顾金保
- 作品数：44 被引量：101H指数：6
- 供职机构：南方医科大学公共卫生与热带医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 大肠杆菌ER2566表达的重组Thanatin的敏感抗菌活性被引量：2
- 2010年
- 目的原核表达抗菌肽,纯化并鉴定其抗菌活性。方法用人工合成的方法合成编码thanatin21肽的DNA序列(并使用了大肠杆菌的偏爱密码子),克隆入pTYB11质粒,转化大肠杆菌ER2566。thanatin与内含肽融合表达,内含肽是一种具有自剪切功能能够自动将目标蛋白及内含肽分离的蛋白剪切元素。内含肽-thanatin以可溶性蛋白的方式表达,存在于细胞裂解液的水相中,将细胞裂解液过几丁质亲和层析柱,内含肽-thanatin能够特异地结合到几丁质柱上。在层析柱上用DTT/半胱氨酸缓冲液在4℃切割过夜,切割下来的thanatin用洗脱液洗脱。结果在最先洗脱下来的4ml洗脱液中蛋白浓度达到245μg/ml。纯化后的thanatin具有很好的抗革兰氏阴性菌以及真菌的能力,如弗氏志贺菌(Shigella flexneri)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、宋内志贺菌(Shigella snnei)、大肠杆菌O157(Escherichia coli O157)、产毒大肠杆菌(toxinproducing Escherichia coli)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、白色念珠菌(Candida albicans),尤其在抗耐药菌方面表现出显著优势,如耐药肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)及产超广谱β内酰胺酶(Extended-Spectrum β-Lactamases,ESBLs)大肠杆菌。重组Thanatin对80株产ESBLs耐药大肠杆菌及30株敏感的大肠杆菌所产生的抑菌圈的大小没有显著性差异(P>0.05,t-test),具有相同的抗菌能力。结论在大肠杆菌ER2566中表达的thanatin对革兰氏阴性菌尤其是临床耐药菌有很好的抗菌活性,克服了抗生素耐药性的问题。Thanatin具有开发成抗革兰氏阴性菌药物的潜力。
- 王沛珍顾金保罗军彭鸿娟
- 关键词：THANATIN原核表达抗菌活性
- 白纹伊蚊蜕皮激素拮抗剂筛选酵母模型的建立被引量：1
- 2007年
- 目的在毕赤酵母体内构建白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,建立高通量杀虫剂筛选模型,用于筛选蜕皮激素代谢途径拮抗药物。方法人工合成果蝇蜕皮激素响应元件(EcRE)5次重复的序列,与果蝇热激蛋白基因启动子(pHSP27)序列连接,以绿色荧光蛋白(GFP)报告基因,将EcRE-pHSP27-GFP片段亚克隆入pPIC3.5k,整合入毕赤酵母染色体构建阴性酵母A。人工合成白纹伊蚊蜕皮激素受体(EcR)及超螺旋蛋白(USP)编码序列,两个基因以双表达盒形式亚克隆入组成型表达质粒pGAPZ,整合入酵母染色体的另一位点,使EcR与USP在酵母中组成型表达,构建模型酵母B。制备蜕皮激素拮抗剂虫酰肼悬液(浓度为0.83mg/ml),分别施加于模型酵母B与阴性酵母A,荧光显微镜下目测荧光强度,与未施加药物的对照组比较。同时提取各组RNA,半定量RT-PCR检验GFP基因的转录效率。结果模型酵母B发出绿色荧光,而阴性酵母A与空白酵母GS115未见荧光,表明在模型酵母体内表达的EcR与USP形成复合二聚体,作用于EcRE启动GFP报告基因表达荧光蛋白。施用虫酰肼,模型酵母B荧光强度明显减弱,表明GFP的表达量减少。施用虫酰肼的模型酵母B,GFP与内参灰度比值(为0.614)低于对照组(1.134),表明虫酰肼可降低模型酵母B体内GFP基因的转录水平。结论在酵母体内建立了白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,该酵母模型可用于筛选作用于蜕皮激素代谢途径的药物。
