许慧芳
- 作品数：10 被引量：21H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- VEGF在人胚胎干细胞向神经元分化中作用的研究被引量：5
- 2009年
- 目的观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在人胚胎干细胞分化为神经元过程中是否发挥作用及相关机制。方法人胚胎干细胞经拟胚体向神经元分化,分为3组:A组为常规诱导组,B组为常规诱导+VEGF(10ng/mL)作用组,C组为常规诱导+VEGF(10ng/mL)+VEGFR2/Fc嵌合体(10ng/mL)作用组;用RT-PCR、免疫荧光法检测各阶段细胞标志物,计算并用流式细胞仪检测各组不同阶段细胞阳性率。结果用RT-PCR分别检测到OCT4、Nestin、MAP2表达;免疫荧光法检测显示B组产生神经干细胞、分化为神经元的阳性率明显高于A、C两组,差异有统计学意义(P<0.01),A、C两组之间无显著性差异(P>0.05);流式细胞仪检测与免疫荧光法相似。结论人胚胎干细胞体外分化过程中血管内皮生长因子通过血管内皮生长因子受体2来促进神经干细胞增殖及向神经元分化。
- 焦淑洁许慧芳许杰张苏明湛彦强
- 关键词：人胚胎干细胞神经分化血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体2
- 两株人胚胎干细胞的无饲养层扩增被引量：1
- 2009年
- 目的:建立两株中国人胚胎干细胞(hESCs)的无饲养层的培养体系,观察条件培养基所需的饲养层密度,并探索最佳的传代方式。方法:两株人胚胎干细胞hES-846XX和hES-1846XY分别使用不同密度(3×105/mL、6×105/mL和1.2×106/mL)获得的条件培养基(CM)在无饲养层培养体系培养12代以上,用机械分离法和Ⅳ型胶原酶法进行传代,观察比较结果并对所得hESCs鉴定。结果:6×105/mL～1.2×106/mL之间的密度都是合适密度;Ⅳ型胶原酶在长期传代中优于机械法传代;所得细胞维持干细胞未分化状态和全能性。结论:无饲养层的培养体系可以用于中国胚胎干细胞培养,两株中国人胚胎干细胞(hESCs)的倍增周期、所需饲养层密度及分化率等方面与国外hESCs有明显差别。
- 许慧芳黎逢光陈红焦淑洁张苏明
- 关键词：人胚胎干细胞条件培养基
- 人胚胎干细胞在3种培养体系中的生长被引量：1
- 2009年
- 人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)的培养一直是干细胞研究的重要内容.用本实验室独立建系的两株hESCs,建立3种不同的培养体系:小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)做饲养层,永生化人成纤维细胞(immortalized human adult fibroblasts,HAFi)做饲养层,无饲养层条件培养基培养体系(condition medium,CM),观察在3种培养体系中,干细胞的增殖和分化情况.发现3种培养体系中的hESCs都可以表达一致的生物学特性,但也有不同之处,相对于CM干细胞在MEFs和HAFi饲养层体系的分化率低,增殖快;但MEFs来源于鼠类是异源细胞,HAFi虽不含鼠源性成分却繁殖很慢;无饲养层的体系便于操作,无外源细胞存在.实验所得出的结果可以引导研究人员针对于临床、科研不同的需要,选择最适合的培养体系.
