袁小澎
- 作品数：35 被引量：110H指数：6
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种鼠免疫状态监测试剂及其制备方法
- 本发明提供了一种鼠免疫状态监测试剂，该试剂是经CFSE染色的两种近交系的鼠脾细胞的PBS悬液，其中两种鼠脾细胞的总浓度为0.5～1×10<Sup>8</Sup>个/ml，二者的比例为1∶1，荧光染色浓度差为1∶20。将本...
- 孙尔维蒋泽生高毅潘明新王海澜袁小澎马聪
- 文献传递
- 同种异基因大鼠间充质干细胞移植对体内CD4^+CD25^+T细胞的影响被引量：10
- 2009年
- 背景:间充质干细胞的免疫抑制作用近年来逐渐得到证实并开始应用于临床,但相关研究成果主要来源于体外细胞实验。目的:观察同种异基因大鼠骨髓间充质干细胞从静脉输入后对体内CD4+CD25+调节性T细胞的影响。设计、时间及地点:以动物为对象的对照观察实验,于2008-03/09在南方医科大学珠江医院移植免疫研究所完成。材料:Wistar大鼠6只用于制备骨髓间充质干细胞,SD大鼠20只作为输注骨髓间充质干细胞的受体鼠。方法:从Wistar大鼠骨髓分离培养间充质干细胞,取第3~5代细胞进行实验。①体外淋巴细胞增殖实验:首先将间充质干细胞悬液从尾静脉注入SD大鼠体内10d后脱臼处死,取大鼠脾脏制备脾淋巴细胞。实验分5组:分别为脾淋巴细胞/骨髓间充质干细胞为1∶10,1∶50,1∶100+ConA5μg组,脾淋巴细胞+ConA5μg组(增殖组),单纯淋巴细胞组(空白组),检测共培养体系中CD4+CD25+/CD4+T淋巴细胞比率。②体内注射骨髓间充质干细胞实验:将5×109L-1,5×108L-1,5×107L-1间充质干细胞及PBS静脉输入SD大鼠体内,10d后取受体鼠胸腺、脾脏、外周血检测CD4+CD25+/CD4+T淋巴细胞比率。主要观察指标:①淋巴细胞增殖体系中CD4+CD25+/CD4+比率的变化。②SD大鼠胸腺、脾脏、外周血CD4+CD25+/CD4+比率的变化。结果:①体外淋巴细胞共培养体系中,1∶10组T细胞亚群CD4+CD25+/CD4+细胞百分率较增殖组显著升高(P<0.01)。②体内输注间充质干细胞达5×109L-1的受体鼠外周血和脾脏CD4+CD25+/CD4+T细胞比率上升,与输注PBS组相比有显著差异(P<0.05),而在胸腺中各组比率无明显差异。结论:高浓度同种异基因大鼠间充质干细胞不仅可以在体外实验中增加CD4+CD25+/CD4+T细胞比率,静脉输入后仍具有相同作用。
- 余劲明蔡德鸿张桦袁小澎陈宏
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- CFSE标记的淋巴细胞增殖实验检测方法的建立被引量：2
- 2008年
- 目的建立基于流式细胞术和活细胞荧光染料CFSE的淋巴细胞增殖、单向混合淋巴细胞实验的免疫学检测方法。方法分离单个核细胞,将反应细胞经CFSE染色后,分别加入不同的淋巴细胞增殖刺激物或与灭活的异基因淋巴细胞共培养。培养后细胞经流式细胞术检测标记细胞是否增殖,应用CD4-PE抗体检测增殖细胞中CD4阳性T细胞亚群比例,ModFit软件分析增殖动力模型。计算增殖CDI或PI指数。结果基于CFSE建立的淋巴细胞增殖实验,经不同刺激物或异基因抗原刺激后增殖指数明显升高,使用CD4-PE抗体进行再次标记后可以对增殖实验中CD4阳性淋巴细胞亚群的增殖进行评估。结论成功建立了基于CFSE标记淋巴细胞的增殖实验检测方法,该方法简单、实用、灵敏度高,可以取代3H或MTT用于不同条件、不同免疫刺激情况下淋巴细胞增值的检测或评估。
- 孙尔维袁小澎罗宇维陈忠华
- 关键词：增殖流式细胞术
