赵红梅
- 作品数：11 被引量：36H指数：3
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- 牛病毒性腹泻病毒对新西兰白兔致病性分析及E2蛋白免疫效果的评价被引量：1
- 2022年
- 【目的】研究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染对新西兰白兔的致病性以及BVDV E2重组蛋白的免疫效果。【方法】将实验室培养保存的BVDV病毒纯化并按照Reed-Muench法测定其病毒滴度。在致病性试验中,将10只新西兰白兔随机分为感染组和对照组,每组5只。感染组用1 mL纯化的BVDV病毒攻毒(滴鼻500μL、耳缘静脉注射500μL),对照组用等体积的生理盐水处理,连续3 d,每天1次,每天观察各组兔的临床症状并测量体温;分别于接种病毒后第6、9、12、15、17天通过耳缘静脉采集血液检测血常规;感染病毒第17天采集鼻拭子进行RT-PCR鉴定,采集后剖杀并采集气管、肺脏、脾脏和小肠组织,制备病理切片观察病理变化。在免疫效果评价试验中,将10只新西兰白兔随机分为免疫组和对照组,每组5只,免疫组用E2重组蛋白(1 mg/只)与佐剂混合后经肌内多点注射免疫新西兰白兔,对照组接种等体积生理盐水;共免疫2次,2次免疫间隔为14 d。在一免后0、7、14、21、28 d采集血清,通过间接ELISA方法检测血清中抗重组蛋白特异性抗体水平;在一免后第28天按致病性试验中方法攻毒,在攻毒第17天采集鼻拭子进行RT-PCR鉴定,采集气管、肺脏、脾脏和小肠组织制备病理切片观察病理变化及免疫组织化学检测。【结果】纯化后BVDV的病毒滴度为4.16×10~6 TCID/mL。与对照组相比,感染组部分新西兰白兔6 d内活动减少,采食略微减少,6 d后逐渐恢复正常,在感染第13天出现腹泻症状,从第5天开始体温略微升高,但均在正常范围内波动。与对照组相比,在攻毒第6和9天,感染组白细胞和血小板分别显著和极显著降低(P<0.05;P<0.01);在攻毒第12、15和17天,感染组白细胞、血小板和淋巴细胞均极显著降低(P<0.01)。鼻拭子RT-PCR检测为阳性,气管、肺脏、脾脏及小肠组织表现出轻度至重度的组织病理学变化。间接ELISA检测结果表明,在一免后7 d
- 赵逢淼郭婷周雅坪赵红梅王宇琛田广原孙雅婕卞宇晨于佳梁郝永清
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒新西兰白兔免疫组化亚单位疫苗
- 奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌多价毒力因子疫苗的构建及临床试验研究
- 人们对于奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌疫苗的研究已经进行了几十年的时间了，但针对金黄色葡萄球菌单一的毒力因子的活苗，灭活苗以及基因工程疫苗均未取得显著的免疫效果。 本研究通过分离牛外周血的淋巴细胞克隆得到牛IgG-Fc基因片...
