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耐多药结核病的分子机制研究及其快速诊断技术的研制: 翁心华胡忠义王洪海张文宏姜昕陈一平崔振玲莫凌王洁靳安佳王莹金嘉琳谢建平孟成艳; 该课题对我国结核耐药的分子流行病学研究以及多重耐药结核基因谱分析为建立快速检测结核杆菌异烟肼耐药性的分子生物学方法奠定了基础。应用蛋白质结构分析方法对耐药基因突变引起耐药的机制进行了分子水平的探讨；首次对不同位点突变的k...; 关键词：; 关键词：耐多药结核分子机制

点突变对结核分支杆菌KatG蛋白活性和结构的影响: 2004年; 目的探讨点突变对结核分支杆菌KatG蛋白过氧化氢-过氧化物酶活性和蛋白结构的影响,深入研究INH耐药的发生机制。方法采用三步法PCR对KatG基因的4个位点进行定点诱变,在大肠埃希菌BL21体系中表达和纯化相应诱变蛋白,并测定其过氧化氢酶、过氧化物酶活性、二硫键的形成及荧光光谱变化,最后利用酵母细胞色素C氧化酶模型进一步探讨点突变对KatG蛋白过氧化氢-过氧化物酶活性和结构的影响。结果完成KatG基因4个位点的诱变及相应诱变蛋白的表达和纯化。过氧化氢酶、过氧化物酶活性测定发现3个诱变蛋白[KatG(W321G)、KatG(R418Q)和KatG(A456S)]活性基本丧失,诱变蛋白KatG(S315T)活性也有明显下降。荧光光谱显示KatG(R418Q)和KatG(A456S)的荧光强度较野生型明显降低。4个点突变均不影响KatG蛋白间二硫键的形成。结论所引入的4个突变可能对KatG蛋白的结构造成影响,从而导致KatG蛋白的功能即过氧化氢-过氧化物酶活性下降。; 莫凌翁心华陈澍邵凌云张文宏; 关键词：点突变结核分支杆菌 KATG 蛋白结构基因突变

一种快速检测结核分支杆菌多重耐药性的试剂盒: 本发明属生物医学检验领域，涉及微生物分子生物学检测方法，具体涉及一种快速检测结核分支杆菌多重耐药性的试剂盒，包括同时扩增4种结核耐药相关基因的多重PCR体系和同时检测所述耐药相关基因中相应点突变的探针杂交体系，本试剂盒可...; 张文宏翁心华王莹莫凌金嘉琳张舒陈澍孟成艳; 文献传递

酶联免疫斑点法检测肺结核患者特异性结核抗原多肽T细胞的应答被引量：5: 2008年; 目的评价我国酶联免疫斑点法（ELISPOT）用于诊断肺结核患者的应用价值。方法结核特异性ELISPOT法检测76例诊断明确的肺结核患者外周血单核细胞。同时选择30例无结核接触史、胸部X线片无异常且PPD皮试阴性的成年人作为对照。数据采用卡方检验和非参数Mann—Whitney检验。结果76例患者总体阳性率为71．0％，健康对照组阳性率为6．7％。按照患者抗结核疗程分为治疗1个月内、治疗6个月内、治疗6个月以上3组，阳性率分别为87．5％、74．1％和52．0％（x^2=35．63，P=0．000）。该技术在初冶结核患者中的灵敏度为87．5％，特异度为93．3％，阳性预测值为91．3％，阴性预测值为90．3％。结论结核特异性ELISPOT技术在我国初治（抗结核化疗疗程1个月内）的结核病患者中具有较高诊断价值。; 饶英莫凌钟敏孟成艳张西燕虞胜镭陈刚王莹王菲菲陈嘉臻朱静张文宏; 关键词：酶联免疫斑点法 T淋巴细胞

7例不典型肺真菌病的临床分析: 2006年; 目的肺部真菌感染往往症状不典型,肺部影像学表现多样,缺乏特异性,为早期诊断和治疗带来困难。尤其足近年来无免疫缺陷人群中也出现肺部真菌感染．使临床判断更加复杂。方法对我院于2006年上半年收治的7例无免疫缺陷的肺部真菌感染病例,从发病特点、临床表现、影像学、病原学、诊断依据以及治疗策略等方面对其进行了详细分析。结果7例肺真菌病患者均无明显免疫缺陷,肺部影像学表现多样。通过血清学、肺活检、痰培养等方法确诊,对治疗反应均较好。结论肺真菌病的临床表现趋向复杂多样,临床医生应予以高度重视。; 孟成艳莫凌张舒王金蕾张文宏; 关键词：肺真菌病病例分析

点突变对结核分支杆菌KatG蛋白活性和结构的影响: 异烟肼(INH)作为一种高效特异的抗结核药物,在现代抗结核治疗中占有重要的地位.本研究根据国内外文献选择临床INH耐药株中检测到的4个点突变,采用三步法PCR将其引入KatG基因,表达和纯化了相应的诱变蛋白,测定纯化产物...; 莫凌翁心华陈澍邵凌云张文宏; 关键词：点突变结核分支杆菌蛋白活性蛋白结构抗结核药; 文献传递

KatG基因点突变与结核分枝杆菌异烟肼耐药相关性研究被引量：4: 2004年; 目的　探讨过氧化氢酶编码基因 (KatG)基因点突变和结核分枝杆菌异烟肼 (INH)耐药性之间的关系 ,筛选相关位点用于筛查临床INH耐药株基因型。方法　采用三步法聚合酶链反应(PCR)对临床耐异烟肼菌株中发现的 6个位点进行定点诱变 ,用含诱变基因的 pET2 4b质粒转化大肠埃希菌BL2 1菌株 ,在异丙基硫代 β D半乳糖苷 (IPTG)诱导下表达 ,使用镍亲和柱和Q 琼脂糖快速流动凝胶纯化各KatG诱变蛋白并测定其过氧化氢酶和过氧化物酶活性。结果　完成KatG基因 6个位点的诱变及相应诱变蛋白的表达和纯化 ,过氧化氢酶、过氧化物酶活性测定发现 ,3个诱变蛋白[KatG(W32 1G)、KatG(R4 18Q)和KatG(A4 5 6S) ]基本失活 ,其余 3个诱变蛋白的活性亦有不同程度下降。结论　所引入的 6个突变均可造成KatG蛋白过氧化氢过氧化物酶活性下降 ,与结核分枝杆菌INH耐药有关。; 莫凌张文宏王骥庞茂银翁心华; 关键词：KATG基因点突变结核分枝杆菌异烟肼

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莫凌