钱炎珍
- 作品数：16 被引量：42H指数：4
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体的构建
- 人体各种类型的恶性肿瘤几乎都可以检测到高水平的端粒酶活性,因此端粒酶已成为肿瘤治疗的新靶点。本文通过构建hTERT启动子控制的特异性针对端粒酶阳性肿瘤的增殖缺陷型腺病毒载体,比较分析了该载体携带绿色荧光蛋白报告基因(EG...
- 苏长青王星华崔贞福吴红平李林芳姜梨华钱炎珍吴孟超钱其军
- 文献传递
- 双重调控选择增殖型腺病毒CNHK500的构建及初步研究被引量：12
- 2004年
- 目的 研制出一种双重调控的选择增殖型腺病毒载体系统。方法 先后经 2次定点突变重叠聚合酶链反应 (PCR)技术使腺病毒E1A及E1B启动子缺失 ,并将人工合成的人端粒酶逆转录酶启动子和缺氧反应启动子分别插入E1A及E1B基因的上游 ,得到腺病毒载体质粒pSG5 0 0。通过 pSG5 0 0与质粒 pBHGE3在 2 93细胞中同源重组得到重组病毒CNHK5 0 0。扩增、纯化病毒 ,用TCID5 0方法测病毒滴度。通过病毒增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力。结果 成功构建了由双重调控选择增殖型腺病毒CNHK5 0 0 ,病毒滴度为 1.9× 10 10 pfu/ml ,增殖实验结果证实CNHK5 0 0可以选择性地在端粒酶阳性肿瘤中增殖。结论 CNHK5 0 0为肿瘤的生物治疗提供了一种新的策略。
- 张琪彭林辉吴红平崔贞福钱炎珍姜梨华苏长青吴孟超钱其军
- 关键词：增殖型腺病毒聚合酶链反应肿瘤生物治疗
- 人肝癌细胞系EH-H1的建立及其相关生物学特性被引量：3
- 2009年
- 目的:采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EH-H1,并对其生物学特性进行分析。方法:将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子显微镜下观察细胞的形态,并绘制细胞的生长曲线。用放射免疫法检测细胞系AFP和HBV的含量,采用染色体G显带方法进行细胞染色体核型的分析,裸鼠皮下接种细胞检测该细胞的成瘤能力。结果:成功建立一株新的人肝癌细胞系,命名为EH-H1。EH-H1细胞体外连续传代80代以上,细胞形态不变,生长周期恒定在24 h。放射免疫检测EH-H1各代细胞HBV均为阴性,AFP分泌微量(0.6μg/L)。染色体G带显示,EH-H1细胞染色体为非整倍体,以超2倍体为主。该细胞经皮下接种可使裸鼠致瘤(10/10),移植瘤病理组织学类型和分化程度与肝细胞癌一致。结论:通过原代培养建立的肝癌细胞系EH-H1与原发癌保持相似的生物学特性,可望成为一个稳定的细胞系。
- 钱炎珍黎江李林芳刘辉刘韬姜梨华施乐华苏长青吴孟超钱其军
- 关键词：肝癌细胞系原代培养生物学特性
- 携带TRAIL基因的新型溶瘤病毒体外诱导肝癌细胞凋亡被引量：2
- 2009年
- 目的:评价携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL在人肝癌细胞株中介导TRAIL基因表达及对肝癌细胞的凋亡诱导作用.方法:CNHK500-hTRAIL感染人肝癌细胞株HepG2、Hep3B以及人正常肝细胞株WRL-68,通过增殖实验观察病毒的选择性增殖能力,并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL蛋白的表达量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肝癌细胞的功效,流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响.结果:CNHK500-hTRAIL能选择性地在HepG2、Hep3B细胞内高效增殖;感染72h后HepG2、Hep3B细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为167.4、173.22ng/L;在MOI=0.1时,CNHK500-hTRAIL即可明显杀伤HepG2、Hep3B细胞,并选择性地诱导细胞早期凋亡,均显著高于空病毒CNHK500及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL;而对人正常肝细胞株WRL-68则无明显杀伤作用.结论:携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒载体对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达,明显优于单纯的病毒载体及传统的非增殖型腺病毒载体,应用前景广阔。
- 刘永靖陈飞虎苏长青王星华钱炎珍钱其军
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体凋亡四甲基偶氮唑蓝
- 多重调控病毒-基因载体的构建及其体外抗肿瘤活性被引量：1
- 2009年
