马忠
- 作品数：21 被引量：53H指数：5
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- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- T7启动子促发下的人尿激酶原在大肠杆菌中的高效表达
- 1995年
- 将人工全化学合成的尿激酶原（ｐｒｏ－ｕｒｏｋｉｎａｓｅ）ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＥＴ３ｄ中，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ＬｙｓＳ，经ＩＰＴＧ诱导，获得了占菌体总蛋白１８％的高表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅａｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定，表达产物主要为单链尿激酶，并且在菌体内基本以无活性的包涵体形式存在。经体外交复性，从１Ｌ培养基中可获得３０００００单位的活性原激酶原。
- 董晨陈晓春马忠陈于红夏焱华子春
- 关键词：尿激酶原聚合酶启动子大肠杆菌
- 具有生物活性的人尿激酶原在大肠杆菌中的融合表达
- 1994年
- 人尿激酶原(Pro-UK)由411个氨基酸组成,含3个结构域:类生长因子结构域、环柄结构域、丝氨酸蛋白酶结构域,有12对二硫键.Pro-UK经纤溶酶作用,在158—159位发生断裂,变为双链形式的尿激酶(HUK).HUK为目前临床广泛使用的溶栓制剂,由于对纤维蛋白无选择性,大剂量使用时有引发出血的副作用.与HUK相比。
- 华子春李节马忠朱德煦
- 关键词：尿激酶原大肠杆菌
- 重组人尿激酶原的体外变复性研究被引量：14
- 2000年
- 重组人尿激酶原在大肠杆菌中过量表达时形成不溶物包涵体,需经体外变复性后才能获得生物活性。本文旨在提高包涵体中变性尿激酶原的复性效率,通过对pH,温度,变性剂种类及浓度,蛋白浓度,以及巯基氧化还原对的比率等的定性定量分析,研究重组人尿激酶原体外变复性的基本条件,并比较了添加某些非特异有效成分,脉冲稀释,梯度透析等方法对提高重组人尿激酶原体外变复性效率的作用。确定了重组人尿激酶原体外变复性的适宜方法,复性效率可达20%～30%。
- 朱慧刘伟史蔚薛宇鸣马忠
- 关键词：重组人尿激酶原复性
- 纤维蛋白高亲和性尿激酶变体的研究被引量：1
- 1996年
- 150～156位氨基酸缺失的变体尿激酶原scu-PA(dscu-PA)和未突变的尿激酶原(rscu-PA)均在E.coli中获得表达.经体外变复性,抗体亲和层析,2种表达产物均被纯化至银染1条带.经plasmin活化,从dscu-PA得到的变体双链尿激酶dtcu-PA,从rscu-PA得到的重组双链尿激酶rtcu-PA和天然双链尿激酶ntcu-PA对合成底物S2444具有相似的酶学性质,说明缺失突变未影响尿激酶的催化活性中心.对纤维蛋白 fibrin-clot和^(125)I-fibrin-sepharose诱导的纤溶, dtcu-PA明显优于 rtcu-PA,甚至还优于rscu-PA.dtcu-PA对血浆中纤维蛋白原的含量几乎无影响.结果表明dtcu-PA具有较高的fibrin选择性,同时也证明双链尿激酶能够通过改造而获得较高的fibrin选择性.
- 马忠余瑞荣华子春朱德煦
- 关键词：尿激酶药物化学
- 尿激酶原基因在大肠杆菌中的表达和鉴定
- 马忠
- 两种尿激酶原变体(Ala^(175)→Ser,Tyr^(187)→His,Lys^(300)→His和Ala^(175)→Ser,Tyr^(187)→His)的构建及性质研究被引量：1
- 2000年
- 利用定点突变方法 ,构建了尿激酶原变体基因muk1(Ala175→Ser,Tyr187→His ,Lys30 0→His)及muk2 (Ala175→Ser ,Tyr187→His) .两种尿激酶原变体在大肠杆菌BL2 1中表达得到包涵体 ,经体外变复性 ,SP Sepharose离子交换柱层析 ,Benzamidine Sepharose吸附除去双链尿激酶 ,得到的蛋白均为银染一条带 .用人工合成的发色底物S2 4 4 4测量muk1、muk2的动力学性质 ,muk1的内在酶活性比野生型 pro UK降低 8倍 ,muk2的内在酶活性比野生型 pro UK降低 2 .5倍 ;它们经纤溶酶 (plasmin)激活后的双链活性与 pro UK相比分别为muk1提高 50 % ,muk2和pro UK相当 .在实验基础上讨论了 pro UK高内源性催化活性的机制及其结构基础 .
