胡亮杉
- 作品数：56 被引量：131H指数：7
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- 白藜芦醇对白血病细胞系KG-1a细胞被免疫细胞杀伤敏感性的影响
- 2014年
- 目的 探讨白藜芦醇对白血病细胞系KG-1a细胞被活化免疫细胞杀伤敏感性的影响及其作用机制.方法 用锥虫蓝染色法检测白藜芦醇对KG-1a细胞增殖的半数抑制浓度（IC50值）.分离健康人外周血单个核细胞,用IL-2和IL-15刺激活化免疫细胞.用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测白藜芦醇作用前后KG-1a细胞对免疫活性细胞杀伤的敏感性.流式细胞术检测活化免疫细胞表面肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的表达及白藜芦醇作用前后KG-1a细胞表面TRAIL受体（DR4/5和DcR1/2）的表达.结果 白藜芦醇能抑制KG-1a细胞增殖,作用24 h IC50值约为25 μmol/L.在效靶比为10∶1和20∶1时,白藜芦醇作用后活化免疫细胞对KG-1a细胞的杀伤率分别为（55.80±10.88）％和（72.31±13.06）％,高于对照组的（24.96±9.25）％和（37.93±5.21）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.白藜芦醇作用后的KG-1a细胞,DR5的表达为（9.05±3.57）％,高于作用前的（3.110.54）％,差异有统计学意义（P＜0.05）;DcR1的表达为（13.23±3.56）％,低于作用前的（53.75±10.51）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.阻断TRAIL后,在效靶比为10∶1和20∶1时,白藜芦醇作用后活化免疫细胞对KG-1a细胞的杀伤率分别为（35.97±6.36）％和（49.80±10.68）％,低于对照组的（52.92±6.98）％和（70.73±9.79）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 白藜芦醇可增强KG-1a细胞被活化免疫细胞杀伤的敏感性,其途径可能是通过调节TRAIL通路实现的.
- 胡亮杉杨华文李丽华张知洪方晓琳曹东林
- 关键词：白藜芦醇杀伤TNF相关凋亡诱导配体
- 三氧化二砷提高多发性骨髓瘤ARH-77细胞对NK细胞杀伤敏感性的研究被引量：4
- 2009年
- 目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)前后人多发性骨髓瘤ARH-77对NK细胞杀伤细胞敏感性的变化,并初步探讨其机制。方法分别应用CCK-8法和台盼蓝染色法测算ATO对ARH-77细胞株的50%抑制量(IC50)和细胞活性;乳酸脱氢酶释放法检测ATO作用前后ARH-77细胞对NK细胞的杀伤敏感性。流式细胞仪检测ARH-77细胞表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子表达以及ATO作用前后的细胞周期变化。结果ATO对ARH-77细胞的IC50为5.0μmol/L。NK细胞杀伤ATO作用前后ARH-77细胞的活性有显著差异(P<0.05)。ATO作用后,ARH-77细胞发生G1/S期阻滞,同时其表面MICA/B、ULBP1、ULBP3表达显著升高,二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。ULBP2和HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P>0.05)。结论ATO能提高ARH-77细胞NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP3)表达;从而使其对NK细胞的杀伤敏感性增强。
- 孙明胡亮杉周健涂三芳卢晓珣牛新青郭坤元
- 关键词：三氧化二砷多发性骨髓瘤NK细胞NKG2D配体
- 基因扫描分析小鼠T细胞受体CDR3谱型检测T细胞克隆技术的建立
- 2008年
