谢飞
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- piggyBac转座系统在哺乳动物及其细胞中的研究进展被引量：4
- 2011年
- piggyBac(PB)转座系统来源于昆虫鳞翅目,属于真核生物的第二类转座系统,主要采取"剪切粘帖"机制发生转座。PB系统转座效率高,宿主范围广,广泛应用于昆虫等低等生物的基因转移及突变筛选。近年来,研究发现PB系统在哺乳动物及其细胞中也具有高效的转座活性,已在动物基因组功能研究、基因转移及诱导多能干细胞等领域得到了广泛应用。本文就PB系统近年来在哺乳动物及其细胞中的研究进展、应用前景及存在问题进行了综述。
- 谢飞蒋世忠马晴雯
- 关键词：PIGGYBAC转座哺乳动物转基因
- 转基因小鼠乳腺上皮细胞的体外培养及其对催乳素反应的研究被引量：4
- 2012年
- 实现转基因生物乳腺反应器对外源蛋白的高效表达是目前生物制药亟待解决的难题。催乳素对泌乳期乳蛋白的合成与分泌具有重要的调控功能。通过转基因小鼠乳腺上皮细胞模型的建立,研究催乳素如何调控乳蛋白的表达,为提高乳腺反应器高效表达外源蛋白提供技术及理论支撑。应用机械破碎及胶原酶消化法,经差速贴壁纯化,成功培养含人转铁蛋白基因的小鼠乳腺上皮细胞,细胞上清液中检测到人转铁蛋白表达。细胞经牛催乳素诱导后人转铁蛋白的表达水平明显升高。利用转基因小鼠乳腺上皮细胞模型,可以进行催乳素和环境因素等对乳腺上皮细胞合成及分泌蛋白能力影响的研究。
- 蒋世忠闫亚彬谢飞龚秀丽黄英吕宝忠
- 关键词：转基因小鼠乳腺上皮细胞催乳素转铁蛋白
- 我国精神卫生机构软实力评估指标体系构建研究被引量：1
- 2019年
- 目的:构建精神卫生机构软实力评估指标体系,提高精神卫生机构的可持续发展能力和竞争力。方法:以文献边界法确定精神卫生机构软实力的各项指标,分别邀请22名和30名精神卫生领域专家及管理者进行2轮次的专家咨询,以德尔菲法和层次分析法对三级指标体系的权重进行分析与确定。结果:2轮咨询专家参与的积极系数均为100%,专家权威程度分别为0.81、0.79,专家协调程度分别为0.754、0.792。克朗巴赫系数在精神卫生机构软实力指标体系的内部一致性评价信度高。最终构建包括3个一级指标、10个二级指标和39个三级指标的精神卫生机构软实力指标体系,其中文化维度是核心指标。结论:三层次指标体系构建严谨性较高,精神卫生机构要加强文化维度中的吸引力和凝聚力指标的建设,增强人才吸引和培育能力。相关指标要最终转化为可操作体系,形成精神卫生机构软实力评价量表。
- 周伟谢飞范尔佳
- 关键词：精神卫生机构软实力指标体系
- 可用于基因表达研究的转基因小鼠乳腺上皮细胞模型的构建被引量：1
- 2012年
- 目的建立转基因小鼠乳腺上皮细胞模型,为研究乳腺内环境因素调控外源基因的表达和制备高效表达外源基因的乳腺生物反应器提供研究平台。方法通过机械破碎和胶原酶消化的方法获取人转铁蛋白(hTF)转基因小鼠的乳腺上皮细胞,并进行体外原代培养。经胰蛋白酶纯化后,绘制乳腺上皮细胞生长曲线;免疫组织化学方法检测角蛋白18的表达;透射电子显微镜(透射电镜)观察乳腺上皮细胞超微结构;流式细胞仪检测细胞周期分布;显微镜下分析乳腺上皮细胞核型。将牛催乳素真核表达载体(pCMV-bPRL)转染至转基因乳腺上皮细胞中,检测外源bPRL的表达。结果乳腺上皮细胞生长曲线呈"S"形;免疫荧光组织化学分析结果显示hTF转基因小鼠乳腺上皮细胞角蛋白18呈阳性表达;透射电镜观察发现乳腺上皮细胞胞核较大、偏位,有双核或多核,胞质丰富,空泡、粗面内质网、高尔基体丰富;流式细胞仪检测结果显示:乳腺上皮细胞增殖活跃,G2/M期+S期细胞占15%;细胞核型分析结果显示处于分裂期的细胞具有正常的二倍体,染色体完整。pCMV-bPRL转染乳腺上皮细胞24 h后,上清液中检测到bPRL的表达。结论体外培养的转基因乳腺上皮细胞具有类似体内细胞的生物学特征,并可表达真核表达载体,为研究环境因素对乳腺功能的影响及制备乳腺生物反应器提供了一种细胞模型。
- 蒋世忠闫亚彬谢飞王娟黄英任兆瑞
- 关键词：转基因小鼠乳腺上皮细胞真核表达载体
- attB位点核心区定点突变对φC31整合酶效率的影响
- 2013年
- 目的考察attB位点核心区碱基突变对φC31整合酶存真核细胞中催化目的基网整合效率的影响。方法选取attB位点核心区中可能对中c31整合酶效率产生影响的碱基，设计含有相应位点突变的引物，采用大引物法两轮PCR扩增得到含突变碱基的attB片段，将其连人含报告基因的载体pEGFP。NI中得到pEGFP—NI—attB。以含野生型attB位点的报告基因载体pEGFP-N1-attB作为对照．将上述载体分别与中φC31整合酶表达质粒共转染HeLa细胞，经过药物筛选、染色、细胞克隆计数后，计算并比较整合效率。结果成功完成9个含有突变碱基attB位点及报告基因载体的构建。酶切及测序鉴定结果显示每个质粒含1或2个突变碱基。其中6个质粒为目标碱基突变，3个为PCR过程中随机产生的非预期突变。细胞实验结果表明，3个含有突变attB报告质粒的整合率与野生型attB相比无显著性差异，其余6个突变attB报告质粒的整合率与野生型attB相比显著降低（P〈0．05），尤其是其中两个attB位点中含有2个碱基突变的报告质粒，整合率降低极为显著（P〈0．001）。结论attB位点核心区碱基保守性较强，其中一些关键位点的突变使得整合酶效率降低。
- 李振海谢飞马晴雯
- 关键词：点突变
- 上海市精神专科医院收支两条线管理效果研究被引量：5
- 2016年
- 目的总结分析精神专科医院实行收支两条线管理的成效,为完善上海市精神专科医院实行收支两条线管理机制和政策提供参考。方法采用回顾性研究,对收集的上海市某区精神专科医院在实行收支两条线管理改革前(2009—2010年)与改革后(2011—2013年)以及与未实行收支两条线管理的上海市某两家精神专科医院2009—2013年度的有关调查资料进行比较分析。结果实行收支两条线管理的精神专科医院较好地落实了基本医疗和公共卫生服务,服务数量明显提升,服务效率得到不同程度的提高,收支结构更趋合理,患者满意度稳步上升,虽然职工满意度有所下降,但绝大多数职工支持实行收支两条线管理。结论建议政府进一步加大对精神卫生服务的投入力度,适时推广上海市精神专科医院实行收支两条线管理。
- 谢飞邬佳艳占归来
- 关键词：收支两条线管理精神卫生
