雷旭宇
- 作品数：5 被引量：20H指数：3
- 供职机构：大连理工大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划辽宁省科学技术基金辽宁省科技厅基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶r-Gloshedobin在大肠杆菌中的克隆、表达与分离纯化
- ＜正＞ 长期以来,来源于不同种类蛇毒的类凝血酶制剂已经作为或将要成为临床有效药物用于治疗各种心血管疾病。本研究通过RT-PCR扩增,从大连蛇岛蝮蛇（Gloydiusshedaoensis）克隆获得类凝血酶cDNA（glo...
- 杨青许建强雷旭宇李民包永明安利佳
- 文献传递
- 大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因克隆与表达研究被引量：8
- 2003年
- 根据同源性设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,并由此推测出其相应的氨基酸序列.将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕氏酵母细胞中获得表达.该表达产物经两步柱层析后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,获得单一条带,并表现较强的生色底物活性.
- 杨青雷旭宇许建强李民苏志国安利佳杨克瑞斯特.杨森
- 关键词：蝮蛇类凝血酶酵母表达系统蛇毒
- 大连蛇岛蝮蛇类凝血酶在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：9
- 2004年
- 将编码大连蛇岛蝮蛇类凝血酶 (Gloshedobin)的基因克隆于表达载体pET 32a( + )中 ,以融合蛋白形式在大肠杆菌中获得表达。在 2 5℃下经 1mmol LIPTG诱导 6h ,SDS PAGE和蛋白质印迹分析表明 ,部分融合蛋白以可溶形式存在于大肠杆菌的细胞质中。针对金属螯合亲和层析分离某些含His 标签重组蛋白质时专一性不高 ,并且存在配基泄漏的缺陷 ,设计合成了以抗重组类凝血酶的鸡卵黄免疫球蛋白为配基的免疫亲和层析柱。通过疏水色谱OctylSepharoseFF ,IgY免疫亲和层析以及强阴离子交换色谱SourceQ等三步柱色谱分离纯化获得比活力为 45 4 7U mg的重组蛇毒类凝血酶 ,活力回收率为 34 8%。蛋白质印迹分析和纤维蛋白原凝结活性分析表明 。
- 雷旭宇杨青包永明许建强栾雨时安利佳
- 关键词：蝮蛇类凝血酶大肠杆菌蛋白质印迹重组蛋白质
- 蛇毒类凝血酶基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化被引量：7
- 2003年
- 将大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(Gloshedobin)基因克隆到载体pET32-a(+)上,在T7lac启动子下以N端融合硫氧还蛋白的形式在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,诱导条件为:30℃诱导6 h,IPTG浓度为1 mmol/L.利用固定化金属离子(Ni2+)亲和层析分别对胞内可溶物和变性条件下的包涵体进行纯化.通过SDS-PAGE检测融合蛋白的纯度,采用点杂交和纤维蛋白凝结活性检测分析,显示纯化产物具有较高生物活性.
- 李民杨青包永明雷旭宇许建强安利佳
- 关键词：类凝血酶大肠杆菌
- 蛇毒重组类凝血酶的分离纯化及亲和配基的制备
- 在对蛇岛蝮蛇类凝血酶已有的研究基础上,该论文的工作从以下三个方面开展:(一)利用金属螯合层析纯化组合分离纯化重组蛇毒类凝血酶.我们将大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶基因连接到表达载体pET-32a(+)上并转入大肠杆菌BL21(D...
- 雷旭宇
- 关键词：类凝血酶大肠杆菌分离纯化IGY
- 文献传递