- 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位功能片段构建及免疫原性研究被引量：2
- 2007年
- 目的构建表达免疫活性的尿素酶功能片段原核表达体系。方法根据尿素酶B基因序列以及文献报道的尿素酶活性中心区域,primer5.0设计相应的引物,以Hp基因组为模版,PCR扩增拟表达的尿素酶活性片段,经测序证实后将片段亚克隆于原核表达载体pET28中,转入宿主菌BL21后IPTG诱导表达后,Tris-Tricine PAGE电泳及抗Hp特异性抗体western-tbollting鉴定目的蛋白表达。结果PCR从Hp基因组中扩增出414bp目的片段,经酶切及测序证实构建了功能片段表达阳性重组子,命名为pU414,IPTG诱导后电泳分析可以发现相应分子量附近出现可疑目的蛋白,能够被特异性血清识别。结论成功建立尿素酶活性功能片段蛋白表达载体,为下一步实验研究奠定基础。
- 袁小澎邹全明吴超张卫军郭鹰
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶免疫原性
- 大鼠间充质干细胞对BALB/c小鼠体外淋巴细胞的影响被引量：4
- 2009年
- 目的研究大鼠间充质干细胞(MSCs)对BALB/c小鼠淋巴细胞增殖和CD4+CD25+调节性T细胞亚群的变化。方法分离、扩增SD大鼠MSCs,流式细胞术检测表面标志以鉴定。取第5代MSCs与分离的小鼠淋巴细胞在刀豆蛋白(ConA)刺激下共培养5d,流式细胞仪测定细胞增殖,CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例的变化。结果当淋巴细胞:MSCs在1∶10及1∶50时均可抑制ConA刺激下可抑制小鼠淋巴细胞增殖,淋巴细胞:MSCs在1∶10时CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例明显升高。
- 余劲明蔡德鸿张桦袁小澎陈宏
- 关键词：骨髓间质干细胞免疫抑制淋巴细胞CD4+CD25+调节性T细胞
- 幽门螺杆菌UreB与大肠杆菌LTB融合蛋白的表达及生物活性研究被引量：3
- 2003年
- 目的 通过基因工程方法构建并表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)以基因形式的融合蛋白,并对其生物活性进行初步研究,为幽门螺杆菌疫苗的研究奠定基础。方法 用PCR方法从本室构建的融合基因克隆载体扩增出融合基因2 040bp的片段,将融合基因插入原核表达载体pET-11-c中。结果 经全自动测序仪测序,SDS-PAGE和免疫印迹以及N端氨基酸测序分析,证实融合蛋白已在BL21中表达,初步纯化后通过动物实验和酶联免疫吸附试验证实其相应的免疫原性和免疫反应性,以及其中LTB成分和GM1结合的特性。结论 融合蛋白表达方式为幽门螺杆菌分子内佐剂疫苗的研究奠定了基础。
- 袁小澎邹全明吴超鲁东水郭红王宁
- 关键词：幽门螺杆菌生物活性尿素酶不耐热肠毒素基因融合
- 流式细胞术快速检测产超广谱β-内酰胺酶细菌的研究被引量：8
- 2011年
- 目的建立一种基于流式细胞术快速检测细菌是否具有产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的方法。方法对36株临床分离已经确定为产ESBL的菌株,应用流式细胞药敏试验(FCST),分别检测每株细菌头孢他啶、头孢他啶/棒酸作用管的碘化丙啶荧光阳性百分率(PI%),依据统计学方法建立FCM检测产超广谱β-内酰胺酶细菌阴阳性的判断标准。对49株临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌同时应用NCCLS推荐的确证试验以及建立的流式细胞术检测标准进行双盲测定,采用统计学评价新的检测方法。