郑坚
- 作品数：12 被引量：34H指数：3
- 供职机构：汕头大学医学院炎症与免疫性疾病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市中医药中西医结合科研课题广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胰蛋白酶诱导人脐静脉内皮细胞分泌白细胞介素-8
- 2011年
- 目的:研究胰蛋白酶对IL-8释放的影响。方法:分离、培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)、倒置显微镜观察形态变化,流式细胞术检测内皮细胞标志和蛋白酶活化受体-2(proteinase-activated receptor-2,PAR-2)表达,ELISA检测HUVECs培养上清中IL-8水平。结果:HUVECs表达内皮细胞标志和PAR-2。刺激16 h,1 g/ml胰蛋白酶和100M PAR-2激活肽组HUVECs单层均匀性降低。胰蛋白酶能够显著刺激HUVECs释放IL-8,PAR-2激活肽也诱导IL-8水平升高。蛋白酶抑制剂和PAR-2抑制肽均能够显著抑制胰蛋白酶诱导的IL-8释放。PAR-2激活肽和胰蛋白酶诱导升高的IL-8水平之间成正相关性。结论:胰蛋白酶很可能通过PAR-2激活促进血管内皮细胞释放IL-8。
- 牛青霞陈卓毅林洁莲郑坚
- 关键词：内皮细胞胰蛋白酶白细胞介素-8
- 鲨鱼软骨酸性粘多糖对大鼠高血脂的影响被引量：7
- 1997年
- 鲨鱼软骨酸性粘多糖（AMPSS）连续灌胃30天，研究其对实验性高血脂大鼠的影响。结果表明：AMPSS对高血脂大鼠血清甘油三脂（TG）及体重没有显著影响（P>0．05），但能显著降低其血清总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）（P<0．05）；显著升高高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）（P<0．05）；LDL-C／HDL-C显著降低，说明AMPSS有明显抗高血脂作用。
- 谢仰民郑坚
- 关键词：鲨鱼软骨粘多糖高血脂
- 流体力学注射介导的重组pcDNA-IFN-λ3-EGFP质粒在小鼠体内的表达被引量：2
- 2009年
- 目的研究流体力学尾静脉注射对目的基因器官靶向性的影响。方法将BALB/c小鼠按随机数字表分组法分为流体力学注射组和空质粒对照组。流体力学注射组将100μg/只带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的表达质粒pcDNA-IFN-λ3-EGFP溶液2ml在5s内快速注入尾静脉,对照组在5s内注入空质粒pcDNA3.1的生理盐水2ml。注射后在不同时间内用过量麻醉剂处死小鼠,取肝、肺、肾、心、脑等组织作冰冻切片,于荧光显微镜下观察。结果流体力学注射pcDNA-IFN-λ3-EGFP质粒在肝组织中表达IFN-λ3-EGFP融合蛋白,注射8h后即有较强的表达,24h后表达最强,2d后明显减弱,1周后消失。其他组织及对照组未检测到绿色荧光蛋白表达。结论流体力学注射方法是肝靶向性的活体基因转移方法,绿色荧光蛋白可作为该方法进行目的基因研究的一个可靠和方便的示踪剂。
- 郑坚郑晓璇李明才柳晓金武燕
- 关键词：绿色荧光蛋白质粒
- 人脐静脉内皮细胞表达蛋白酶激活受体
- 2011年
- 目的研究蛋白酶激活受体(Protease-activated receptors,PARs)在人脐静脉内皮细胞(Human umbil-ical vein endothelial cells,HUVECs)上的组成型表达。方法采用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)和流式细胞术,检测PARs的mRNA和蛋白质表达。结果未经任何激活剂处理的HUVECs表达PAR1、PAR2和PAR3mRNA。PAR1、PAR2和PAR3的阳性细胞率分别为43.3%、49.2%和56.7%,其平均荧光强度分别为42.1、22.5和24.3。结论 HUVECs组成型表达PAR1、PAR2和PAR3,以为PARs的生理和病理生理功能研究提供依据。
- 牛青霞陈卓毅郑坚林洁莲
- 关键词：内皮细胞蛋白酶激活受体组成型表达
- 人白细胞介素-17二级结构及B细胞表位的预测
- 2009年
- 目的：预测人白细胞介素（IL）-17的二级结构特征及其B细胞抗原表位。方法：采用SOPMA法预测人IL-17的二级结构；借助ProSeale、Bceprled服务器，分析人IL-17亲水性、可及性和柔韧性，并结合二级结构特征，预测IL-17的B细胞表位。结果：人IL-17的二级结构由α螺旋（14．39％）、无规卷曲（56．06％）、延伸主链〈24．24％）和β转角（5．30％）组成。其B细胞表位可能位于N端第8—20、30—47和53—63氨基酸区段。结论：该预测将有助于确定人IL-17的B细胞表位，为研制抗人IL-17中和性抗体提供理论依据。
- 郑坚周艳春
- 关键词：白细胞介素-17B细胞表位
- 胰蛋白酶对内皮细胞释放IL-10、IL-12和INF-γ的影响
- 2011年