- 赵红梅
- 关键词：奶牛饲养乳房炎防治葡萄球菌
- 牛异食癖的病因及防治方法被引量：4
- 2018年
- 牛异食癖是由于牛机体代谢紊乱引起采食异常而导致的一种复杂疾病,多发生在舍饲牛。矿物质和维生素缺乏、蛋白质或氨基酸缺乏、寄生虫病等疾病因素、长期舍饲、缺乏运动场等均可引起牛的异食癖,病牛主要表现为采食无营养价值和不应采食的物品,引起牛消化异常、生长停滞最终死亡。分析介绍了该病的主要发病原因、症状及防治措施。
- 赵红梅赵红梅
- 关键词：异食癖矿物质缺乏维生素缺乏
- BPIV3 NP蛋白的原核表达及其对BPIV3灭活疫苗免疫增强作用的研究被引量：1
- 2022年
- 【目的】验证牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)NP蛋白对BPIV3灭活疫苗的免疫效果是否有增强作用。【方法】利用生物信息学软件对NP基因编码的蛋白进行抗原性分析,筛选出抗原性区域,采用PCR方法扩增BPIV3截短的NP基因序列,连接至pET-32a(+)质粒上,通过大肠杆菌原核表达系统和Ni亲和层析的方法获得了较高纯度的BPIV3 NP蛋白,经Western blotting验证其反应原性。将BPIV3用0.3%甲醛灭活后与弗氏佐剂1∶1混合制备灭活疫苗。8只新西兰白兔随机分为4组:灭活疫苗组、NP蛋白组、灭活疫苗和NP蛋白混合组及对照组,每组2只。免疫前及免疫后每7 d采集血液分离血清,采用间接ELISA方法和病毒中和试验测定并比较4组新西兰白兔特异性抗体和中和抗体的水平。【结果】经DNAStar分析,NP蛋白第193-368位氨基酸处的平均抗原指数在0.4~1.7之间,亲水指数为0~1.5,证明该区域抗原性和亲水性较强;通过PCR扩增得到NP基因,并构建重组表达载体,通过基因测序证明该重组表达载体与预期结果一致;SDS-PAGE结果显示,NP蛋白表达量较高,蛋白分子质量为50 ku且以包涵体形式表达;Western blotting结果表明,所表达的蛋白具有较强的反应原性;ELISA结果显示,在免疫后28 d,对照组的特异性抗体效价为0,灭活疫苗组、NP蛋白组及灭活疫苗和NP蛋白混合组的特异性抗体效价分别达到1∶2^(11)、1∶2^(17)和1∶2^(18)。病毒中和试验结果显示,在免疫后28 d,对照组中和抗体效价为0,灭活疫苗组、NP蛋白组及灭活疫苗和NP蛋白混合组的中和抗体效价分别为1∶2^(3.32)、1∶2^(4.48)和1∶2^(4.98)。【结论】BPIV3 NP蛋白可增强BPIV3灭活疫苗的免疫效果,在灭活疫苗中加入NP蛋白可作为BPIV3灭活疫苗的新型接种方法。
- 王宇琛田广原周雅坪郭婷赵红梅孙雅婕赵逢淼卞宇晨于佳梁郝永清
- 关键词：NP蛋白原核表达灭活疫苗
- 无乳链球菌CP+Sip-FbsA偶联蛋白免疫学特性的研究被引量：4
- 2016年
- 为研究无乳链球菌荚膜多糖(CP)与表面免疫相关蛋白(Sip)和纤维蛋白原结合蛋白(FbsA)串联表达蛋白的偶联物CP+Sip-FbsA对无乳链球菌性奶牛乳房炎的免疫保护效果,本研究将纯化的CP+Sip-FbsA偶联物与铝盐佐剂混合,免疫泌乳期Wistar大鼠。通过ELISA方法进行血清效价检测和特异性抗体动态监测,以及T淋巴细胞增殖试验、流式细胞术、全血吞噬调理试验和大鼠乳腺攻毒保护试验对其免疫学特性进行研究。结果表明:与对照组相比,CP+Sip-FbsA免疫组血清中的抗体水平明显增高,T淋巴细胞增殖试验、流式细胞术、全血吞噬调理试验、大鼠乳腺攻毒保护试验显示CP+Sip-FbsA免疫组免疫效果高于其他免疫组和PBS对照组。本研究结果表明,CP+Sip-FbsA偶联物对无乳链球菌性乳房炎免疫效果较好,为进一步研究无乳链球菌亚单位疫苗提供了实验依据。
- 杜琳吕天星赵红梅李松建周雪崔健郝永清
- 关键词：无乳链球菌
- 绵羊肺炎支原体P60_(58aa-928aa)蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：3
- 2022年