- 顾金保孙彦涛彭鸿娟
- 关键词：白纹伊蚊虫酰肼
- 冈比亚按蚊性别决定基因doublesex的克隆、序列分析及表达谱被引量：3
- 2015年
- 【目的】doublesex是控制昆虫性别分化的关键基因,决定了昆虫体细胞与生殖细胞的性别。本研究旨在克隆、鉴定重要疟疾媒介冈比亚按蚊Anopheles gambiae性别决定基因doublesex(Angdsx),分析其在雌雄个体内的剪切体及在不同发育时期的表达模式。【方法】基于冈比亚按蚊转录组数据库,比对到Angdsx相关片段,分别以雌雄成蚊c DNA为模板,采用RT-PCR与RACE方法克隆分别获得雌雄个体内Angdsx全长基因,利用生物信息软件对所得序列进行结构域预测、氨基酸序列比对和进化树分析。根据Angdsx特异性表达引物,利用RT-PCR方法研究其在冈比亚按蚊雌雄个体及不同发育时期的表达谱。【结果】分别从冈比亚按蚊雌雄成虫中克隆获得Angdsx c DNA全长序列,分别命名为AngdsxF(Gen Bank登录号:KM978937)和AngdsxM(Gen Bank登录号:KM978938)。Angdsx位于2号常染色体右臂,基因横跨接近80 kb基因组长度。AngdsxF长度为4 874 nt,编码长度为265个氨基酸的雌性特异性蛋白DSXF;AngdsxM长度为3 183 nt,编码长度为633个氨基酸的雄性特异性蛋白DSXM。结构域分析发现Angdsx包括doublesex保守的TRA/TRA-2结合位点、dsx重复序列、富含精氨酸/丝氨酸双肽区、多聚嘌呤增强子序列和RNA结合蛋白结合序列,以及连续的双核苷酸GT为主的重复序列。与AngdsxF相比,AngdsxM具有一个雌性特异性的外显子。AngdsxM在0-2 h卵中高表达,随后逐渐减少,在12-24 h卵中降至最低,之后再次升高;AngdsxF则在6-8 h卵中开始表达。【结论】本研究获得了冈比亚按蚊性别决定基因Angdsx在雌雄个体内的全长序列,Angdsx具有保守的结构域与表达特征。本研究结果为蚊虫性别分化的分子机制及将其最终应用于显性致死昆虫施放技术进行蚊媒的防制提供了理论基础。
- 刘培文李小聪顾金保刘艳陈晓光
- 关键词：冈比亚按蚊性别决定基因DOUBLESEX表达谱
- 一种生物杀虫剂筛选模型及其制备方法和应用
- 一种生物杀虫剂筛选模型，该模型是染色体上整合有以下外源基因序列的巴斯德毕赤酵母：(1)组成型表达白纹伊蚊蜕皮激素受体EcR的基因表达盒GAP Promoter－EcR－AOX1 TT；(2)组成型表达超螺旋USP蛋白的基...
- 彭鸿娟陈晓光顾金保杨俊
- 文献传递
- 深圳市孕妇弓形虫感染调查被引量：2
- 2016年
- 目的调查深圳市孕妇的弓形虫感染流行状况及其可能的影响因素,为弓形虫病的预防控制提供依据。方法采用ELISA法检测669例体检孕妇的血清弓形虫IgG、IgM抗体,比较不同接触史或饮食习惯的孕妇弓形虫感染率。提取弓形虫抗体阳性结果的样本核酸,采用LAMP法检测弓形虫特异的SAG1基因。结果 669例体检孕妇中检出弓形虫血清IgG/IgM抗体阳性35例,阳性率为5.2%;有动物密切接触史组感染率15.8%,高于无接触史组的2.3%,差异有统计学意义(P<0.05);有不良饮食习惯组与无不良饮食习惯组间感染率差异无统计学意义(P>0.05)。抗体阳性样本经LAMP法检测弓形虫SAG1基因结果均为阴性。结论本次调查中孕妇仍具较高弓形虫抗体阳性率,密切接触动物为可疑危险因素。
- 赖植发陈润莉牛姬飞顾金保黄慧萍司徒潮满莫浩联
- 关键词：孕妇弓形虫血清学监测
- 卫生害虫蜕皮激素类似物杀虫剂筛选酵母模型的建立
- 目的利用来源于白蚊伊蚊的蜕皮激素受体(EcdysoneReceptor,EcR)及配体结合位点超螺旋蛋白(UltraSpiricle Protein,USP)和来源于果蝇的蜕皮激素受体响应原件(Ecdysone Rece...
