陈檬
- 作品数：6 被引量：6H指数：1
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家基础科学人才培养基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的纯化和复性研究(英文)被引量：1
- 2013年
- 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种造血生长因子和促炎细胞因子。重组鼠源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在抗肿瘤及抗炎研究中有着极其重要的作用。以NcoI和BamH I为酶切位点将mGM-CSF编码序列插入到pET-28a载体中。转染E.coli宿主菌BL21后得到以包涵体形式表达的蛋白,表达量占菌体总蛋白量51.6%。包涵体的纯化条件在实验中进一步优化,然后溶解于8 mol/L尿素中。采用稀释法在2 mol/L尿素缓冲液中添加PEG对蛋白进行复性。复性后的产物经过离子交换层析纯化后得到高纯度的有活性的mGM-CSF。通过体内白细胞计数和体外髓样细胞增殖检测表明纯化的蛋白具有mGM-CSF全部的生物活性。这种制备方法能够从每升发酵液中获得8.06 mg蛋白,具有蛋白表达量高,复性和纯化方法简便易得的特点,适用于规模生产。
- 曹荣月陈檬葛驰宇汤啸天李飞张鹏徐茂磊刘景晶
- 关键词：包涵体聚乙二醇纯化复性
- 重组卡介苗HSP65抑制小鼠移植黑色素瘤的初步药效学研究被引量：1
- 2012年
- 观察卡介苗来源的热休克蛋白HSP65对小鼠移植黑色素瘤的抑制作用并初步探讨可能的作用机制。通过基因工程手段获得纯化的重组HSP65蛋白,与弗氏佐剂联合给药C57BL/6J小鼠。分别设计了两组免疫方案,一组于肿瘤细胞接种前免疫3次,另一组于肿瘤细胞接种前免疫7次。结果在免疫3次的情况下,虽然也能激发较高的特异性抗HSP65抗体,但抑瘤效果不明显(抑瘤率14.2%);增加免疫次数到7次后,抑瘤率高达73.2%,效果显著。经肿瘤组织病理切片发现,增加免疫次数导致肿瘤组织中灶性坏死增加,淋巴细胞浸润增加,且肿瘤细胞病理性核分裂相减少,提示了该疫苗作用的可能机制。
- 谢燕飞陈檬彭淑红汤啸天舒青龙左爱仁曹荣月
- 关键词：HSP65黑色素瘤
- 肿瘤细胞裂解物疫苗与其修饰的树突状细胞联合抗A20鼠淋巴瘤的作用被引量：3
- 2013年
- 将A20淋巴瘤细胞,反复冻融,获得肿瘤细胞裂解物的抗原肽,以来源于结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）热休克蛋白70（HSP70）第407-426（mHSP70407~426,M）的两段串联重复序列M2小肽为佐剂,通过双功能偶联试剂戊二醛偶联制备肿瘤细胞疫苗A20-M2,偶联产物在体外修饰未成熟的DC,通过检测负载肿瘤细胞抗原的DC细胞分泌的细胞因子以及抗原来确定被修饰DC细胞的成熟度,获得成熟DC即获得DC疫苗。用A20-M2与DC两种疫苗联合给药治疗小鼠,实验结果显示,激发的免疫应答对于A20肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,平均肿瘤重显著降低（P〈0.01）,通过ELISA法,从小鼠血清中检测到高滴度抗细胞裂解物类抗体,淋巴细胞增殖试验显示疫苗联合给药后能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖反应。A20-M2能够有效的刺激DC细胞成熟,A20-M2与成熟DC细胞联合给药能够有效的抑制小鼠A20淋巴瘤的生长。
- 曹荣月李飞邢芸徐茂磊陈檬张鹏汤啸天黄巧玲
- 关键词：疫苗树突状细胞生物治疗
- 真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-M2的构建及在小鼠骨髓树突状细胞中的表达被引量：1
- 2014年
- 为了构建含有绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)报告基因的M2真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-M2(2段热休克蛋白70表位序列407-426,mHSP70407-426,M2),探讨M2基因转染小鼠骨髓树突状细胞(Dendritic cell,DC)的表达情况。采用4轮PCR方法从pcDNA3.1(+)-GFP载体中将GFP编码序列扩增出来,并在其上游引入Kozak序列,下游引入M2序列,使用限制性内切酶HindIII和BamHI将目的片段插入到pcDNA3.1(+)中,利用质粒自带的氨苄青霉素抗性筛选出阳性克隆,获得重组基因的表达载体。重组载体通过转染试剂Lipofectamine2 000转染至DC中,通过倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞内的表达。构建的pcDNA3.1(+)-GFP-M2经双酶切、PCR和测序鉴定和预期结果一致。荧光显微镜观察显示在转染pcDNA3.1(+)-GFP-M2基因的树突状细胞中,荧光均匀地分布于整个细胞。成功构建含有绿色荧光蛋白报告基因的M2真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-M2。M2基因成功转染至树突状细胞中。
- 曹荣月孙翁陈檬杨梦琪宦晓军肖芳李盼龙军
- 关键词：真核表达载体树突状细胞KOZAK序列
- 人源血管内皮生长因子突变体Ⅱ的克隆表达、分离纯化及初步鉴定
- 2013年
- 构建人源血管内皮生长因子突变体hVEGF121Ⅱ的重组原核表达质粒,获得hVEGF121Ⅱ蛋白用于制备抗血管生成作用更强的抗肿瘤疫苗。利用PCR技术,在已构建的hVEGF121Ⅰ突变体的基因末端引入热休克蛋白mHSP70的407-426两段串联重复序列的编码基因,PCR产物经Hind III和Nco I双酶切后连接到经同样限制性内切酶切过的原核表达载体pET-28a(+)上,转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,乳糖诱导表达,超声破碎菌体,包涵体经洗涤、溶解、稀释复性、离子交换层析得到目的蛋白hVEGF121Ⅱ,Western-blot鉴定。结果成功构建了hVEGF121Ⅱ蛋白的表达质粒pET-28a(+)-hVEGF121Ⅱ,重组菌株经乳糖诱导后,目的蛋白表达量占全菌蛋白的62%,分离纯化后纯度达到95%,hVEGF121Ⅱ蛋白的单体和二聚体都可以和VEGF抗体结合。重组hVEGF121Ⅱ蛋白的表达成功为进一步对其进行免疫学研究奠定了基础。
- 曹荣月张鹏徐茂磊陈檬邢芸胡晓利黄巧玲
- 关键词：血管内皮细胞生长因子突变体抗血管新生包涵体
- 树突状细胞疫苗联合GM-CSF治疗黑色素瘤的研究
- 近年来用肿瘤细胞裂解物致敏的内源性树突状细胞(以下简称B-DC)已成为黑色素瘤治疗领域的新热点.然而其诱导的免疫反应强度不够，临床治疗结果不是很令人满意.在本次研究中，目的在于提高B-DC的免疫原性，增强B-DC的治疗效...
- 曹荣月孙翁陈檬宦晓军肖芳龙军张晓红方泰惠
- 关键词：黑色素瘤树突状细胞OK-432