- 【目的】建立基于绵羊肺炎支原体表面脂蛋白P60的间接ELISA方法。【方法】利用生物信息学软件对P60蛋白进行抗原性分析,筛选出抗原性最佳的区域,扩增目的基因后构建重组表达载体并进行基因测序,将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导抗原性最佳蛋白表达并进行诱导时间优化;利用SDS-PAGE分析该蛋白分子质量大小及其表达形式。以重组蛋白作为抗原,绵羊肺炎支原体阳性血清作为抗体,通过Western blotting方法分析其反应原性。以重组蛋白为包被抗原,建立抗原性最佳蛋白的间接ELISA抗体检测方法,用该方法对20份阴性血清进行检测,计算阴阳临界值;检测该方法的特异性、敏感性和重复性,并用建立的间接ELISA方法与间接血凝法对92份绵羊临床血清样本进行检测。【结果】经DNAStar分析,P60蛋白第58-928位氨基酸区域的平均抗原指数在0.8~1.7之间,亲水指数为0~2.0,证明该区域(P60_(58aa-928aa))抗原性和亲水性较强;通过PCR扩增得到P60_(58aa-928aa)基因,并构建重组表达载体,通过基因测序证明该重组表达载体与预期结果一致。SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导浓度为1 mmol/L,诱导10 h时蛋白表达量较高,蛋白分子质量为42 ku,在大肠杆菌中以包涵体的形式表达;Western blotting结果表明,构建的重组蛋白具有良好的反应原性。对ELISA各条件进行优化结果显示:抗原包被浓度为0.5μg/mL,一抗最佳稀释浓度为1∶100,最佳孵育时间为1.5 h,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4000,判定阴阳性血清的临界值为0.36。对口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、牛支原体(Mb)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)的标准阳性血清的检测均为阴性,证明该方法特异性较强;敏感性试验结果表明,血清稀释度为1∶2048时仍为阳性;批内重复试验和批间重复试验的变异系数均<10%,证明该方法具有较好的
- 田广原王宇琛周雅坪郭婷赵红梅赵逢淼孙雅婕卞宇晨于佳梁周雨霞
- 关键词：绵羊肺炎支原体原核表达间接ELISA
- 华北地区牛源无乳链球菌的分离鉴定及生物学特性被引量：22
- 2016年
- 【目的】了解华北地区牛源无乳链球菌的生物学特性。【方法】在2012到2015年间从内蒙古自治区、河北、北京等地隐性乳房炎557份奶牛乳样中分离、收集无乳链球菌。采用纸片扩散法和PCR的方法对这些菌株分别进行耐药谱测定、荚膜分子分型、表面蛋白基因及毒力因子的检测。【结果】无乳链球菌的分离率为5.03%,其药物敏感性与其他地区无明显差别。分离到的28株无乳链球菌均属于荚膜Ia型,且毒力基因基本相同并且其表面蛋白均属于未定型。【结论】华北不同地区的无乳链球菌有相似的药物敏感性和毒力基因。为奶牛乳房炎无乳链球菌疫苗的研制及药物防治提供理论依据。
- 杜琳周雪赵红梅吕天星崔健李松建史晓娜郝永清
- 关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌血清型毒力因子
- 抗体检测胶体金免疫层析技术中不同拦截模式的初步比较研究
- 2023年
- 胶体金免疫层析技术是以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应中的一种新型快速检测技术,目前国内外对于抗体检测胶体金免疫层析技术中不同拦截模式的比较研究较少。本研究将牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)的gD基因进行了原核表达,以纯化的IBRV gD-pAb作为检测靶标,将胶体金标记的g D蛋白、金黄色葡萄球菌蛋白A(staphylococcal protein A,SPA)、链球菌蛋白G(streptococcal protein G,SPG)、羊抗兔IgG分别包被于金垫,将未标记的上述4种蛋白分别包被于NC膜的检测线处,将金垫和NC膜进行组合,制备出7种抗体拦截模式的胶体金免疫层析试纸,通过比较其灵敏度、显色效果及批内重复性来评价不同拦截模式的实际性能。