隋建华
- 作品数：7 被引量：23H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗人纤维蛋白单链抗体-链亲和素融合蛋白的稳定性及对动物纤维蛋白的识别被引量：1
- 1999年
- 目的：探索抗人纤维蛋白单链抗体链亲合素融合蛋白的应用前景。方法：构建抗人纤维蛋白单链抗体ｓｃＦｖ８Ｅ５基因与链亲和素基因的重组表达载体ｐＳＴＥ２８Ｅ５ ，表达的融合蛋白可特异性识别人纤维蛋白，同时有生物素的结合位点。转化ＪＭ１０９ 后用ＩＰＴＧ 诱导表达，ＥＬＩＳＡ 观察融合蛋白的稳定性。结果：抗人纤维蛋白单链抗体链亲合素融合蛋白稳定性好，可耐受至少２ ｗ ，４ ℃保存、数次反复冻融或一定时间的３７ ℃孵育。它能与大鼠和豚鼠的纤维蛋白结合，而与猪纤维蛋白反应不明显。结论：抗人纤维蛋白单链抗体链亲和素融合蛋白适用于大鼠或豚鼠血栓病模型，是临床前研究的有用材料。
- 李文平许静隋建华宋增璇
- 关键词：链亲和素融合蛋白抗纤维蛋白稳定性
- 单链抗体分子与链亲和素融合蛋白的制备<英文>被引量：4
- 1999年
- 研究了抗人纤维蛋白单链抗体分子scFV-8E5与链亲和素融合蛋白的制备。链亲和素拼接在scFV-8E5 cDNA的3’端,制备的融合蛋白单体分子量约45kD。表达产物少数为周质间可溶型蛋白,多数为包涵体。无论是可溶型的蛋白产物或从包涵体中回收并复性的蛋白产物均有结合人纤维蛋白和生物素的功能。这个双特异性融合蛋白的成功制备证明了在scFV-8E5的3’端拼接其它效应分子的可行性。
- 许静李文平隋建华宋增璇
- 关键词：链亲和素单链抗体融合蛋白抗纤维蛋白
- KGla细胞免疫小鼠脾细胞scFv噬菌体展示文库的构建及其表达被引量：9
- 2000年
- 目的 :用噬菌体展示技术构建KGla免疫小鼠的脾细胞scFv表达文库。方法 :用人髓系白血病细胞系KGla细胞免疫小鼠 ,取其脾细胞 ,RT PCR扩增VH和Vκ基因并克隆入噬菌体展示表达载体 ,构建scFv文库 ,并测定文库的库容量和BstN1酶切单个克隆分析文库的多样性。用KGla作为固相抗原 ,进行四轮吸附 洗脱 富集的筛选 ,SDS PAGE检验筛选后文库scFv的呈示表达。结果 :文库的库容为 3× 10 6cfu ,单个克隆的BstN1Ⅰ酶切图谱显示多样 ,提示文库的容量和多样性均能满足进一步筛选分离目的基因的需要 ,筛选后的文库能很好地表达外源scFv。结论
- 隋建华宋增璇佘鸣张丽艳沈德诚韩忠朝
- 关键词：噬菌体展示抗体库SCFV白血病
- 人源化抗人纤维蛋白单链抗体-链亲和素融合蛋白的表达和功能被引量：1
- 2000年
- 目的 探索人源化抗人纤维蛋白单链抗体 链亲和素融合蛋白的表达和功能。方法 构建人源化抗人纤维蛋白单链抗体 (ScFv 8E5 )基因与链亲和素基因的重组表达载体 ,制备融合蛋白 ,ELISA观察其稳定性、与人及不同动物纤维蛋白的反应。结果 人源化融合蛋白可特异性识别人、大鼠、豚鼠纤维蛋白 ,同时有生物素的结合位点 ,且稳定性好 ,可耐受至少两周 4℃保存 ,数次反复冻融或一定时间的 37℃孵育。结论 此人源化融合蛋白适用于大鼠及豚鼠血栓病模型 ,是作临床前研究的有用材料。
- 李文平许静隋建华徐冬宋增璇
- 关键词：抗纤维蛋白人源化融合蛋白链亲和素单链抗体
- 抗KG1a细胞噬菌体展示ScFv的筛选及鉴定被引量：8
- 2000年
- 目的 应用KG1a细胞 (髓系白血病细胞系 )筛选噬菌体抗体库 ,获得能以一定特异性结合KG1a细胞的单链抗体 (ScFv) ,克隆其基因并研究其对应抗原在不同细胞表面的分布。方法 用完整的KG1a细胞筛选一个经KG1a细胞免疫小鼠脾细胞的ScFv噬菌体抗体库 ,重复筛选 4轮 ;细胞ELISA鉴定了其中 96个克隆与KG1a细胞的结合反应 ;从 2 6个KG1a细胞ELISA阳性克隆中挑选了 3个克隆 ,进一步用免疫荧光染色、流式细胞仪分析其各自对应抗原在不同细胞表面的分布 ,并对其中2个克隆的ScFv编码基因进行序列测定。结果 流式细胞仪分析结果显示 ,3个克隆所识别的抗原均存在于不同白血病细胞表面 ,但比例分布不同 ,而 3个克隆之间又略有差异 ,其中 2个克隆的DNA序列测定结果显示其核苷酸序列和氨基酸顺序有所不同 ,均属小鼠免疫球蛋白同一可变区基因家族和亚群 ,重链可变区 (VH)属亚群Ⅱ、家族Ⅵ ,轻链可变区 (Vκ)属亚群Ⅲ、家族Ⅸ。结论 用完整细胞筛选噬菌体抗体库可有效分离细胞表面分子的抗体片段及其基因 ,这种方法对于筛选和获得此类难以分离纯化和未知的细胞表面分子的抗体具有良好的应用价值 ;用KG1a细胞筛选所得的抗体及其基因对于进一步研究和发现白血病细胞表面分子具有重要意义。
- 隋建华何一心许静宋增璇
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体表面分子
- 选择感染性噬菌体(SIP)技术:一种新的相互作用分子筛选技术被引量：1
- 1999年
- 选择感染性噬菌体（ Ｓ Ｉ Ｐ） 技术是利用丝状噬菌体次要衣壳蛋白 ＰⅢ的分子结构组件， 并以噬菌体展示技术为基础发展而来． Ｓ Ｉ Ｐ 的技术关键在于使没有感染性的噬菌体颗粒必须严格依赖分子间的相互作用、结合而重获感染性， 已有的研究表明 Ｓ Ｉ Ｐ 技术可望成为一项获得相互作用分子对的极其有效和高度特异性的新技术，
- 隋建华宋增璇
- 关键词：噬菌体分子间相互作用
- 血管紧张素转换酶基因插入/缺失多态性与冠心病关系的初步研究被引量：3
- 1999年
- 目的：研究中国汉族人群血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因插入／缺失（Ｉ／Ｄ）多态性与冠心病的关系。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测４０例冠心病和５０例配伍对照组的血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因型，同时测血压、血脂、体重指数等指标。结果：冠心病组与对照组ＡＣＥ基因型分布无显著性差异，ＤＤ型对ＤＩ型和Ⅱ型优势比ＯＲ＝１．５２，９５％可信区间为０．５５～４．２２，Ｐ＞０．０５。结论：ＡＣＥ基因Ｉ／Ｄ多态性与中国汉族人群冠心病的发生无关，也不是有价值的遗传标志。
- 隋建华李文辉彭晓雷仁义
- 关键词：冠心病ACE基因多态性