结果 36株临床已经鉴定为产ESBL菌经两种药物作用后,PI%(CAZ+C)-PI%(CAZ)值各有不同。经统计学分析确定阳性株鉴定标准为PI%(CAZ+C)-PI%(CAZ)≥3.0。建立检测标准后49株临床菌株经双盲测定后对两种方法学进行统计学比较分析,证实两种方法相比灵敏度为78.3%,特异度为80.8%,粗一致性为79.6%,两种方法的检测结果差异无统计学意义。结论流式细胞术检测产超广谱β-内酰胺酶细菌的方法与传统方法检测结果具有一致性,但是更为快速、客观、便于自动化,在联合药敏试验方面有较大的临床应用前景,为流式细胞仪应用到细菌药敏试验奠定基础。
- 付亮龙军袁小澎
- 关键词：流式细胞术超广谱Β-内酰胺酶
- BALB/c小鼠口服重组幽门螺杆菌热休克蛋白A疫苗的免疫应答被引量：6
- 2004年
- 目的 评价重组热休克蛋白A (rHspA)作为幽门螺杆菌 (Hp)口服疫苗成分的效果。方法 采用重组Hp保护性抗原HspA与粘膜免疫佐剂 (霍乱毒素 ,CT ;大肠不耐热肠毒素B亚单位 ,LTB)共口服免疫BALB c小鼠 ,ELISA分析小鼠血清、胃肠粘液中IgG、IgA抗体水平 ,体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况以及IL4、IFN γ的变化。结果 单纯口服rHspA组产生的抗体水平与对照组 (PBS)相差不显著 ,而rHspA +佐剂组与对照组相差非常显著。rHspA +佐剂组小鼠脾淋巴细胞体外培养 ,在Hp抗原刺激作用下出现明显的增殖反应 ;不加佐剂免疫组分泌IFN γ水平增加 ,IL 4水平未发现增加 ;而加佐剂免疫组除IFN γ水平增加外 ,IL 4水平也发现显著增加。结论 BALB
- 郭鹰邹全明朱永红吴超郭刚毛旭虎袁小澎
- 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白A口服疫苗免疫应答
- 改良法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究被引量：3
- 2008年
- 目的:改良大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)原代分离方法,探讨大鼠MSCs体外培养的适宜条件。方法:比较改良与传统单纯贴壁培养法、密度梯度离心法结合贴壁分离法分离培养大鼠MSCs,观察不同方法获得原代细胞形态及不同代MSCs的生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面标记,同时观察不同浓度的胎牛血清(FBS)对MSCs生长曲线的影响。结果:改良单纯贴壁培养法获得的原代细胞贴壁时间早、生长快,与其他两种分离方法差异明显(P<0.01);原代MSCs用15%的FBS培养,其增殖明显高于5%、10%及20%的FBS培养;第3代以后MSCs用5%的FBS培养有力于细胞纯化。结论:成功地改良了分离培养大鼠MSCs的方法,配合不同血清浓度培养基可使收获MSCs效率增高。
- 余劲明蔡德鸿张桦袁小澎李明陈宏
- 关键词：骨髓间质干细胞细胞培养
- CD248在纤维化疾病中的研究进展
- 2019年
- CD248在健康成年人组织中表达基本消失,但在慢性纤维化疾病的基质细胞中却大量表达,且表达水平与疾病的严重程度具有相关性。CD248调节纤维化的机制仍然不清楚。敲除CD248基因序列后,组织的病理性纤维化程度明显降低。同时CD248基因的敲除能使血小板源性生长因子(PDGF)通路介导的慢性纤维化进程受到抑制,可见,CD248通过调节PDGF受体通路等跨膜转运信号通路来影响纤维化过程。
- 钱诗蕾刘婉婷袁小澎
- 关键词：纤维化疾病组织纤维化肌成纤维细胞周细胞
