赵伟光
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 供职机构：武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：武汉市科技攻关计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 一种与HBx蛋白相互作用未知蛋白抗体的制备及其应用
- 2005年
- 本研究构建UK蛋白的原核表达载体pET28-UK,转化BL21宿主菌,经过IPTG诱导、表达、纯化,获取UK蛋白,制备抗原,免疫杭州大耳白兔.经过3次免疫后心脏采血,吸取血清作为抗体.经过ELISA和免疫荧光试验验证,该抗体可以识别机体UK蛋白.本研究为深入阐明HBx与UK蛋白的相互作用的功能性试验,以及完全阐明UK蛋白在细胞内的功能奠定了基础.
- 张建林思维赵伟光黄静朱应李雁章晓联吴建国
- 关键词：HBX蛋白抗体
- 伪狂犬病毒糖蛋白H基因片段的克隆、序列测定和分析被引量：1
- 2000年
- 对伪狂犬病毒湖北地方株 (PRV HB株 )糖蛋白 H基因片段进行了扩增、克隆、序列测定和分析 ,比较了该序列与 PRV Ka株及 NIA- 3株三者之间的同源性 .结果显示 ,克隆片段长 1396 bp,G+C含量 75 .6 % ,包括糖蛋白 H (g H ) N端 2 83个氨基酸编码区及上游调控序列和胸苷激酶 (TK) C端 136个氨基酸编码区 .g H基因ORF上游调控区存在有 TATA框和 CAT框的真核启动子特征结构 .PRV HB株 g H基因片段序列与 PRV Ka株和 NIA- 3株相应序列的核苷酸同源性相同 ,为 99.6 % .推导的 g H多肽 N端第 1～ 30位氨基酸组成的肽段富含疏水性氨基酸 ,具有真核信号肽的序列特征 .
- 潘兹书张楚瑜赵伟光丁建华
- 关键词：伪狂犬病毒基因克隆
- 伪狂犬病毒TK基因转移载体构建及LacZ基因表达被引量：6
- 2000年
- 在扩增、克隆 PRV tk、g H基因的基础上 ,构建了包含 tk和 g H基因片段的转移载体质粒 p TK2 .5 .以PRV糖蛋白 g G启动子 ( Pg G)为控制外源基因表达的启动子 ,以 E.coli lac Z为报道基因 ,用其替换 p TK2 .5质粒tk区的 Sal I与 Xho I之间的序列 ,构建了转移载体质粒 p TK- L ac Z.瞬时表达证实 ,转染细胞的 p TK - lac Z质粒在野生型 PRV感染的情况下 ,能有效表达β- Gal酶活性 .将 p TK- lac Z转染 BHK 2 1细胞后再以 PRV感染进行同源重组 ,在 143TK- 细胞上经 5 -溴脱氧尿苷选择 ,Vero细胞纯化 ,X- Gal染色 ,蓝斑筛选 ,分离到重组体 PRV ( r PRV) .r PRV与野生型 PRV在细胞上具有类似的生长特性 ,且经过连续传代的 r PRV仍能稳定的表达β-
- 潘兹书张楚瑜赵伟光郑从义丁建华
- 关键词：伪狂犬病毒胸苷激酶基因LACZ基因
- siRNA表达载体的构建及其表达被引量：4
- 2004年
- 本研究用限制性内切酶消化质粒pCMV-tag-2B,除去巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)启动子核苷酸序列,剩下的核苷酸序列作为构建表达siRNA(SmallinterferingRNA,siRNA)载体的前体。依据文献提供的扩增H1RNA启动子核苷酸序列的引物序列合成一对引物,以带有H1RNA启动子序列的质粒DNA为模板扩增H1RNA启动子序列,插入前体,构建SiRNA的表达载体pCH1。另外将H1RNA启动子插入pGEM-11fz相应位点,构建瞬时表达载体pGH1。依据EGFP的有效SiRNA抑制位点,合成两条分别为64bp的核苷酸链,通过体外退火,形成双链,然后插入已构建的两个表达载体。将这两个载体分别与表达EGFP蛋白的质粒pEGFP-N3共转染Bel-7402细胞,观察siRNA对EGFP的抑制效应。研究结果表明构建的载体有效表达了siRNA,这些载体可以用于与siRNA相关抗病毒治疗性试验研究。
- 张建林邬开朗张雪朱应李雁赵伟光吴建国
- 关键词：SIRNA病毒治疗
- 与HBVX蛋白相互作用的细胞蛋白的筛选及其鉴定被引量：3
- 2004年
- 参考GenBank核苷酸序列库中的HBV的核苷酸序列设计合成了一对对应于HBx基因的引物,从原发性肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)患者的血清中提取HBV基因组DNA作为模板,扩增HBx编码区并测定了核苷酸序列.将该编码区克隆到酵母双杂交系统的诱饵蛋白表达载体pGBKT7中,转入酵母细胞AH109,进行表型鉴定.然后通过Mating实验从已制备好用于酵母双杂交系统的肝cDNA表达文库中筛选与HBx相互作用的细胞蛋白,并用体外免疫共沉淀实验进一步验证.研究表明,分离得到的与HBx基因编码的蛋白相互作用的4种新的细胞蛋白,分别是醛缩酶B、C8α亚基、一种丝氨酸蛋白酶Hepsin和一种未知蛋白.
- 张建林吴建国朱应李雁赵伟光
- 关键词：HBX蛋白酵母双杂交系统
- HBx蛋白与Hepsin共表达可促进HBV复制被引量：2
- 2004年
- 运用RT-PCR技术从原发性肝癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)患者的癌旁组织中扩增了Hepsin基因编码区序列,该序列已被克隆并构建了pCMV-tag-HS表达质粒。将pCMV-tag-HS表达质粒和表达HBx蛋白的载体共转染HepG2.2.1.5细胞,观察HBx蛋白和Hepsin蛋白相互作用对HBV病毒复制和病毒蛋白表达的影响。研究结果表明共表达HBx蛋白、Hepsin蛋白可以协同提高HBV病毒颗粒在培养液中的拷贝数,并提高HBV病毒蛋白HBs、HBe的表达水平。这说明HBx蛋白和Hepsin蛋白相互作用可以增强HBV病毒的复制。
- 赵伟光张建林吴建国朱应李雁朱忠超刘志苏
- 关键词：RT-PCR技术HBX蛋白HBV
