们的免疫学性质。结果显示,VP5*和VP8*可在E.coli中高效表达,重组蛋白VP5*(rVP5*)和VP8*(rVP8*)可诱导免疫豚鼠产生特异性血清抗体,这些抗体可特异性识别自身蛋白(rVP5*或rVP8*),可识别来自TB-Chen株的重组VP4蛋白,并可识别SA11和Wa感染的MA104细胞中合成的病毒VP4蛋白。这些结果表明,rVP5*和rVP8*蛋白具有较高的免疫原性,抗rVP5*和抗rVP8*的抗体具有高度特异性和交叉反应性。
- 张艳文喻玲魏海涛李传印范耀春陈元鼎
- 关键词：轮状病毒抗原性
- 自然杀伤T细胞的研究进展被引量：5
- 2009年
- 自然杀伤T细胞(NKT)是一类具有NK受体和T细胞受体且显示NK细胞和T细胞两方面性质的淋巴细胞。因其表型和功能与T细胞,B细胞和NK细胞等免疫细胞有所不同,近年来颇受关注。NKT细胞具有高度保守的TCR表型(TCRVα24/Vβ11-人),同时共表达NK细胞特有标志CD161。NKT细胞识别由CD1d分子提呈的特异糖脂分子,并能够分泌大量细胞因子,参与机体的先天性免疫和获得性免疫反应。研究发现,NKT细胞在抗感染,抗肿瘤,以及抑制自身免疫性疾病(如:肥胖型糖尿病,再生障碍性贫血等)的发生中发挥着重要作用。本文将对有关NKT细胞特征和功能的研究现状,以及存在的问题作一综述。
- 张艳魏海涛陈元鼎
- 关键词：NKT细胞细胞学特征发育
