项颖
- 作品数：34 被引量：178H指数：6
- 供职机构：重庆市肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沉默DNAJB11基因对肝癌SMMC7721细胞增殖、周期与凋亡的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:研究沉默DNAJ同源B亚家族成员11(DNAJ homolog subfamily B member 11,DNAJB 11)基因表达对人肝细胞癌SMMC7721细胞增殖、周期与凋亡的影响。方法:构建携带有针对DNAJB 11基因的DNAJB11-shRNA重组慢病毒载体pCDH-Puro/DNAJB11-shRNA,并制备重组慢病毒。将具有高效感染力的重组病毒感染SMMC7721细胞。CCK-8法检测被感染后SMMC7721细胞的增殖情况;分别采用实时荧光定量PCR法与蛋白质印迹法检测被感染后,SMMC7721细胞中DNAJB11、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和促凋亡基因caspase-3 mRNA及其蛋白的表达;FCM法检测沉默DNAJB 11基因表达后对SMMC7721细胞的周期和凋亡的影响。结果:成功构建插入DNAJB11-shRNA的重组慢病毒载体pCDH-Puro/DNAJB11-shRNA。CCK-8法检测结果显示,感染携带有DNAJB11-shRNA重组慢病毒后,SMMC7721细胞的增殖被抑制(P<0.05);实时荧光定量PCR法与蛋白质印迹法检测结果证实,DNAJB11-shRNA能有效沉默SMMC7721细胞中DNAJB11 mRNA及其蛋白的表达(P值均<0.05);DNAJB 11基因沉默后,能明显上调caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平,并下调PCNA mRNA及蛋白的表达水平(P值均<0.05)。FCM检测结果表明,沉默DNAJB 11基因的表达可将SMMC7721细胞阻滞于细胞周期的G1期,并能促进其凋亡,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论:沉默DNAJB 11基因表达可抑制SMMC7721细胞的增殖并促进其凋亡,这可能与下调SMMC7721细胞中增殖相关蛋白PCNA的表达,上调凋亡相关蛋白caspase-3的表达有关。
- 项颖李启英石洋张曼黄德鸿南映瑜杨涛肖春燕王莉张文军龚奕曾建挺张艳林
- 关键词：细胞增殖
- Luffin-β-KDEL-uPAcs融合毒素的构建及其抗胃癌SGC-7901细胞的活性研究
- 2013年
- 目的构建含尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase plasminogen activator,uPA)裂解位点(uPAcs)和KDEL(Lys-Asp-Glu-Leu)驻留信号序列的丝瓜毒素(Luffin-β)基因的原核载体,表达并纯化其融合毒素蛋白Luffin-β-KDEL-uPAcs(LKP),并探讨融合毒素蛋白LKP抗胃癌SGC-7901细胞的活性。方法 RT-PCR两步法克隆Luffin-β基因,引物延伸法构建Luffin-β-KDEL-uPAcs融合基因并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,诱导其表达融合蛋白Trx-EK-Luffin-β-KDEL-uPAcs(TELKP)并纯化TELKP,肠激酶(enterokinase,EK)切割TELKP后,纯化与回收目的毒素蛋白LKP,SDS-PAGE对LKP蛋白予以检测鉴定,高效液相色谱法(HPLC)对其进行纯度检测。采用cell counting kit-8(CCK-8)、RT-PCR、West-ern blot等方法,体外检测毒素蛋白LKP经uPA酶裂解后释放Luffin-β的抗胃癌SGC-7901细胞的活性。结果成功诱导重组载体pET-32a(+)/Luffin-β-KDEL-uPAcs表达相对分子质量约48.8×103含载体表达标签(Trx)的融合免疫毒素TELKP,EK酶切该蛋白获含290个氨基酸,相对分子质量约31.8×103的目的蛋白LKP。SDS-PAGE检测鉴定表明,LKP蛋白与预期大小一致,其纯度达98.8%。CCK-8、RT-PCR、Western blot等法检测显示,LKP经uPA酶体外裂解可释放具杀瘤活性的Luffin-β小分子毒素。结论成功克隆到Luffin-β-KDEL-uPAcs融合基因,并将其构建于原核表达载体pET-32a(+)中,且诱导该载体表达了相对分子质量约31.8×103的融合毒素LKP。LKP毒素经uPA酶体外裂解能释放具杀瘤活性的Luffin-β小分子毒素。
