衣菲
- 作品数：9 被引量：11H指数：2
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因新型原核温控表达载体的构建
- 单核细胞增生李斯特茵的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能.为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与EGFP或DsRed基因分别插入到pET...
- 田秋丰于申业衣菲吕雪莲倪宏波刘思国
- 关键词：调控基因荧光蛋白
- 文献传递
- 禽源奇异变形杆菌的分离鉴定及耐药性分析被引量：3
- 2015年
- 为了鉴定哈尔滨地区某养殖场发生的一起细菌感染的致病菌,试验对送检病料进行病原菌的分离培养和形态学观察,并应用微生物自动分析系统和PCR方法鉴定菌株,再对分离菌进行生化试验和药敏试验。结果表明:该病原菌为奇异变形杆菌(Proteus mirabilis),对恩诺沙星、丁胺卡那霉素和β-内酰胺类药物高度敏感。
- 衣菲于申业田秋丰倪宏波刘思国
- 关键词：细菌感染奇异变形杆菌生化鉴定药敏试验耐药性分析
- 大肠杆菌肽聚糖合成酶MraY在杆状病毒系统中的表达被引量：1
- 2013年
- 磷酸-N-乙酰胞壁酸酯-胸腺喷丁转位酶(MraY)是参与大肠杆菌细胞壁合成的一种膜蛋白。由于该蛋白不能通过大肠杆菌表达系统进行过表达制备重组蛋白,本研究采用杆状病毒表达系统,通过PCR从大肠杆菌基因组中扩增出目的基因MraY,纯化后克隆于pFastBac 1质粒中构建重组转移质粒pFastBac-MraY。将其转化DH10感受态,构建重组杆粒Bacmid-MraY,并转染于Sf9昆虫细胞中进行重组杆状病毒制备和目的蛋白表达,采用western blot和间接免疫荧光鉴定结果表明,目的蛋白在昆中细胞Sf9中获得表达,分子量为41 ku并以可溶性形式表达。该蛋白的表达为MraY的高级结构的解析以及噬菌体溶菌机制的研究奠定了基础。
- 许莉莉于申业田秋丰衣菲刘思国
- 关键词：杆状病毒表达系统间接免疫荧光
- 大肠杆菌肽基脯氨酰顺反异构酶slyD基因缺失株的构建及生物学特性研究被引量：2
- 2016年
- 肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIases)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是专一性催化已磷酸化的丝/苏-脯氨酞顺/反异构。为研究大肠杆菌PPIases sly D基因缺失对其生物学特性的影响,本研究利用改进的Red重组方法构建大肠杆菌BL21株的sly D缺失株,命名为BL21Δsly D;并通过突变株的形态学变化、生长特性、生化代谢特性、耐酸性、耐渗透压能力、耐温度缺氧能力对其进行鉴定。结果表明,缺失株生长速率、耐高温缺氧能力与亲本株相比差异不显著,然而突变株的耐酸性与耐渗透压能力则显著低于亲本株(p<0.01),表明大肠杆菌PPIases sly D基因可能影响双组份调控系统的调节作用。本研究构建的大肠杆菌sly D基因缺失株BL21Δsly D为进一步研究大肠杆菌sly D基因的功能奠定了基础。
- 周薇刘松艳王曼宇衣菲田秋丰陈志宝刘思国于申业
- 关键词：大肠杆菌生物学特性环境压力
- 大肠杆菌转位酶MraY单克隆抗体的制备与特性研究
- MraY是催化UDP-N-acetylmuramic acid-pentapeptide（磷酸-N-乙酰胞壁酸酯-胸腺喷丁）和脂质载体十一异戊烯磷酸合成细胞壁前体脂质I的一种膜嵌入式酶。MraY有望成为开发抑制肽聚糖合成...
- 衣菲
- 关键词：单克隆抗体抑菌
- 文献传递
- 基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因新型原核温控表达载体的构建被引量：1
- 2014年
- 单核细胞增生李斯特菌的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能。为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与绿色荧光蛋白(GFP)或红色荧光蛋白(DsRed)基因分别插入到pET-28a和pUC19载体中,构建重组质粒pET-prfA-EGFP和pUC-prfA-DsRed。将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,在37℃条件下培养,利用激光共聚焦显微镜观测细菌中荧光蛋白的表达情况。结果表明,构建的两种重组质粒的荧光蛋白基因于37℃条件下,在受体菌中均获得有效表达,而30℃时则仅有微弱的本底荧光蛋白表达。本研究构建了以最适生理温度为单一诱导条件的温控表达的新型原核细胞表达载体,为蛋白的表达与功能研究提供了新的平台。
- 田秋丰于申业衣菲倪宏波吕雪莲刘思国
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌荧光蛋白
- 通过改进Red重组方法快速构建肠炎沙门菌毒力岛SPI-1缺失株被引量：4
- 2014年
- 沙门菌依赖毒力岛SPI-1编码的Ⅲ型分泌系统在侵染宿主肠道上皮细胞中起重要作用。为制备沙门菌毒力岛SPI-1缺失株,本研究利用PCR扩增毒力岛SPI-1上下游同源臂和含有氯霉素抗性基因片段,连接p ET-28a构建打靶质粒,采用电击法将其转入含有p KD46a质粒的肠炎沙门菌中。经L-阿拉伯糖诱导同源重组后,鉴定阳性重组子,转化诱导产生重组酶FLp的p CP20质粒,从而删除氯霉素抗性基因,通过PCR方法鉴定缺失株,命名为SM6ΔSPI-1。连续培养鉴定表明缺失株具有良好的遗传稳定性。生长特性研究显示缺失株生长速率高于野生菌株。本研究利用改进的Red重组系统通过一步法构建了肠炎沙门菌毒力岛SPI-1缺失株,为沙门菌毒力岛的功能研究与基因工程减毒疫苗研制奠定了基础。
- 吕雪莲于申业倪宏波衣菲田秋丰刘思国
- 关键词：RED同源重组
- 奶牛边缘无浆体MSP2的原核表达及抗原性鉴定
- 2012年
- 为克隆和原核表达牛边缘无浆体(A.marginale)膜表面蛋白2(MSP2),并分析其免疫原性,本研究通过PCR方法扩增A.marginale的MSP2基因,将其连接到pGEX 6p-1载体中,转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析,将纯化的MSP2重组蛋白免疫小鼠。结果表明表达并纯化了A.marginaleMSP2,其免疫原性良好,为制备单克隆抗体及亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 邵光喜马国林衣菲郎秀艳蒋慧婷王春仁刘娇田秋丰倪宏波钱爱东
- 关键词：边缘无浆体原核表达免疫原性
- 奶牛边缘无浆体MSP2基因的原核表达及抗原性鉴定
- 克隆并原核表达牛边缘无浆体(Anaplasma marginale，A_marginale)膜表面蛋白2(Membrane surfaceDrotein 2，MSP2)，并分析其免疫原性。通过PCR方法扩增A．margi...
- 邵光喜衣菲郎秀艳蒋慧婷王春仁刘娇田秋丰倪宏波
- 关键词：边缘无浆体原核表达免疫原性
- 文献传递
