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Burkholderia cepacia中具有解脂作用的胆固醇酯酶的酶学特性被引量：2: 2019年; 为了更好地应用于工业领域,系统研究Burkholderia cepacia ZWS15胆固醇酯酶(EC 3.1.1.13 cholesterol esterase,CHE)的酶学特性。通过DEAE离子交换从该菌发酵液中获得一种CHE,并探讨其有机溶剂与表面活性剂耐受性,以及底物水解特性。CHE在pH 5.5~9.0保持稳定,最适反应温度为40℃,在70℃温育2 h仍能保留70%以上的酶活,具有显著耐热性;在50%(体积分数)有机溶剂或5%(体积分数)表面活性剂存在下也具有较高酶活。飞行时间质谱鉴定该酶分子质量为37 kDa,其与胆固醇酯酶(源于洋葱伯尔霍尔德菌,Burkholderia cepacia)及脂肪酶(源于假单胞菌属,Pseudomonas sp.)具有较高匹配度。与商品化酶相比,CHE不仅具有胆固醇酯酶活性(对长链胆固醇酯类底物有明显偏好性),还具有解脂功能(可作用于三酰基甘油酯及对硝基苯酯)。该酶的优良性能可为其在食品、诊断、制浆造纸等领域的工业应用提供参考与借鉴。; 孙柳青吴梦棋张玲武迪辛瑜杨海麟; 关键词：BURKHOLDERIA 热稳定性有机溶剂耐受性

嗜热脂肪酶-无机杂化纳米花的制备及其性能研究被引量：3: 2022年; 为满足工业生物催化需求,寻求一种简单、快捷、有效的脂肪酶固定化方法来扩大其实际应用范围。采用声化学方法,在10 min内将脂肪酶固定于由磷酸铜沉淀所构成的无机杂化纳米花中,并进一步通过扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)、X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)和傅里叶红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)等技术对制备的脂肪酶杂化纳米花进行表征。随后,研究了不同金属离子、金属盐离子类型、合成条件对脂肪酶杂化纳米花活性的影响。结果表明,Cu^(2+)可实现最佳固定化效果,且不同含铜无机盐类型对所形成的杂化纳米花活性存在影响。其中,使用CuSO_(4)合成纳米花可实现100%的包封率,而CuCl_(2)可使最终合成的纳米花相对酶活力达到145.7%。酶动力学研究结果表明,CuSO_(4)和CuCl_(2)纳米花的催化效率(k_(cat)/K_(m))分别是游离酶的106%和134%。此外,该固定化方法可有效提高固定化酶的储藏稳定性,在室温下储藏30 d其酶活力仍能保持在80%以上。在重复使用性研究中发现,固定化酶在连续使用5次后仍具有40%以上的催化活性。该研究结果有助于提高脂肪酶在工业生产中的适用性,并为其在生物柴油合成、洗涤剂及高温生产环境等多方面领域的应用奠定基础。; 刘振山时祎陈剑雄辛瑜辛瑜张梁; 关键词：脂肪酶固定化催化活性稳定性

微板核酸杂交检测芽孢杆菌属的方法建立: 2015年; 以白酒发酵过程中的优势菌枯草芽孢杆菌为模式菌株,针对具有高保守性及特异性的16SrRNA设计一组核酸探针,建立了对芽孢杆菌属进行定性和定量分析的新型的微板核酸杂交检测方法,优化了关键检测条件。结果表明,当S1酶反应温度为42℃时,芽孢杆菌属检测探针能分开目标序列仅差一个碱基的近缘属。当捕获探针和信号探针工作浓度均为5nmol/L,与分析探针杂交温度都为50℃,杂交时间分别为60min和15min时,检测信号的强弱与细菌数呈良好的线性关系,能实现定量检测,灵敏度高达1.33×102cells/mL。本方法提供了一个快速定性定量的检测技术,具有很好的应用于白酒发酵过程中芽孢杆菌属实时监测的潜力。; 刘婷冯守帅辛瑜王武杨海麟; 关键词：芽孢杆菌属 RNA