结果显示,标记抗原-SPG、标记抗原-SPA、标记抗原-二抗拦截模式(间接法)的灵敏度约为标记抗原-抗原拦截模式(双抗原夹心法)的200倍;间接法中标记抗原-SPG、标记抗原-SPA与标记SPG-抗原、标记二抗-抗原拦截模式的灵敏度相近,而标记抗原-二抗拦截模式及标记SPA-抗原拦截模式由于IgG结合蛋白的特性而导致试纸的灵敏度降低、显色效果及批内重复性变差;7种抗体拦截模式试纸在检测副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)、赤羽病病毒(akabane virus,AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛支原体(Mycoplasma bovis)、小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)的标准阳性血清时均为阴性反应;IgG结合蛋白的实际性能排序为SPG>SPA>二抗。本研究为其他疫病抗体检测的胶体金免疫层析试纸的制备提供参考。
- 卞宇晨田广原王宇琛于佳梁周雅坪郭婷赵红梅赵逢淼孙雅婕周雨霞
- 关键词：双抗原夹心法
- 牛肺炎链球菌重组PsaA蛋白对牛胚气管上皮细胞黏附抑制作用的研究
- 2024年
- 为研究牛肺炎链球菌的黏附蛋白—肺炎链球菌表面黏附素A (PsaA)对牛肺炎链球菌黏附牛胚气管上皮细胞的影响,本研究利用PCR扩增牛肺炎链球菌psaA基因,构建重组质粒pET32a-PsaA,经双酶切和测序鉴定正确后,将阳性重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞后进行IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE和western blot鉴定重组PsaA蛋白(rPsaA)的表达情况及反应原性,结果显示,rPsaA在上清和沉淀中均获得了表达,且具有较好的反应原性。将牛胚气管上皮细胞与1.3×10^(8)cfu/mL的牛肺炎链球菌稀释液于37℃共孵育后,利用间接免疫荧光试验(IFA)检测牛肺炎链球菌对牛胚气管上皮细胞的黏附性,结果显示,可观察到黏附在牛胚气管上皮细胞的牛肺炎链球菌的绿色荧光,即牛肺炎链球菌可以黏附牛胚气管上皮细胞。利用牛肺炎链球菌稀释液孵育经不同浓度rPsaA预处理的牛胚气管上皮细胞后,对黏附的细菌计数,结果显示,rPsaA可以极显著减少牛肺炎链球菌对牛胚气管上皮细胞的黏附菌数(P<0.01)。利用本研究制备的rPsaA多克隆抗体和肺炎链球菌阳性血清分别与牛肺炎链球菌作用后,与牛胚气管上皮细胞孵育,对黏附的细菌计数,结果显示,rPsaA多克隆抗体与肺炎链球菌阳性血清均能有效减少牛肺炎链球菌对牛胚气管上皮细胞的黏附数。本研究经原核系统表达了牛肺炎链球菌rPsaA,并首次证明rPsaA具有影响牛肺炎链球菌黏附牛胚气管上皮细胞的作用,该结果为探究抑制肺炎链球菌黏附呼吸道上皮细胞的机理以及肺炎链球菌亚单位疫苗的研究奠定了基础。
- 孙雅婕郭婷周雅坪赵红梅赵逢淼高源李梦思郝永清
- 关键词：肺炎链球菌原核表达
- 牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测胶体金免疫层析试纸的研制
- 2023年
- 将gD蛋白用胶体金标记并包被于结合垫作为检测探针,未标记的gD蛋白包被NC膜作为检测线,以金标记鼠IgG与羊抗鼠IgG作为独立质控系统,利用双抗原夹心法建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)抗体的胶体金免疫层析试纸,并对该试纸进行了性能评价。结果显示,该试纸在检测副结核分枝杆菌(MAP)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛支原体(M.bovis)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、口蹄疫病毒(FMDV)的标准阳性血清时均为阴性反应;该试纸在检测IBRV标准阳性血清时敏感性为1∶16;将该试纸与进口商品化ELISA试剂盒共同检测60份待检牛血清,两者的阳性符合率为93.3%,阴性符合率为100%,总符合率为96.7%。结果表明,本试验建立的胶体金免疫层析试纸可在10~15 min完成检测,具有快速、准确、简便等特点,为临床定性检测及现场诊断牛传染性鼻气管炎提供了有效工具。
- 卞宇晨田广原王宇琛于佳梁周雅坪郭婷赵红梅赵逢淼孙雅婕周雨霞