- 顾金保孙彦涛彭鸿娟
- 关键词：米满
- 文献传递
- 急性冠脉综合征患者血清尿酸与血清NO的相关性被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨急性冠脉综合征急性期血清尿酸水平与一氧化氮(NO)的相关性。方法:对纳入的39例ACS患者按血清尿酸浓度高低分为A、B、C3组,以健康人群体检共31例为正常对照组,检测血清NO的变化。结果:尿酸值越高NO值越低,尿酸大于421μmol/L时更为显著,P<0.001。结论:血清尿酸升高与ACS的发生发展和预后密切相关。
- 陈炳华陈德超袁智勇张绍荣周柳嫦王蔚浩胡浩荣顾金保
- 关键词：血清尿酸
- 重组蚊浓核病毒杀虫剂的构建
- 目的以埃及伊蚊浓核病毒AeDNV为载体表达昆虫特异性东亚钳蝎(Mesobuthus martensii)的昆虫特异性神经毒素BmK IT,实验室测试重组病毒的杀伤效果,从而为新型蚊类特异性生物杀虫剂的开发奠定基础。方法根...
- 顾金保陈晓光
- 文献传递
- 埃及伊蚊性别决定基因 Transformer 2 的鉴定与表达分析被引量：2
- 2013年
- 目的分离、鉴定和分析埃及伊蚊性别决定基因Transformer 2(Aaetra2)。方法通过生物信息学方法与分子生物学方法获得了Aaetra2基因的全长。通过与已知物种tra2的比较,分析Aaetra2的基因结构特点与分子进化特征,通过RT-PCR方法验证Aaetra2的时间与组织表达特点。结果分离并鉴定Aaetra2-α与Aaetra2-β两个基因,它们位于染色体不同部位,通过选择性启动子的剪切策略进行自我调控,转录多种mRNA。埃及伊蚊TRA2蛋白具有保守的RRM、RS1、RS2和linker功能结构域区。Aaetra2表达方式无时间特异性的,从卵持续性表达至成虫阶段,且无性别特异性表达与组织特异性表达。结论 Aaetra2具有保守的昆虫性别决定基因tra2的功能结构域与表达特征,对其深入研究将为其最终应结合释放携带显性致死基因的昆虫技术应用于蚊虫的防制提供理论依据。
- 刘培文陈宇婷顾金保陈晓光
- 关键词：埃及伊蚊性别决定基因
- 白纹伊蚊内源性登革病毒序列分析被引量：1
- 2016年
- 目的 分析和验证白纹伊蚊（佛山株）基因组中的登革病毒来源的内源性病毒序列（endogenous viral elements,EVEs）.方法 使用Blast序列比对工具,分别以四型登革病毒基因组全序列为待查序列对白纹伊蚊基因组进行序列比对分析.根据筛选得到的EVEs序列设计基因特异性引物,分别以雌、雄各8只成蚊个体进行基因组PCR检测并测序验证.结果 在白纹伊蚊基因组上共计找到5个与登革病毒高度同源性的EVEs片段.其中,EVE-1与DENV-2 P8-1407MS株、EVE-2-5与DENV-1 02-20株具有高度的相似性.基因组PCR检测结果显示,EVE-1在种群个体中保守存在,而EVE-2未检测到,EVE-3-5在不同个体中变异度较高.结论 白纹伊蚊基因组中存在登革病毒序列来源的EVEs,为研究登革病毒与媒介之间的相互作用提供了新的方向.
- 王衍海顾金保
- 关键词：登革热病毒伊蚊属