- 许慧芳陈红焦淑洁黎逢光张苏明
- 关键词：人胚胎干细胞
- 人胚胎干细胞神经分化过程中VEGF作用机制的研究
- 2010年
- 目的观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对人胚胎干细胞分化为神经元的促进作用是否与Notch信号通路有关。方法人胚胎干细胞经拟胚体向神经元分化,并分为3组:A组为常规诱导组;B组为常规诱导+VEGF(10ng/ml)作用组;C组为常规诱导+γ-分泌酶抑制剂预处理+VEGF(10ng/ml)作用组。用免疫荧光法检测及计算各组不同阶段细胞阳性率,半定量RT-PCR观察各组神经干细胞Hes1 mRNA表达,MTT法检测3组神经干细胞增殖速率。结果免疫荧光法检测显示,B组产生神经干细胞的阳性率明显高于A、C两组,差异有统计学意义(P<0.01),A、C两组之间无显著性差异(P>0.05);B、C两组进一步分化为神经元的阳性率均明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01),B、C两组之间无显著性差异(P>0.05);半定量RT-PCR观察显示B组神经干细胞Hes1 mRNA表达明显高于A、C两组;MTT法检测与半定量RT-PCR结果相似。结论人胚胎干细胞体外分化过程中血管内皮生长因子通过激活Notch信号通路,促进神经干细胞增殖,而VEGF在神经干细胞向神经元分化中的作用与Notch通路无关。
- 焦淑洁许慧芳张苏明许杰湛延强
- 关键词：人胚胎干细胞神经干细胞神经分化NOTCH信号通路
- 阻塞性睡眠呼吸暂停综合征致急性记忆障碍1例报道及相关文献复习被引量：4
- 2006年
- 目的探讨阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)所致认知障碍的病因、诊断及治疗。方法分析1例由OSAS引起的急性记忆障碍患者的临床表现及其辅助检查结果与治疗经过,并复习相关文献。结果患者突然出现记忆障碍,无神经系统其他症状和体征,持续气道正压通气(CPAP)结合改善脑循环治疗有效。结论OSAS可引起全身各系统的多种疾病,神经元缺氧损伤及生化代谢紊乱是其引起认知障碍的主要病因,而由其导致的急性记忆障碍则需依据基础病史及相关辅助检查确诊。
- 黎逢光湛彦强郭守刚许慧芳张苏明
- 关键词：阻塞性睡眠呼吸暂停综合征磁共振波谱成像多导睡眠图
- 体外诱导人类胚胎干细胞定向分化为神经干细胞被引量：3
- 2007年
- 目的探索一种诱导人类胚胎干细胞(hESCs)向神经干细胞(NSCs)定向分化的简单高效的方法。方法将 hESCs 在细菌培养皿中以无血清培养基悬浮培养形成拟胚体,进一步将成熟拟胚体打散、贴壁培养于含有 B27和 noggin 等成分的特定培养基中,诱导其向神经干细胞定向分化。结果悬浮于细菌培养皿中的 hESCs 不贴壁,进行性长大,7～10 d 形成成熟拟胚体;拟胚体在特定培养基中可诱导成高纯度(约96.4%)的 nestin 阳性细胞(即 NSCs),进一步培养,这些细胞可分化成各种成熟的神经细胞。结论该方法诱导 hESCs 向 NSCs 定向分化较文献报道耗时更短、费用低廉且效率更高,为进行细胞移植治疗神经系统相关疾病提供了很好的种子细胞来源。
- 黎逢光许慧芳陈红柴竞艳邢变枝湛彦强李晓晴郭守刚张苏明
- 关键词：神经元干细胞细胞分化
- 人胚胎干细胞神经分化中VEGF作用的分子机制研究被引量：1
- 2011年
- 目的观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对人胚胎干细胞分化为神经元的促进作用是否与p38MAPK信号通路相关。方法人胚胎干细胞经拟胚体向神经元分化,分为3组:A组:常规诱导组;B组:常规诱导+VEGF(10ng/mL)作用组;C组:常规诱导+p38MAPK抑制剂预处理+VEGF(10ng/mL)作用组。免疫荧光法检测计算各组不同阶段细胞阳性率,半定量RT-PCR观察各组神经干细胞p38αmRNA表达,MTT法检测3组神经干细胞增殖速率。结果免疫荧光法检测,B、C 2组产生神经干细胞的阳性率明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01),B、C 2组比较差异无统计学意义(P>0.05);B组进一步分化为神经元的阳性率明显高于A、C组,差异有统计学意义(P<0.01),A、C 2组比较差异无统计学意义(P>0.05);半定量RT-PCR观察B组神经干细胞p38αmRNA表达明显高于A、C 2组;MTT法检测与半定量RT-PCR结果相似。结论人胚胎干细胞体外分化过程中,血管内皮生长因子促进神经干细胞分化的作用与p38MAPK通路无关,而VEGF通过激活p38MAPK信号通路,促进神经干细胞进一部分化为神经元。