- 目的构建-种新型的病毒-基因治疗载体。方法通过克隆技术将人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因插入质粒载体pBHGE3的E3区，得到由主要晚期启动子（MLP）调控的腺病毒质粒pPE3-hTRAIL，再通过与质粒pSG500在293细胞中进行位点特异性重组得到E1A、E1B基因分别受hTERT启动子与HRE启动子双重调控的重组增殖型腺病毒，用TCID50方法测定病毒滴度。通过增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力。利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测人TRAIL基因的表达。并进行噻唑蓝（MTT）比色法实验检测其杀伤肿瘤细胞的能力。结果CNHKS00-hTRAIL的病毒滴度为2．39×10^10pfu／ml，增殖实验结果证实CNHK500-hTRAIL可以选择性地在端粒酶阳性的人8市癌细胞A549中增殖，其所携带的人TRAIL基因在A549中的表达量（183．12μg/L）明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体Ad—hTRAIL（24．53μg/L，P〈0．01）。MTT显示CNHK500-hTRAIL对A549的杀伤能力明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体Ad—hTRAIL，其半数抑制MOI值分别为17．825、0．197（P〈0．01）。结论CNHK500-hTRAIL是-种具备治疗肺癌潜力的新型病毒-基因治疗系统。
- 刘永靖陈飞虎苏长青王星华张琪李林芳钱炎珍钱其军
- 关键词：肺癌腺病毒基因治疗TRAIL
- 增殖性腺病毒CNHK600-p53可增强肝癌细胞株SMMC7721对化疗药物的敏感性被引量：1
- 2006年
- 目的构建携带p53基因新型增殖性腺病毒CNHK600-p53,研究其是否增加肝癌细胞株对化疗药物的敏感性。方法采用四甲基偶氮唑盐(m ethylth iazolyl tetrazolium assay,MTT),观察化疗药物5-氟尿嘧啶(F luorourac il,5-Fu)、丝裂霉素(M itomyc in,MMC)和表阿霉素(Ep irub ic in,EPI)组与携带p53基因的重组腺病毒CNHK600-p53联合上述化疗药物组对肝癌细胞株SMMC7721的杀伤效应,同时观察其是否优于Ad-p53。结果单用CNHK600-p53或Ad-p53对肝癌细胞SMMC7721的杀伤效果无明显差别;肝癌细胞株SMMC7721在5-Fu浓度为100 ug/m l时细胞抑制率为58%,MMC浓度为2.5 ug/m l时细胞抑制率为50%,EPI浓度为1.25ug/m l时细胞抑制率为57%,但转入CNHK600-p53(MO I=10)后再使用上述浓度的化疗药物,细胞抑制率分别为76%、60%和62%。结论单用CNHK600-p53或Ad-p53对肝癌细胞SMMC7721的杀伤效果无明显差别,携带p53基因的CNHK600-p53能提高肝癌细胞株SMMC7721对化疗药物的敏感性,CNHK600-p53联合化疗药物治疗可望开辟克服肝癌耐药的新途径。
- 段纪成钱其军陈洁钱炎珍刘凯戴炳华杨家和
- 关键词：基因P53肝肿瘤抗药性基因疗法
- 携带mda7／IL24的三调控增殖腺病毒治疗肝癌的体外实验被引量：2
- 2008年
- 目的:构建缺失E1A区24 bp,由端粒酶反转录酶基因启动子和缺氧基因启动子调控的增殖腺病毒SG600-IL24,研究人白细胞介素24(interleukin 24,IL24)在肝癌细胞内的表达水平和SG600-IL24的增殖情况及其对肝癌细胞的杀伤作用。方法:利用DNA克隆和重组技术,构建SG600-IL24。ELISA检测IL24在肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7404和正常成纤维细胞BJ内的表达。半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infectious dose,TCID50)法检测SG600-IL24在3种细胞内48和96 h的增殖情况。MTT法和细胞病理效应(cytopathic effect,CPE)染色法检测SG600-IL24在不同MOI值对3种细胞的杀伤作用。结果:IL24在SMMC-7721和BEL-7404细胞内高表达而在BJ细胞内低表达。感染48和96 h后,SG600-IL24在SMMC-7721、BEL-7404和BJ细胞内分别增殖794和7940倍、622和7 810倍、20和200倍。MTT结果显示,杀伤50%和90%的SMMC-7721、BEL-7404和BJ细胞所需SG600-IL24的MOI值分别为0.3和5,3和20,50和150。CPE染色显示,SG600-IL24对肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7404有明显杀伤作用,而对BJ细胞无明显影响,并且该病毒的杀伤能力比增殖腺病毒ZD55-IL24和非增殖腺病毒Ad-IL24强。结论:SG600-IL24高效感染肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7404后,病毒增殖活跃,IL24的表达量显著升高。SG600-IL24对此2种肝癌细胞有良好的特异性杀伤作用,而对正常细胞没有明显影响,为应用该病毒治疗肝癌的体内研究建立了基础。
- 陈东锋那曼丽苏长青李林芳吴红平钱炎珍姜丽华吴孟超钱其军
- 关键词：白细胞介素24缺氧反应元件
