羊婷婷
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 高效检测人降钙素原化学发光免疫分析方法的建立与评价被引量：3
- 2017年
- 目的重组原核表达人降钙素原(PCT)蛋白,制备抗人PCT单克隆抗体,建立高效检测PCT化学发光免疫分析方法。方法根据NCBI提供的PCT基因序列,按照大肠埃希菌偏爱密码子优化后进行全基因合成,通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切将其构建到pET32a载体上;将pET32a-PCT质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用Western blot法分析重组蛋白表达情况;用镍亲和纯化柱纯化重组蛋白,以此为抗原免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆化后再用间接ELISA法筛选阳性单克隆细胞;将阳性单克隆细胞接种于小鼠腹腔内,制备腹水单抗,经Protein A/G纯化后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,采用间接ELISA方法对抗体的特异性、灵敏度以及亲和力进行鉴定;用NaIO4氧化HRP法标记单克隆抗体,通过棋盘法筛选配对单克隆抗体,以筛选的配对抗体为捕捉抗体,建立双抗夹心化学发光免疫分析的血清学检测体系,检测临床150例血清标本,其中PCT升高(>0.05ng/ml)120例,PCT阴性(<0.05ng/ml)30例。结果共筛选出6株抗人PCT蛋白的单克隆细胞,制备的腹水效价均大于4×10^(-6);通过棋盘法筛选得到2对能够进行双抗夹心配对的单抗,其中1对亲和力较高,其亲和力常数分别为2.39×10~8 L/mol和2.91×10~8 L/mol。双抗夹心化学发光免疫分析方法检测线性范围为0.06~8ng/ml,其中阳性检出率为96.6%,阴性符合率为100%,与临床检测数据相比,相关系数R^2=0.9737。结论建立的双抗夹心ELISA方法灵敏度高、特异性强、稳定可靠,可用于细菌、寄生虫等病原体感染患者的PCT血清学定量检测。
- 羊婷婷余易展刘培王念超卢彦黄亚红
- 关键词：单克隆抗体双抗体夹心
- 一个罕见HLA—C等位基因间重组家系的遗传背景研究
- 2011年
- 目的 研究HLA-C等位基因座位上的交换重组,探讨HLA新等位基因产生的分子遗传背景.方法 采集拟进行造血干细胞移植的1例慢性粒细胞白血病患者、患者父母以及2名哥哥的静脉血,采用AlleleSEQR HLA 测序分型试剂进行HLA-A、C、B、DRB1和DQB1共5个位点的高分辨基因分型;再采用Protrans S4 HLA单倍体测序技术分离2个HLA-C等位基因,以确定序列异常的1个C等位基因;进一步采用分子克隆和测序方法进行患者及父母HLA-C等位基因的全长单倍体序列分析.按遗传规律分析该家系的HLA 5个位点的连锁单倍型,同时将HLA-C等位基因全长序列经IMGT/HLA Database中的＂BLAST＂程序进行序列的对比,以确定C等位基因重组发生的精确位置.结果 经HLA测序及遗传家系分析,该家系中父亲的2条HLA连锁单倍型分别为a：A＊0207-C＊010201-B＊550201-DRB1＊090102-DQB1＊030302与b：A＊240201-C＊120202-B＊5201-DRB1＊1502-DQB1＊0601;母亲的分别为：c：A＊300101-C＊060201-B＊130201-DRB1＊0405-DQB1＊0401与d：A＊110101-C＊070201-B＊4001-DRB1＊080302-DQB1＊0601.患者的2名哥哥均分别正常遗传了父母的2条单倍体a、d及b、c.患者的2条单倍体分别为母源单倍体c及父源重组单倍体a/b,其中A＊240201来自父亲的1条染色单体b,而B＊550201-DRB1＊090102-DQB1＊030302则来自父亲的另1条染色单体a.对比患者携带的C未知新等位基因与父亲的1对C＊010201 、C＊120202等位基因的全长单倍体序列,推断父亲的2条染色单体在减数分裂时,由于HLA-C等位基因的第273位至330位碱基区域之间发生了交换,重组后形成新的C等位基因及单倍型并遗传给了患者.该C新等位基因的全长序列已递交GenBank,并被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为C＊0121.结论 本研究发现了1个罕见的中国汉族人群HLA-C基因座位上的基因重组家系,阐明了HLA-C＊0121新等位基因及单倍型的产生来源,为更深入研�
- 邹红岩羊婷婷李桢
- 关键词：等位基因系谱
- 抗人胱抑素C单克隆抗体制备及免疫检测体系建立被引量：1
- 2017年
- 目的获得人胱抑素C(cystatin C,CysC)重组蛋白,制备亲和力高、特异性强的单克隆抗体,建立检测人血清中CysC的竞争ELISA检测体系。方法根据美国国立生物技术信息中心(NCBI)CysC基因序列优化合成CysC基因片段,并在大肠杆菌中表达得到CysC重组蛋白,免疫Balb/c小鼠后,通过杂交瘤细胞融合技术筛选获得阳性杂交瘤细胞株,制备腹水型单抗并进行纯化,通过间接ELISA法检测抗体的亲和力等性质,建立竞争ELISA检测体系,并对52个血清样本进行检测。结果获得了4株稳定分泌CysC单克隆抗体的细胞株,将抗体Ab3作为检测抗体并进行辣根过氧化物酶标记,其亲和力为4.26×10~6L/mol,检测线性范围为0.011~1.924μg/mL,检测限为4.598 ng/mL,半数抑制率(IC_(50))为0.145μg/mL。建立的竞争ELISA血清检测体系能准确检测52个血清样本。结论获得了亲和力、特异性较高的单克隆抗体,建立了可靠的竞争ELISA血清检测体系,为CysC快速免疫检测试剂盒的研制奠定了基础。
- 余易展羊婷婷刘培王念超卢彦黄亚红沈萍萍
- 关键词：单克隆抗体竞争ELISA
- 1种罕见HLA-C等位基因间重组家系的遗传背景研究
- 目的研究人类白细胞抗原复合体HLA-C基因座位上的交换重组,揭示HLA新等位基因产生的分子遗传背景。方法采集拟进行造血干细胞移植的1例女性患者、患者父母以及2个哥哥的静脉血,采用AlleleSEQR HLA测序分型试剂进...
- 邹红岩羊婷婷李桢
- 1种罕见HLA-C等位基因间重组家系的遗传背景研究被引量：1
- 2010年
- 邹红岩羊婷婷李桢
- 关键词：等位基因间重组HLA-C单体型染色单体中国汉族人群