《蛋白质纯化技术》理论与实验课程教学探索: 2019年; 《蛋白质纯化技术》课程是大学生物学科教学中的一门较为特殊的课程,是生物学的下游技术集成,也是多学科的交叉。论文针对《蛋白质纯化技术》课程,进行了课程教学的探索与改革,构建了贴近领域前沿的开放性教学模式,由教师引导学生自主选择浸入,进行对等式的教学,帮助学生完成差异性的特色鲜明的实验自主设计。; 辛瑜; 关键词：开放式教学

氨基化大孔硅胶共价固定Pancreas porcine脂肪酶的研究被引量：2: 2013年; 本研究以大孔硅胶为材料,对其进行环氧基和氨基两步活化,然后利用碳化二亚胺(EDC)将氨基化硅胶与Pancreas porcine脂肪酶(PPL)进行共价固定化。通过优化固定化条件,在EDC与蛋白摩尔比为50:1;载体与粗酶质量比为10:1,固定化pH为6.0,固定化时间为8 h的条件下获得最大固定化酶酶活为86.67 U/g,远远高于未修饰硅胶物理吸附固定PPL所得固定化酶酶活(33.33U/g)。此外,本文还利用扫描电镜(SEM)和傅立叶变换光谱仪(FT-IR)对固定化前后硅胶进行了结构表征,固定化后硅胶表面出现明显的丝状蛋白,且固定化酶在1543 cm-1处出现酰胺Ⅱ带,说明PPL成功共价固定于氨基化硅胶上。通过对所得固定化酶性质进行分析,结果表明,固定化酶最适反应pH向碱偏移一个单位,最适反应温度提高了5℃,热稳定性明显提高。; 温小荣夏小乐杨海麟辛瑜; 关键词：PANCREAS 碳化二亚胺酶活

不同功能单体合成的谷胱甘肽分子印迹聚合物的研究被引量：3: 2012年; 采用分子印迹技术,以谷胱甘肽为模板分子,以丙烯酰胺、甲基丙烯酸为功能单体制备分子印迹聚合物;通过静态吸附试验,探讨了合成分子印迹聚合物时模板分子与功能单体的物质的量比、上样液pH值、吸附平衡时间、上样液浓度对聚合物吸附性能的影响;实验结果表明:以丙烯酰胺、甲基丙烯酸为功能单体制备谷胱甘肽分子印迹聚合物时,谷胱甘肽与丙烯酰胺、甲基丙烯酸的最适摩尔比分别为1∶5和1∶4,以及最适静态吸附条件为:上样液pH值分别为3.0和5.0左右;上样液浓度分别为1.50～2.00 g/L和1.00～1.50 g/L;静态吸附平衡时间为18和20 h左右.同时也探讨了分子印迹聚合物对谷胱甘肽结构类似物的吸附性能,结果表明,所合成的分子印迹聚合物对谷胱甘肽具有良好的选择性吸附能力.同时也研究了分子印迹聚合物对酵母抽提物中谷胱甘肽的吸附性能,以丙烯酰胺和甲基丙烯酸为功能单体制备的分子印迹聚合物对混合体系中谷胱甘肽的一次性提取率分别为41%和77%.分子印迹聚合物均表现出了较好的吸附特性,为分离提纯谷胱甘肽提供一种可选择的途径.; 辛瑜仝艳军杨海麟张玲张玉然陈亦王武; 关键词：分子印迹谷胱甘肽

蜡样芽胞杆菌磷脂酶C在乳酸克鲁维酵母中重组表达、纯化及酶学性质分析被引量：5: 2017年; 【目的】构建蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)的重组乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)菌株、纯化重组蛋白并对其进行酶学性质分析。【方法】以B.cereus基因组DNA为模板,PCR扩增得到磷脂酶C基因(bcplc),构建重组乳酸克鲁维酵母表达质粒并转化到乳酸克鲁维酵母中,实现bcplc基因的表达。利用镍柱亲和层析纯化和脱盐柱得到电泳纯的重组磷脂酶C(rbcPLC)。【结果】成功构建产磷脂酶C的重组乳酸克鲁维酵母并纯化了重组磷脂酶C,纯化后rbcPLC经SDS-PAGE分析在40 kDa附近出现显性条带。NPPC法测得rbcPLC酶活为19251 U/mg,最适反应温度为80°C,最适pH为9.0。在低于40°C时,pH 7.0-8.0时,rbcPLC重组酶较稳定。Cu^(2+)和Co^(2+)对其有明显的抑制作用;Zn^(2+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)、Mg^(2+)对其有明显的促进作用。【结论】首次实现了对蜡样芽胞杆菌来源的磷脂酶C在乳酸克鲁维酵母中的重组表达、纯化及其酶学性质分析,为其它食品安全性微生物来源的磷脂酶C的研究提供了借鉴意义。; 肖超张梁李颜颜辛瑜陈国安杨盛荣; 关键词：蜡样芽胞杆菌乳酸克鲁维酵母纯化酶学性质