- 基因-病毒治疗系统CNHK300-murine endostatin治疗肝癌的实验研究被引量：8
- 2004年
- 目的 探讨一种新的基因 病毒治疗系统CNHK30 0 murineendostatin(简称CNHK30 0 mE)对肝癌的治疗作用。方法 利用基因重组技术构建一种用人端粒酶逆转录酶 (hTERT)启动子控制腺病毒E1A基因表达并携带内皮抑素基因的基因 病毒治疗系统 ;通过 5 0 %组织培养感染剂量 (TCID5 0 )方法和细胞活性检测法四氮唑盐比色试验 (MTT法 )观察CNHK30 0 mE在 2种肝癌细胞株 (HepGII及Hep3B)及 1株正常的成纤维细胞株 (MRC 5 )中的病毒增殖能力和对细胞的杀灭能力 ;通过肝癌SMMC772 1细胞裸鼠皮下移植瘤模型观察该病毒对肝癌生长和对肿瘤血管生成的抑制作用 ;利用Western印迹法和酶联免疫吸附实验 (ELISA)法检测内皮抑素基因在体内和体外的表达。结果分别感染肝癌细胞株和正常细胞株 96h后病毒的增殖倍数相差 32 96倍 ,其达到半数杀伤量 (ED50 )时的感染复数 (MOI)值相差 2 5倍 ,差异有显著意义 ,且两者均明显优于ONYX 0 15 ;CNHK30 0 mE能明显抑制肝癌皮下移植瘤内血管的生成 ,对肿瘤生长的抑制作用与携带同一治疗基因的非增殖型腺病毒和不携带治疗基因的增殖型腺病毒ONYX 0 15相比均增强 (P均 <0 0 1) ;其所介导的内皮抑素基因在体内和体外的表达量均与携带该基因的非增殖型腺病毒载体相比均增高 (P <0 0
- 李根丛聂明明杨甲梅苏长青孙立臣钱炎珍Jonathan Sham方国恩吴孟超钱其军
- 关键词：ENDOSTATIN肝癌端粒酶逆转录酶HTERT内皮抑素
- 非增殖型和靶向增殖型腺病毒携带TRAIL基因治疗肝癌的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的比较携带人TRAIL基因的增殖型腺病毒(CNHK500-hTRAIL)和非增殖型腺病毒(Ad-hTRAIL)对TRAIL基因的表达以及对SMMC-7721肝癌细胞的杀伤能力。方法通过病毒增殖实验评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL的选择性增殖能力。通过MTT实验,评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL以及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL对人正常肝细胞株L02、人肝癌细胞株SMMC-7721的杀伤能力。采用ELISA法检测CNHK500-hTRAIL和Ad-hTRAIL感染SMMC-7721肝癌细胞后TRAIL基因的表达情况。以及通过流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响。结果CNHK500-hTRAIL能选择性地在SMMC-7721细胞内大量增殖,感染96 h后增殖达225137倍,在极低的MO I值(MO I=0.1)即可大量杀伤SMMC-7721细胞,明显强于Ad-hTRAIL,而对L02细胞无明显杀伤。CNHK500-hTRAIL和Ad-hTRAIL感染SMMC-7721细胞后,其TRAIL基因表达量,前者是后者的近10倍;CNHK500-hTRAIL可选择性地诱导SMMC-7721细胞早期凋亡,其能力显著高于Ad-hTRAIL。结论靶向增殖型腺病毒载体携带TRAIL基因对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达,明显优于传统的非增殖型腺病毒载体,应用前景广阔。
- 刘永靖陈飞虎黄学应苏长青王星华钱炎珍钱其军
- 关键词：增殖型腺病毒TRAIL
- 携带治疗基因的增殖型腺病毒CNHK300-m干扰素-γ的构建被引量：6
- 2007年
- 目的 研制出一种携带抗癌基因的选择增殖型腺病毒载体系统。方法 克隆鼠干扰素（IFN）-γ基因序列，利用分子克隆技术将其插入肿瘤特异性增殖病毒的病毒基因组中，得到腺病毒载体质粒pSC300-mIFN-γ。通过pSG300-mIFN-γ与质粒pBHGE3在293细胞中同源重组得到重组病毒CNHK300-mIFN-γ。扩增、纯化病毒，用TCID50方法测病毒滴度。通过病毒增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力，通过Western blot检测腺病毒蛋白的表达，通过双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）检测重组病毒在不同细胞及不同时相的mIFN-γ表达量。结果 成功构建了携带治疗基因的增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ，病毒滴度为1．0×10^9pfu／ml，增殖实验证实CNHK300-mIFN-γ可以选择性地在端粒酶阳性肿瘤中增殖，Westernblot分析结果显示腺病毒的E1A蛋白选择性在端粒酶阳性的肿瘤细胞中表达，ELISA显示CNHK300-m IFN-γ感染端粒酶阳性肿瘤后有大量mIFN-γ的表达，并随着感染的时间表达量也相应上升。结论 CNHK300-mIFN-γ为肿瘤的生物治疗提供了一种新的策略。
- 彭林辉张柏和张琪苏长青崔贞福钱炎珍吴孟超钱其军
- 关键词：腺病毒端粒酶生物治疗干扰素-Γ
