马开利
- 作品数：82 被引量：40H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>
- α-synuclein修饰与帕金森病的研究进展被引量：2
- 2010年
- α-synuclein基因是最早发现的与帕金森病(Parkinson's disease,PD)相关的基因,在部分家族性PD患者中存在该基因的突变。无论是家族性还是散发性PD,其特征性包涵体——Lewy小体的主要成分都是聚集的α-synuclein蛋白,从组成来看,α-synuclein的氨基酸序列中存在众多能被修饰的位点,并且在α-synuclein转基因鼠中也检测到了以磷酸化、硝基化以及泛素化形式存在的α-synuclein聚集体。α-synuclein的不同修饰可能影响其自身的聚集特性及毒性作用,进而在PD的发病进程中发挥重要作用。因此,探讨与PD相关的α-synuclein的磷酸化、硝基化及泛素化修饰,对于更清楚地了解α-synuclein修饰与PD间的关系有重要意义。
- 马开利陈乃宏
- 关键词：Α-SYNUCLEIN帕金森病磷酸化泛素化
- 小鼠resistin基因慢病毒表达载体构建及在KMB17细胞中的表达被引量：3
- 2016年
- [目的]构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞。[方法]从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞中的表达。[结果]PCR扩增到预期的342 bp大小的resistin基因目的片段;构建的重组质粒经酶切得到了342 bp大小的目的片段,测序鉴定为小鼠resistin基因序列;重组慢病毒包装可观察到很强的绿色荧光,说明具有较高的质粒转染效率;重组慢病毒感染KMB17后可检测到小鼠resistin基因转录水平和蛋白水平的表达,证明resistin基因得到有效转导并可在靶细胞中高水平表达。[结论]成功构建了携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体并可在KMB17靶细胞中获得高效表达。
- 陈瑜赵远岳俊李鸿钧和占龙马开利马进吴正存唐东红鲁帅尧
- 关键词：RESISTIN慢病毒载体靶细胞小鼠
- RT-qPCR检测猕猴ABCG2基因转录水平的方法
- 本发明提供一种RT‑qPCR检测猕猴ABCG2基因转录水平的方法，以猕猴新鲜肾脏组织提取的总RNA逆转录合成得到的cDNA为模板，利用PCR引物组合进行实时荧光定量PCR扩增，获得ABCG2基因片段及内参基因GAPDH片...
- 唐东红王陈芸叶尤松李哲丽马开利鲁帅尧杨浩陈倩肖涵邱炳玲杨忠
- 文献传递
- 非人灵长类帕金森模型的研究进展被引量：1
- 2021年
- 帕金森病(Parkinson’s disease,PD),作为全球第二大神经系统退行性疾病,目前已有的治疗手段仍不能从根本上逆转疾病的进程,而治疗手段的发现和评价离不开动物模型的建立,一个可靠、有效的动物模型将有利于PD的发病机制、诊断、治疗方法以及药物筛选的研究。啮齿类动物和非脊椎动物已被广泛用于建立PD模型,但其并不能完全呈现人类PD的行为学和病理特征,而非人灵长类(nonhuman primate,NHP)在生理、解剖结构和免疫等方面与人最为接近,更适合用来探索疾病机理和发现新的治疗方式,因此,本文就帕金森病NHP模型的建立方法进行综述,为帕金森病NHP模型建立提供参考。
- 刘永芳吴正存马开利
- 关键词：帕金森病
- 全身性过表达人源α-Syn-NLS转基因鼠的构建方法
- 本发明公开一种全身性过表达人源α‑Syn‑NLS转基因鼠的构建方法，本发明方法首先通过PCR方法获取人源α‑Syn编码序列和SV40核易位信号序列，再通过BP反应构建含有目的序列的入门克隆载体，酶切后，通过LR反应将入门...