- 李启英项颖余维倩王莉黄德鸿唐显军张曼张文军杨涛肖春燕
- 关键词：杀瘤活性
- MITX、CTX、VCR、VP-16、PRED联合治疗外周T细胞非霍奇金淋巴瘤的临床研究被引量：2
- 2009年
- 目的观察MITX、CTX、VCR、VP-16、PRED联合治疗外周T细胞非霍奇金淋巴瘤的临床疗效和安全性。方法20例初治的T细胞非霍奇金淋巴瘤患者接受MITX、CTX、VCR、VP-16、PRED联合化疗，MITX6～8mg／m^2静脉滴注，第1天；CTX1．0～1．2g静脉滴注，第1天；VCR2mg静脉滴注，第1天；VP160．1g静脉滴注，第1～5天；PRED100mg／d，口服，第1～5天，21d为1个疗程，至少治疗2周期。结果20例患者中完全缓解45％（9／20例），部分缓解40％（8／20例），稳定5％（1／Z0例），进展10％（2／20例）。主要毒性反应为白细胞下降和脱发。结论MITX、CTX、VCR、VP-16、PRED联合治疗外周T细胞非霍奇金淋巴瘤有较好的临床疗效，不良反应小，患者依从性好。
- 李启英杨雪琴项颖
- 关键词：T细胞淋巴瘤
- 托泊替康联合顺铂治疗晚期肺及头颈部鳞癌的临床研究
- 2008年
- 目的观察托泊替康联合顺铂治疗晚期肺及头颈部鳞癌的疗效及毒副反应。方法126例经病理或细胞学证实为肺鳞癌和头颈部鳞癌患者予托泊替康0.75￣1.2mg/m2,静脉滴注30min,d1￣d5;顺铂25￣30mg/m2,静脉滴注,d1￣d3。21d为1周期,2周期为一疗程。结果全组无完全缓解病例,部分缓解61例,稳定53例,进展12例,总有效率48.4%,中位生存期10.1个月,1年生存率36.7%。毒副反应:主要为骨髓抑制和脱发。结论托泊替康联合顺铂治疗晚期肺及头颈部鳞癌疗效较好,毒副反应可耐受,无蓄积。
- 项颖李启英邵江河杨建中
- 关键词：托泊替康顺铂头颈部肿瘤肿瘤鳞状细胞
- 盐酸拓扑替康联合顺铂治疗38例晚期非小细胞肺癌临床观察被引量：3
- 2002年
- 项颖黄凤鸣
- 关键词：盐酸拓扑替康顺铂晚期非小细胞肺癌联合化疗
- 树突状细胞联合CIK细胞应用于晚期恶性实体瘤治疗的临床疗效观察被引量：37
- 2010年
- 目的:研究树突状细胞(dendritic cells,DCs)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)联合治疗晚期实体瘤的临床疗效。方法:选择110例晚期实体瘤患者,分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),其中贴壁细胞用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)等诱导产生DCs,并用自体肿瘤细胞或外源性肿瘤细胞抗原致敏,获得Ag-DCs;悬浮细胞经干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、IL-2和CD3单克隆抗体(CD3monoclonal antibody,CD3mAb)等诱导产生CIK细胞,将DCs与CIK细胞共同培养;采用FCM法检测DCs及CIK细胞表型,并回输患者进行治疗。结果:42例可评价病灶的患者中,2例完全缓解(complete response,CR),9例部分缓解(partial response,PR),15例疾病稳定(stable disease,SD);37例不可评价病灶的患者中,25例患者有效,与治疗前相比,治疗后免疫功能及肿瘤标志物有一定程度改善。结论:DCs-CIK细胞联合治疗晚期恶性实体瘤安全有效,具有一定的临床应用前景。
- 杨涛邵江河李启英余慧青王思雄张蒙武宁项颖
- 关键词：树突状细胞癌症疫苗
- 乙型肝炎病毒感染对弥漫大B细胞性淋巴瘤的预后影响
- 目的：探讨HBV感染对弥漫大B细胞性淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)的预后影响.
方法：选择60例HBsAg阳性的初治DLBCL患者纳入观察组,并随机选取60例H...