- 目的建立小鼠T细胞受体(TCR)互补决定区3(CDR3)谱型的基因扫描分析术,为分析T细胞克隆提供研究方法。方法应用RT-PCR方法分别扩增近交系小鼠C57BL/6H-2b,Balb/CH-2d和F1代小鼠(Balb/c×C57BL/6F1H-2d/b,CB6F1)脾脏T细胞的21个TCRVα家族和18个TCRVβ家族的CDR3,并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性。结果3种小鼠脾脏T细胞均表达所有的TCRVα和VβCDR3基因,基因扫描显示全部TCRCDR3谱型呈高斯(钟型)分布,提示均为多克隆T细胞。各家族CDR3基因表达频率接近,但呈现不同的多态性和长度分布。结论基因扫描分析TCRαβCDR3基因谱型是检测小鼠T细胞克隆性的精确敏感方法。
- 周健黄迎吴远彬胡亮杉涂三芳王杨孙明郭爱林郭坤元
- 关键词：小鼠T细胞受体互补决定区3基因扫描T细胞克隆
- 去甲斑蝥素联合IL-12、IL-15处理增强PBMC对Raja细胞的杀伤效应被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨细胞因子IL-2、IL-15激活的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)对去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)处理后的人Burkitt淋巴瘤Raji细胞的杀伤效应及其可能机制。方法:锥虫蓝拒染法检测NCTD对Raji细胞和PBMC细胞增殖的影响;LDH释放法检测IL-2、IL-15激活后的PBMC对K562细胞和Raji细胞的杀伤;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测IL-2、IL-15诱导后PBMC表面NKG2D的表达,以及NCTD作用前后Raji细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达。结果:NCTD抑制Raji细胞的增殖,具有剂量、时间依赖性(P<0.05),但对PBMC增殖无影响(P>0.05)。在效靶比为10∶1、20∶1时,IL-2、IL-15激活的PBMC对K562细胞的杀伤率较未激活的PBMC明显增高[(52.42±3.89)%vs(15.82±5.12)%,(79.55±9.22)%vs(27.67±3.66)%,P<0.05];PBMC对NCTD处理后Raji细胞杀伤率较未经NCTD处理的Raji细胞明显增高[(23.63±6.20)%vs(5.04±1.25)%,(41.80±4.09)%vs(8.59±2.19)%;P<0.05],且IL-2、IL-15激活的PBMC对NCTD处理后Raji细胞的杀伤率较NCTD处理前明显提高[(38.97±2.76)%vs(13.19±3.67)%,(63.09±7.30)%vs(19.89±4.15)%;P<0.05]。激活后PBMC表面NKG2D表达率升高[(44.91±5.85)%vs(25.28±7.69)%,P<0.05]。NCTD作用后Raji细胞表面NKG2D的配体ULBP2表达显著升高[(12.69±3.99)%vs(1.03±0.42)%,P<0.05],而其他配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP3的表达无明显变化(P>0.05)。结论:NCTD联合细胞因子IL-2、IL-15处理能增强PBMC对Raji细胞的杀伤效应,其机制与NCTD上调Raji细胞表面ULBP2表达和细胞因子上调PBMC表面NKG2D表达有关。
- 余莉华曾雅丽胡亮杉贺艳杰黄宇贤宋朝阳郭坤元
- 关键词：去甲斑蝥素IL-15RAJI细胞NKG2D配体
- P3实验室检测新冠病毒核酸流程管理及体会被引量：2
- 2020年
- 新型冠状病毒(COVID-19)的核酸检测是目前确诊新冠病毒感染的重要依据。由于该病毒主要经呼吸道途径传播,对其检测要求高于普通的核酸检测,既要满足核酸扩增的条件,又要达到生物安全的标准。文章介绍了2020年1月底到2月底,COVID-19爆发流行期间,在P3生物安全实验室条件下进行COVID-19核酸检测的管理经验,经过设定目标,预设方案,在执行过程中不断纠偏等方式,最终取得高效、有序、安全的满意效果。另外,笔者对P3实验室检测过程中可能存在的安全隐患进行了分析,并对P3实验室未来发展提出了有益的建议。
- 闫修魁黄启当胡亮杉戴颖仪田军章林剑国
- 关键词：呼吸道传播核酸检测
- 骨髓间充质干细胞对大鼠肾脏衰老的影响
- ＜正＞目的:研究骨髓间充质干细胞（MSCs）延缓肾脏衰老的机制。方法:皮下注射D-半乳糖建立肾脏衰老模型,大鼠尾静脉注射3×106个MSCs进行生物治疗;应用终浓度为20umol/L荧光染料CFSE标记的MSCs回输大鼠...