- 焦淑洁许慧芳张苏明许杰湛延强
- 关键词：人胚胎干细胞神经分化血管内皮生长因子P38MAPK信号通路
- 口服尼膜同对血管性痴呆患者认知功能及血浆中TXB2和6-Keto-PGF1α含量的影响被引量：5
- 2007年
- 目的评价尼膜同治疗血管性痴呆的临床疗效,并对其作用机制进行相关探索。方法61例VD患者随机分成两组:治疗组31例,口服尼膜同片;对照组30例,口服脑复康片。应用修订简易精神状态量表(MMSE)和日常生活能力(ADL)量表(Barthel指数记分法)评价疗效,同时检测治疗前后患者血浆中TXB2和6-Keto-PGF1α含量的变化。结果与对照组比较治疗组可显著提高MMSE和ADL评分,差异有统计学意义(P<0.05);同时治疗组TXB2和6-Keto-PGF1α含量的变化较对照组亦有显著性差异。结论尼膜同治疗VD安全有效,其作用机制可能与调节血浆中TXB2/6-Keto-PGF1α系统的平衡有关。
- 黎逢光徐艳许慧芳张苏明
- 关键词：尼膜同血管性痴呆血栓素B26-酮-前列腺素F1Α
- 成纤维细胞生长因子支持人胚胎干细胞在无饲养层中的生长(英文)被引量：1
- 2010年
- 背景:人胚胎干细胞是一种全能型细胞,可以分化为3个胚层的组织,目前国内对其无饲养层生长的研究较少。成纤维细胞生长因子是维持胚胎干细胞不分化状态的重要因子。目的:探讨长期培养过程中不同质量浓度成纤维细胞生长因子对人胚胎干细胞未分化状态和全能性维持的影响。方法:两株人胚胎干细胞在鼠胚胎成纤维细胞条件培养基中培养3代,分别转移到含100,160,250μg/L成纤维细胞生长因子的鼠胚胎成纤维细胞条件培养基中培养8代。从培养皿中移出胚胎干细胞,用IV胶原酶消化聚集成团的细胞,观察细胞分化状态和全能性情况。收集传8代后的胚胎干细胞,种植于SCID小鼠体内。对所得细胞做形态学评估,并进行碱性磷酸酶染色、表面标记免疫组化检测、RT-PCR检测OCT-4的表达、体内致瘤情况。结果与结论:在含160,250μg/L成纤维细胞生长因子的鼠胚胎成纤维细胞条件培养基中,两株人胚胎干细胞可以保持原有性状,即细胞克隆呈圆形,核质比较高,中间大片区域为未分化细胞,周围为分化细胞;呈碱性磷酸酶强阳性表达;表达OCT-4转录因子蛋白;细胞表面标志SSEA-4,TRA-1-60,TRA-1-81均呈阳性表达;聚集成团的胚胎干细胞培养10d后形成拟胚体;种植于SCID小鼠体内可得含3个胚层组织的畸胎瘤。含100μg/L成纤维细胞生长因子的鼠胚胎成纤维细胞条件培养基不足以维持人胚胎干细胞的长期增殖,4代以后大部分细胞分化死亡。提示成纤维细胞生长因子质量浓度达160μg/L以上时,可以单独支持人胚胎干细胞的体外稳定增殖,且不影响细胞分化状态和全能性。
- 许慧芳张苏明
- 关键词：人胚胎干细胞成纤维细胞生长因子
- 人胚胎干细胞分化为神经干细胞诱导方法的对比研究
- 2009年
- 目的探讨人胚胎干细胞分化为神经干细胞过程中,经拟胚体(embryonic body,EB)法和直接分化法的不同效率。方法人胚胎干细胞常规培养消化后,分为两组:A组,经EB法分化;B组,添加noggin和ITSFn直接分化法。倒置相差显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR检测细胞各阶段标志物,免疫荧光及流式细胞仪观察两组细胞Nestin阳性细胞率。神经干细胞继续分化,免疫荧光、RT-PCR法检测MAP2、GFAP表达。结果RT-PCR检测到OCT4、nestin表达。B组nestin阳性细胞率明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01),且诱导周期短于A组。神经干细胞继续分化,得到不同数量的神经元和胶质细胞,MAP2、GFAP分别阳性。结论在体外采用定向分化诱导,人胚胎干细胞不经EB,可直接定向分化为神经干细胞,且诱导效率比EB法高。因此直接分化法是一种经济实用的诱导方法。
- 焦淑洁许慧芳杨华静许杰湛彦强张苏明
- 关键词：人胚胎干细胞细胞分化神经干细胞