- 张文军李启英项颖
- 关键词：弥漫大B细胞性淋巴瘤乙型肝炎病毒感染预后评估
- DC-CIK细胞对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响被引量：5
- 2013年
- 目的探讨经细胞因子从肝癌患者外周血贴壁单个核细胞(PBMCs)诱导的树突状细胞(DC)与杀伤细胞(CIK)对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响。方法用肝癌患者肝癌组织裂解物(肿瘤抗原)致敏经粒细胞巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-4(IL-4)等诱导该患者PBMCs产生的DC。用干扰素-γ(IFN-γ)、IL-2和人CD3单克隆抗体(human CD3monoclonal antibody,hCD3mAb)等诱导该PBMCs的悬浮细胞产生CIK细胞。用Tanswell培养小室将DC-CIK细胞与HepG2细胞在同一培养体系内经该小室膜分隔培养24、48h。CCK-8法检测HepG2细胞生长变化,并绘制其生长曲线;划痕实验检测其增殖、迁移能力。RT-PCR、Western blot分别检测其增殖细胞核抗原(PCNA)基因及其编码蛋白的表达。结果 CCK-8法检测显示,DC-CIK细胞对人HepG2细胞生长具显著杀伤作用,与对照组细胞比较,差异有统计学意义(P<0.01)。划痕实验、基因与蛋白水平检测表明,DC-CIK细胞可明显抑制该瘤细胞的增殖与迁移,能在基因与蛋白水平下调该瘤细胞PCNA的表达。结论 DC-CIK细胞可显著下调肝癌细胞的PCNA基因表达,明显抑制其增殖与迁移,以发挥其杀瘤作用。
- 项颖李启英王莉黄德鸿唐显军张曼杨威吴仙宇郑晓东
- 关键词：细胞增殖细胞运动DC-CIK细胞肝癌HEPG2细胞
- 肝癌干细胞的培养、鉴定及CIK对其生长、增殖的影响被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)对肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)生长、增殖的影响。方法:用含多种细胞因子(LIF、EGF、b FGF及B27)的无血清培养液(serum-free medium,SFM)诱导SMMC7721人肝癌细胞产生LCSCs,并行LCSCs表面标志CD133、CD90的流式仪(flow cytometry,FCM)检测鉴定与裸鼠致瘤能力观测。以IFN-γ、CD3单克隆抗体(human CD3 monoclonal antibody,h CD3m Ab)与IL-2等诱导肝癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)的悬浮细胞生成CIK。用Transwell培养小室将LCSCs与不同密度的CIK在同一培养体系内以该小室膜分隔培养24、48、72 h,采用CCK-8试剂盒检测CIK对LCSCs生长、增殖的影响。以RT-PCR与Western blot分别检测与CIK共培养的LCSCs的增殖细胞核抗原(proliferating cell unclear antigen,PCNA)基因及其编码蛋白的表达变化。结果:FCM检测显示,LCSCs高表达干细胞表面标志分子CD133、CD90。CCK-8法检测表明,与对照比较,与相同密度的CIK共培养的LCSCs,其生长、增殖减慢,48 h开始变得更加明显(P<0.01)。RT-PCR、Western blot检测显示,CIK能明显下调LCSCs的PCNA基因及其编码蛋白的表达。结论:成功诱导培养并鉴定到LCSCs。肝癌患者的CIK可明显抑制LCSCs的生长、增殖与下调其PCNA基因及其编码蛋白的表达。
- 杨涛王宏宇石洋李启英黄德鸿肖春燕龚奕王刚项颖
- 关键词：肝癌干细胞增殖
- 自动活检枪经皮肺穿刺检查周围型肺肿块的结果分析被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨自动活检枪经皮肺穿刺对周围型肺肿块的临床诊断价值及安全性。方法:CT检查明确为周围型肺肿块196例患者,在CT导向下,用自动活检枪经皮肺穿刺活检。结果:动活检枪经皮肺穿刺活检明确诊断周围型肺肿块187例,包括恶性肿瘤164例、结核7例和炎性假瘤14例,确诊率为95.4%,咯血及痰中带血发生率为5.6%,气胸发生率仅为15.8%。结论:经皮肺穿刺活检枪技术检查周围型肺部肿块安全、可靠、准确。
- 项颖
- 关键词：周围型肺部肿块自动活检枪活检CT