- 史蔚朱慧薛宇鸣唐堂马忠
- 关键词：尿激酶原定点突变血栓
- 人尿激酶原及其变体的研究
- 马忠
- 尿激酶原变体Glu151-Glu154-mscu-PA的构建及其动力学性质被引量：1
- 2000年
- 利用寡核苷酸介导的定点突变方法 ,将重组人尿激酶原 ( recombinant single chain uroki-nase- type plasminogen activator,rscu- PA)中 1 51位赖氨酸 ( Lys1 51 )突变为谷氨酸 ( Glu1 51 ) ,1 54位精氨酸 ( Arg1 54)突变为谷氨酸 ( Glu1 54) ,得到尿激酶原变体基因 ( mscu- PA) .尿激酶原变体和未突变的重组尿激酶原均在 E.coli中获得表达 ,超声后所得包涵体经体外变复性并得到纯化 .结果表明 ,尿激酶原变体对纤溶酶 ( plasmin)的敏感性比未突变的重组尿激酶原低约 40 % ,转变纤溶酶原 ( Glu- plasminogen)为纤溶酶的活性基本相同 .两种产物经纤溶酶活化后 ,分别得到了双链尿激酶 ( rtcu- PA)和双链尿激酶变体 ( mtcu- PA) .它们对人工合成的发色底物 S2 4 4 4反应的动力学基本一致 ,对 Glu- plasminogen的催化反应的米氏动力学常数 Km 基本一致 ,但 mtcu- PA的 Kcat仅为rtcu- PA的 80 % .酪蛋白降解系统 ( caseinolytic system)实验表明 ,在纤维蛋白和纤溶酶原存在的情况下 ,尿激酶原变体较未突变尿激酶原能加快酪蛋白的降解 ,说明 mtcu-
- 刘伟朱慧史蔚马忠
- 关键词：定点突变亲和性
- 重组人尿激酶原的体外变复性研究(英文)被引量：5
- 2001年
- 目的 重组人尿激酶原在大肠杆菌中过量表达时形成不溶物包涵体 ,需经体外变复性后才能获得生物活性。本文旨在提高包涵体中变性尿激酶原的复性效率。方法 通过对pH、温度、变性剂种类及浓度、蛋白浓度、以及巯基氧化还原对比率等的定性定量分析 ,研究重组人尿激酶原体外变复性的基本条件 ,并比较了添加一些非特异有效成分、脉冲稀释、梯度透析等方法对提高重组人尿激酶原体外变复性效率的作用。结果 确定了重组人尿激酶原体外变复性的基本方法 ,其复性效率可达 30 %左右。结论 不同的包涵体蛋白的体外变复性效率因蛋白的分子大小、二巯键数目、疏水程度等而异 。
- 朱慧刘伟史蔚薛宇鸣蒯乐天马忠
- 关键词：重组人尿激酶原复性
- 五种尿激酶变体基因及在大肠杆菌中的表达
- 本发明属于生物技术制药工业中的基因工程生产多肽药物的技术领域，其目的是利用寡核苷酸介导的定点突变，改造人尿激酶基因，获得五种尿激酶变体基因，即：(Lys<Sup>151</Sup>→Glu)UK，(Lys<Sup>151...
- 马忠朱德煦彭贵洪余瑞荣薛宇鸣
- 文献传递