- 黄璋琼唐东红叶尤松马开利李哲丽龙维虎王陈芸韦梦晨李国祥吴正存胡鹏
- 甲/戊型肝炎病毒重组抗原基因的克隆及表达被引量：1
- 2008年
- 将甲肝病毒vp1编码基因（aa 24-171）和戊型肝炎病毒ORF2基因（aa 431-615）通过一段编码柔性甘氨酸链（Gly4 Ser Gly4）的基因片断连接,获得编码HAV/HEV融合蛋白基因（AEAg342）.将该融合基因插入质粒pBV220,构建表达质粒pBV220-AEAg342.将pBV220-AEAg342转化入大肠杆菌BL21中进行表达,表达量约占菌体总量的20%,经离子交换层析纯化,目的蛋白纯度达90%以上.Western blot证实该蛋白能与甲肝及戊肝患者阳性血清发生特异性反映,为进一步开发双价疫苗和联合诊断试剂奠定了一定基础.
- 奎翔李鸿钧谢天宏张光明刘馨易山杨芳彭梅马开利孙茂盛
- 关键词：甲型肝炎病毒戊型肝炎病毒基因克隆
- 一种过表达SNCA的腺相关病毒载体AAV-SNCA、制备方法及其应用
- 本发明公开一种过表达SNCA的腺相关病毒载体AAV‑SNCA、制备方法及其应用，属于生物技术和医药领域，其技术方案包括构建过表达SNCA的腺相关病毒载体AAV‑SNCA和高滴度的AAV‑SNCA病毒滴度包装制备，将过表达...
- 马开利吴正存黄璋琼唐东红高家红易红昆
- 文献传递
- Neurturin基因的克隆及其在Vero细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的克隆Neurturin(NTN)基因,并在Vero细胞中表达。方法用RT-PCR方法扩增hNTN cDNA,并克隆至pcDNA3真核表达载体中,经Lipofectamine2000转染Vero细胞,挑选稳定表达克隆,用RT-PCR及免疫荧光分析鉴定,并对转染后细胞的形态及生长状况进行分析。结果重组质粒pcDNA3/hNTN转染Vero细胞后获得了稳定表达克隆,且有目的蛋白表达,转染后细胞形态和生长特性发生了一定改变。结论获得了稳定表达NTN蛋白的Vero细胞株,为其移植并进行帕金森病猴基因治疗动物实验奠定了基础。
- 马开利孙茂盛施锐张莹杨芳奎翔谭振国李鸿钧
- 关键词：VERO细胞克隆帕金森病
- 一种急性高尿酸血症大鼠模型的构建方法
- 本发明涉及一种急性高尿酸血症大鼠模型的构建方法，属于模型构建技术领域。该方法是将肌苷腹腔注射至Wistar大鼠，注射量为300～400mg/kg，即获得急性高尿酸血症大鼠模型。本发明首次利用肌苷对医学生物研究中常用的实验...
- 唐东红王陈芸叶尤松李哲丽邱炳玲肖涵陈倩杨浩杨忠马开利鲁帅尧黄璋琼
- 文献传递
- 高效制备重组人α-突触核蛋白原纤维方法的建立
- 2020年
- 通过设计PCR引物,从pcDNA3.1-α-syn载体中扩增人α-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至PGEX-5X-1载体中,成功构建了人α-突触核蛋白高效原核表达载体pGEX-5X-1-syn。转化BL21菌株后进行IPTG诱导,通过对诱导剂浓度、诱导时间和温度、纯化方法和原纤维培养条件的优化,获取了重组人α-突触核蛋白原纤维,采用硫黄素T染色和透射电镜方法确认原纤维的制备情况。结果发现,经终浓度为1.0 mmol/L的IPTG,37℃条件下诱导3 h,人α-突触核蛋白得到大量表达。采用GST融合蛋白纯化磁珠进行蛋白纯化,可快速高效获取高纯度的人α-突触核蛋白,纯化产量可达到25 mg/L。浓度为9 mg/mL的人α-突触核蛋白,在37℃,1000 r/min震荡条件下培养至6 d,可大量成功制备人α-突触核蛋白原纤维,并在透射电镜下成功观察到了原纤维的形态。α-突触核蛋白原纤维是建立PD模型的重要材料,以上结果建立了一套可快速高效制备重组人α-突触核蛋白原纤维的方法,为PD的动物模型及细胞模型的建立提供了重要的研究材料。
- 罗海玉吴正存马开利
- 关键词：帕金森氏病Α-突触核蛋白原纤维GST
