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VMP1在TNF死亡信号通路中作用的初步研究被引量：2: 2008年; 为了深入了解小鼠泡膜蛋白VMP1的生物学功能,我们采用免疫荧光染色、siRNA干扰技术、流式细胞术等方法对VMP1在TNF死亡信号通路中的作用进行研究.结果显示TNF的刺激可导致VMP1从L929细胞的细胞浆转移到细胞核,提示VMP1可能在TNF信号通路中起重要作用;用特异性的siRNA抑制L929细胞中VMP1的表达,细胞则表现出对TNF的明显抗性,证明VMP1参与了TNF诱导的细胞死亡信号通路.作者初步探索了VMP1与TNF死亡信号通路的关系,为进一步研究VMP1的生物学功能打下良好基础.; 吴晓玲谢琳娜叶志云李勤喜; 关键词：TNF 细胞死亡

VMP1基因的克隆及其抗体的制备与鉴定: 2006年; 为了得到效价高、特异性强、能用于检测内源性VMP1蛋白的抗体,采用RT-PCR法,从L929细胞株中克隆鼠VMP1基因,重组入pCMV5载体,用PCR扩增与其氨基酸132-239区域对应的DNA片断,将该片段连接到原核表达载体pGST parallel中,在大肠杆菌BL21菌株中大量表达,经谷胱甘肽-琼脂糖树脂纯化后,得到高纯度的VMP1抗原.免疫新西兰兔,获得抗VMP1蛋白的兔抗血清,将血清纯化后即得到抗VMP1的多克隆抗体.用W estern b lot分析手段检测了该抗体的特异性及效价.在用该抗体检测外源性和内源性VMP1蛋白的试验中,证实该抗体效价高,特异性强,效果很理想.此方法可用于获得大量廉价的抗VMP1蛋白的高滴度和高特异性的抗体,为进一步研究VMP1在细胞内,尤其是在信号转导通路中的功能和作用奠定了基础.; 谢琳娜李勤喜; 关键词：抗体制备纯化

抗RIP3抗体的制备及其亚细胞定位被引量：5: 2006年; 目的:制备兔抗受体相互作用蛋白3(RIP3)的抗体,并探讨其在鼠源NIH3T3细胞株中的定位。方法:用RTPCR技术从NIH3T3细胞株中克隆鼠rip3基因,进行原核表达及电洗脱纯化。以高纯度的RIP3抗原免疫新西兰兔制备抗血清并纯化。用Westernblot检测该抗体的特异性,以免疫荧光法确定RIP3在NIH3T3细胞株中的定位,以及TNFα和zVAD.fmk对其定位的影响。结果:获得特异性的兔抗RIP3蛋白的抗体。免疫荧光的结果显示,RIP3定位于细胞质中。单用TNFα或zVAD.fmk处理NIH3T3细胞后,RIP3的定位均无明显变化;而用zVAD.fmk和TNFα共同处理细胞后,在核内外均有RIP3分布。结论:成功地克隆rip3基因并制备高特异性的兔抗RIP3抗体。RIP3在NIH3T3细胞株中定位于细胞质中,为进一步研究RIP3在TNFα诱导的caspase非依赖的细胞凋亡途径中的作用奠定了基础。; 谢琳娜张娜陈明谅李勤喜周化民; 关键词：多克隆抗体亚细胞定位

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谢琳娜