甜型黄酒陈酿过程中5-羟甲基糠醛的生成规律被引量：9: 2020年; 甜型黄酒在常温陈酿过程中不断进行美拉德反应产生5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF),为探究其5-HMF的生成规律,采用高效液相色谱法检测了江浙地区不同陈酿年份的甜型黄酒。结合甜型黄酒中理化指标分析两者相关性,并通过甜型黄酒模拟体系分析各理化指标与5-HMF形成的关系,发现在甜型黄酒中随着时间的延长其5-HMF含量不断增加,其还原糖含量、氨基态氮的含量及pH值逐渐上升,总酸含量逐渐减少;5-HMF与还原糖含量及氨基态氮含量、pH值和总酸含量分别在0. 05和0. 01水平(双侧)上显著相关;5-HMF含量与葡萄糖含量及乳酸含量呈正相关、与pH值呈负相关,与氨基酸含量呈先升后减的关系。证明在甜型黄酒中醛糖作为反应底物必不可缺,并且在酸性条件下体系才能生成5-HMF;少量氨基化合物会增加5-HMF含量,但过量可能会减少其含量。; 孔令华夏小乐夏小乐; 关键词：甜型黄酒陈酿 5-羟甲基糠醛美拉德反应

Bacillus sp.肌氨酸氧化酶的脱辅基与重构被引量：1: 2018年; 在肌氨酸氧化酶脱辅基的效果不够理想的情况下,利用不含辅基的重组肌氨酸氧化酶包涵体进行透析复性,以期重现SOX酶与辅酶的复合。研究表明,肌氨酸氧化酶(SOX)包涵体较适合的复性条件为:酶蛋白质量浓度0.3 g/L,透析液pH 8.5,温度4℃,氧化还原值(GSH/GSSG)为2,复性时间为24 h。作者还比较了不同天然辅基与SOX蛋白的复合效果,通过圆二色性、红外光谱以及DSC热差分析,探究了天然辅基与肌氨酸氧化酶复合后对酶蛋白二级结构、比酶活及稳定性的影响。; 王庆辛瑜杨海麟仝艳军王武

人源内皮抑素在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：1: 2022年; 为高效制备人源内皮抑素(human endostatin,hEDN),解决其在大肠杆菌中的可溶性表达。该研究在大肠杆菌BL21(DE3)中分别构建了hedn单基因、融合标签共表达和融合表达系统,将重组菌在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导下进行摇瓶发酵,通过SDS-PAGE分析及串联飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight/ionization time of flight,MALDI-TOF/TOF)鉴定hEDN的表达情况。结果表明,在构建的重组菌中只有含有谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase,GST)促溶标签的重组菌株BL21(DE3)/pGEX-6p-1-hedn能成功实现hEDN融合蛋白的可溶性表达。进一步地,通过改变诱导温度、诱导时间、诱导剂IPTG浓度及加入诱导剂IPTG时间来优化hEDN融合蛋白的表达条件,最终确定hEDN融合蛋白的最佳发酵条件为20℃,8~12 h加入0.3 mmol/L IPTG诱导36 h。通过亲和层析(PrePack GSH Purose 4 Fast Flow预装柱)初步纯化得到hEDN融合蛋白,经重组PreScission蛋白酶(PreScission protease,PPase)酶切后得到分子质量约为22 kDa的目的条带,与hEDN理论分子质量相一致。该研究为人源多肽的可溶性表达与纯化提供了研究思路,同时对微生物发酵制备功能性多肽具有一定的借鉴意义。; 张吉吴志勇朱玲玉辛瑜辛瑜石贵阳顾正华; 关键词：可溶性表达融合标签多肽

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辛瑜

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