- 目的研究胰蛋白酶对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放IL-10、IL-12和INF-γ释放的影响。方法分离、培养HUVECs,倒置显微镜观察原代细胞形态变化,免疫荧光染色检测蛋白酶激活受体2(PAR2)表达,ELISA法检测HUVECs培养上清中IL-10、IL-12和INF-γ水平。结果贴壁后的原代HUVECs经历呈圆形或类圆形、梭性和多角形的形态变化。HUVECs表达PAR2,荧光分布于细胞周边。胰蛋白酶诱导HUVECs上清中的IL-10和IL-12水平显著升高,INF-γ水平几乎未被检出。蛋白酶激活受体-2抑制剂能够降低胰蛋白酶诱导的IL-10和IL-12水平。结论胰蛋白酶可能通过PAR2激活促进内皮细胞释放IL-10和IL-12。
- 牛青霞郑坚陈卓毅林洁莲
- 关键词：胰蛋白酶白细胞介素-12Γ干扰素
- 蛋白酶激活受体-2激活剂对人脐静脉内皮细胞释放IL-1α的影响
- 2011年
- 目的研究蛋白酶激活受体-2(protease-activated receptor-2,PAR2)激活剂对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)释放白细胞介素(IL)-1α的影响。方法分离、培养原代HU-VECs。胰蛋白酶和PAR2激活肽刺激HUVECs 16 h,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HUVECs培养上清中的IL-1α水平。结果胰蛋白酶和PAR2激活肽诱导HUVECs培养上清中IL-1α水平显著升高,升高水平分别为基础水平的4.8和4.6倍。相应浓度的对照肽则不能够诱导HUVECs释放IL-1α。大豆胰蛋白酶抑制剂和PAR2抑制肽能够显著抑制胰蛋白酶和PAR2激活肽诱导的IL-1α分泌。结论 PAR2激活剂能够通过诱导HUVECs释放IL-1α参与炎症反应。
- 牛青霞林洁莲郑坚陈卓毅
- 关键词：蛋白酶激活受体白细胞介素-1
- 扩增片段长度多态性技术应用于复杂样本的方法学探讨
- 2010年
- 目的 探讨扩增片段长度多态性（AFLP）技术应用于变态反应疾病等复杂样本的遗传研究之可能性,探讨差异片段后续分析方法.方法 利用公共数据库中获得的遗传背景差异较大的成对材料进行AFLP筛选所得的差异片段,采用不同的BLAST程序进行深入的生物信息学分析.结果 不同的BLAST程序获得的结果所包含的可用信息量不同.以BLASTX程式获得的结果显示,前述差异片段分别与洋葱伯克霍尔德菌噬菌体及结核分支杆菌末端酶的大亚基高度同源.在后二者基本信息缺失的情况下,利用关键词搜索获得了末端酶与肿瘤形成及转移的重要信息.结论 通过采用AFLP方法对遗传背景差异较大的成对材料进行分子标记筛选,获得的差异片段进一步经生物信息学分析,对于后续的深入研究十分关键.
- 郑坚邹泽红傅意玲
- 关键词：生物信息学
- 蛋白酶抑制剂对肥大细胞类胰蛋白酶分泌的影响被引量：20
- 2002年
- 目的 探讨蛋白酶抑制剂和组胺对肥大细胞类胰蛋白酶分泌的影响。方法 扁桃体组织经酶消化后 ,细胞成份用全HBSS重新悬浮。肥大细胞激发和抑制剂作用的试验在 37℃条件下完成。类胰蛋白酶水平用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定。结果 鱼精蛋白具有刺激人类扁桃体肥大细胞释放类胰蛋白酶的作用 ,其分泌量可高达基础分泌量的5倍。高浓度TLCK和TPCK可抑制抗 IgE诱导的类胰蛋白酶释放。TLCK在有否预培养的情况下均能抑制钙离子导入剂 (cal ciumionophore ,CI)诱导的类胰蛋白酶释放 ,而TPCK则只有在 2 0min预培养后才能显示此作用。结论 TLCK和TPCK抑制IgE依赖性和非依赖性类胰蛋白酶释放提示具有胰蛋白酶和糜蛋白酶活性的酶参与肥大细胞的激活 分泌偶联过程。
- 谢华何韶衡郑坚
- 关键词：肥大细胞类胰蛋白酶蛋白酶抑制剂组胺
- 紫花牡荆素抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖与侵袭能力的研究
- 2012年
- 目的观察紫花牡荆素对乳腺癌MCF-7细胞株增殖与侵袭能力的影响并探讨其分子机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法与侵袭实验检测紫花牡荆素对MCF-7细胞增殖与侵袭能力的影响，应用反转录PCR、Western blot法、Tunel法检测紫花牡荆素对基因表达、蛋白表达、细胞凋亡的影响。结果不同浓度紫花牡荆素均抑制MCF-7细胞增殖水平，同未加药对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05），5、10、20μmol／L紫花牡荆素作用后，MCF-7细胞迁移数与未处理组相比分别降低20.3％、44．4％和50．3％（P〈0．05）。以10μmol／L紫花牡荆素处理后，凋亡细胞数增多，可以上调Bax与Caspase-3蛋白的表达水平，下调基质金属蛋白酶（MMP）-2与MMP-9的mRNA和蛋白表达水平。结论紫花牡荆素对于乳腺癌细胞恶性增殖与侵袭能力具有显著抑制作用。
- 黄继红陈少英郑坚
- 关键词：紫花牡荆素乳腺肿瘤细胞增殖肿瘤侵润
