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陕基德
作品数:
3
被引量:19
H指数:2
供职机构:
中山大学孙逸仙纪念医院
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发文基金:
广东省科技计划工业攻关项目
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
韦金星
中山大学孙逸仙纪念医院
张大伟
中山大学孙逸仙纪念医院
刘建平
中山大学孙逸仙纪念医院
褚忠华
中山大学孙逸仙纪念医院
汪洋
中山大学孙逸仙纪念医院
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作者
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刘建平
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陕基德
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2012
2篇
2011
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小干扰RNA沉默MDRl基因对SMMC-7721肝癌细胞株多药耐药性的影响
被引量:12
2011年
目的将表达特异性的小干扰RNA(siRNA)导入肝癌耐药细胞,干扰多药耐药(MDRl)基因后,观察其对肝癌耐药细胞化疗敏感性的影响。方法使用浓度梯度法制作sMMC-7721耐阿霉素细胞株(SMMC-7721/ADM),阿霉素浓度从0.1~2.0ms/L;转染siRNA(浓度25、50、75nmo/L)沉默此耐药株MDRl基因;转染后24、48、72h用定量逆转录.聚合酶链反应(qRT.PCR)检测各组细胞MDRl的mRNA表达水平;siRNA(浓度50nmoVL)转染后48h,行噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞对化疗药物的敏感性,计算各药物的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI);流式细胞仪(FCM)检测细胞对阿霉素(浓度0.2mg/L)的凋亡。Westernblot检测蛋白表达含量。结果SMMC-7721/ADM对阿霉素、5.氟尿嘧啶(5.Fu)、长春新碱、奥沙利铂的RI为25.43、68.32、39.17、18.31。siRNA转染沉默MDRl基因后,发现其对上述药物的RI为5.01、17.04、4.96、1.62;qRT.PCR发现其MDRlmRNA表达量显著降低(P〈0.05);Westernblot显示其MDRl表达产物P—gp蛋白显著降低(P〈0.05);FCM发现加入阿霉素后,其细胞凋亡指数显著大于沉默前(P〈0.05)。结论用siRNA沉默SMMC-7721/ADM的MDRl基因后,SMMC-7721/ADM对化疗药的敏感性显著增加。MDRl基因与SMMC-7721肝癌细胞的多药耐药性显著相关,可通过沉默其MDRl基因来提高耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。
汪洋
褚忠华
刘建平
张大伟
韦金星
陕基德
关键词:
多药耐药
SIRNA
小干扰RNA沉默多药耐药相关蛋白基因2对人肝癌细胞HepG2多药耐药的逆转作用
被引量:8
2012年
目的检测小干扰RNA(siRNA)对肝癌耐药细胞株HepG2/阿霉素(ADM)多药耐药相关蛋白基因2(MRP2)及其蛋白产物的抑制作用,观察对多药耐药性的影响。方法使用浓度梯度法制作HepG2耐ADM细胞株(HepG2/ADM),ADM浓度从0.1~2.0mg/L;设计合成针对MRP2的siRNA小片段,转染HepG2/ADM耐药细胞,24h后通过实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应(RT—qPCR)和Westernblot检测siRNA对MRP2基因mRNA和蛋白的抑制效果;噻唑蓝(MTT)比色法观察抑制MRP2基因表达后,HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性变化,并计算各药物的半数抑制浓度(IC50)。结果HepG2/ADM对ADM、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱和奥沙利铂的IC50值分别为0.3204、3.8002、0.2014和0.1221;siRNA明显抑制了HepG2/ADM细胞MRP2基因mRNA和蛋白的表达(P〈0.05);转染MRP2-siRNA后,HepG2/ADM细胞对ADM、5-Fu、长春新碱和奥沙利铂的IC50值明显减小,分别为0.1023、1.4417、0.0452和0.0268。结论用siRNA沉默MRP2基因能够逆转HepG2/ADM细胞对化疗药物的耐药性,MRP2基因与HepG2/ADM肝癌细胞的多药耐药性相关,可通过沉默MRP2基因提高耐药细胞对化疗药物的敏感性。
褚忠华
张大伟
刘建平
韦金星
苏正
陕基德
关键词:
多药耐药性
Hedgehog信号通路在人肝癌细胞株中的表达及意义
被引量:1
2011年
目的探讨Hedgehog信号通路在人肝细胞癌细胞系中的表达及意义。方法采用半定量RT-PCR法检测PLC/PRF/5、HepG2及SMMC-7721肝癌细胞株中Shh、Ptch1、Smo、Gli1、Gli2mRNA的表达;Western blot法检测PLC/PRF/5、HepG2及SMMC-7721肝癌细胞株中Gli2蛋白的表达。结果除Shh外,Ptch1、Smo、Gli1、Gli2mRNA在PLC/PRF/5、HepG2及SMMC-7721细胞中均有不同程度表达。其中,Ptch1、Smo、Gli1、Gli2mRNA在PLC/PRF/5及SMMC-7721细胞中的表达强度显著高于成人正常肝细胞,而Gli1mRNA在HepG2细胞中的表达量与正常肝细胞无明显差异;Gli2蛋白在成人正常肝细胞中几乎没有表达,在HepG2细胞中的表达也与正常肝细胞无明显差别,而在PLC/PRF/5及SMMC-7721细胞中,尤其是SMMC-7721细胞,Gli2的表达量异常增高。结论 Hedgehog信号通路的异常激活参与了肝细胞癌的发生发展过程,Gli2可能成为肝细胞癌重要生物学标志和生物治疗靶点。
刘建平
张大伟
陈涛
叶义标
陈捷
韦金星
陕基德
关键词:
肝癌
HEDGEHOG信号通路
肝癌细胞株
GLI2
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