- 李艳菊胡亮杉郭坤元
- 文献传递
- P13K/mTOR信号通路参与调控KG1a细胞NKG2D配体的表达
- 2021年
- 目的:自然杀伤细胞活化性受体(NKG2D)配体的低表达是白血病干细胞(LSC)逃避免疫杀伤的关键因素,磷脂酰肌醇3-激酶/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/mTOR)信号通路在LSC中高度活化,探讨PI3K/mTOR信号通路是否参与调控LSC中NKG2D配体的表达。方法:采用PI3K/mTOR信号通路抑制剂NVP-BEZ235对人急性骨髓白血病细胞(KG1a细胞)进行干预后,采用细胞技术试剂盒CCK-8检测KG1a细胞增殖,采用流式细胞术检测KG1a细胞周期及凋亡,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及免疫印迹(Western blot)检测细胞中NKG2D配体MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3的表达。结果:抑制剂NVP-BEZ235显著抑制KG1a细胞的增殖,并将KG1a细胞周期阻滞于细胞周期G0/G1期;NVP-BEZ235抑制剂干预后,KG1a细胞NKG2D配体MICB信使核糖核酸(mRNA)相对表达量显著升高,ULBP1、ULBP2、ULBP3、mRNA及蛋白表达量也显著升高。结论:PI3K/mTOR调控LSC的增殖及周期,且其能够调控NKG2D的表达,该结果为通过PI3K/mTOR抑制靶向治疗耐药的LSC提供了数据支持。
- 何川疆张素杰刘雯李泽泳周慧芳胡亮杉张丽萍许爱敏
- 关键词：白血病干细胞
- 间充质干细胞在衰老大鼠体内归巢的研究被引量：4
- 2009年
- 目的探究间充质干细胞(MSCs)在衰老大鼠体内的归巢。方法采用荧光染料CFSE标记的大鼠MSCs以3×105个尾静脉注射正常大鼠和衰老大鼠,24h后处死大鼠,将脑、心、肝、肺、脾、肾、肠、睾丸和卵巢制作成冰冻切片及细胞悬液涂片,在荧光显微镜下观察并计数。结果同种异体的MSCs能够归巢到衰老大鼠的脑、心、肝、肺、脾、肾、肠、睾丸和卵巢,与正常大鼠的归巢有相同趋势。结论MSCs能够归巢到衰老大鼠的各个器官,这可能与局部血流量和组织器官结构有关。
- 李艳菊胡亮杉郭坤元
- 关键词：间充质干细胞归巢衰老大鼠
- 格列卫治疗后bcr/abl融合基因变异的研究被引量：1
- 2012年
- 目的:应用荧光原位杂交法检测格列卫治疗后白血病bcr/abl融合基因的改变。方法:应用双色双融合法荧光原位杂交技术检测42例接受格列卫治疗的急慢性白血病患者骨髓细胞bcr/abl融合基因,对比治疗前后bcr/abl融合基因的改变。结果:所有患者治疗后均出现融合基因变异,与患者肿瘤负荷、分型和分期无关。结论:格列卫治疗可诱导bcr/abl基因发生融合变异。
- 邓兰刘鲲李洁周雪云胡亮杉郭坤元宋朝阳
- 关键词：白血病BCR/ABL融合基因荧光原位杂交
- 热疗联合柔红霉素对CD34^＋CD38^-白血病细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2009年
- 目的观察热疗联合柔红霉素(DNR)对CD34+CD38-急性髓白血病KG1a细胞增殖的抑制作用和对其凋亡的影响。方法免疫磁珠分离KG1a细胞中的CD34+CD38-细胞,以DNR作用48h后抑制50%CD34+CD38-细胞生长的药物浓度(IC50)作为后续实验的工作浓度。将CD34+CD38-细胞分为对照组、热疗组(40℃、42℃)、化疗组和热化疗组(40℃、42℃)。热疗、热化疗组在恒温水浴箱(40℃或42℃)中加热60min,化疗组、热化疗组以IC50浓度的DNR处理48h。MTT法检测DNR对CD34+CD38-KG1a细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率及42℃条件下细胞内DNR平均荧光强度的变化;甲基纤维素培养体系分析42℃条件下细胞的克隆形成能力。结果KG1a细胞中分离出的CD34+CD38-细胞纯度达95%以上,DNR的IC50为0.40μg/ml。热疗组、化疗组、热化疗组CD34+CD38-细胞增殖均明显受抑,且抑制作用随温度升高而增强(P<0.05)。热疗组、化疗组及热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著增加,且随温度升高凋亡率增加(P<0.05),热化疗组较化疗组及相同温度热疗组的细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。42℃热化疗组细胞内的DNR荧光强度(6.74±0.58)明显高于对照组(0.26±0.05)及化疗组(2.08±0.14,P<0.05)。42℃热疗组、化疗组、42℃热化疗组细胞的集落形成率明显低于对照组,且42℃热化疗组明显低于42℃热疗组和化疗组(P<0.05)。结论热疗能增强DNR抑制CD34+CD38-KG1a细胞增殖的作用,使细胞凋亡增多。
- 王国征郭坤元孙明佘妙容胡亮杉李章球
- 关键词：柔红霉素肿瘤干细胞
