祝学卫
- 作品数：8 被引量：16H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院中国协和医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人载脂蛋白A-Ⅰ(Apo A-Ⅰ)的高级结构模型和主要功能域的确定被引量：1
- 2003年
- 载脂蛋白A-Ⅰ(Apo A-Ⅰ)是高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白质组分,在HDL介导的胆固醇逆向转运中发挥重要作用。Apo A-Ⅰ三级结构仍不清。在新生盘状HDL分子中,Apo A-Ⅰ主要存在两种结构模型:栅栏模型和带状模型。Apo A-Ⅰ可通过其N末端及C末端结构域与磷脂结合,引发HDL形成。Apo A-Ⅰ作为细胞胆固醇的受体,促进HDL对外周组织胆固醇的摄取。Apo A-Ⅰ氨基酸残基144～186为卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)主要激活域,通过激活LCAT,促进胆固醇逆向转运。
- 祝学卫陈保生
- 关键词：胆固醇逆向转运结构域
- 重组载脂蛋白A-I_(Milano)在心血管保护及冠心病治疗中的研究进展
- 2005年
- 祝学卫陈保生
- 关键词：冠心病治疗心血管保护载脂蛋白HMG-COA还原酶
- 联胺对内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白-1α的影响
- 2002年
- 目的 观察联胺能否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达和分泌巨噬细胞炎性蛋白 1α(MIP 1α)及其意义。方法 使内皮细胞暴露于不同浓度联胺 4h ,以核酸酶S1保护分析法检测内皮细胞内MIP 1αmRNA ,以细胞酶联免疫吸附实验测定内皮细胞的MIP 1α蛋白表达。同时收集内皮细胞条件培养基 ,用Boyden小室微孔滤膜法检测MIP 1α对外周血单核细胞的趋化活性。结果 内皮细胞MIP 1αmRNA在 5 μmol/L联胺组的表达是对照组的 3 4倍 ,差异具有显著性 (t=8 70 ,P <0 0 5 )。1、5、10 μmol/L联胺组MIP 1α蛋白的表达分别是对照组的 1 9倍、2 2倍、1 7倍 ,方差分析显示有统计学意义 (F =35 6 5 ,P <0 0 5 )。趋化实验显示 ,5 μmol/L联胺组内皮细胞的条件培养基引起单核细胞的迁移距离 [(99 5 0± 4 31) μm]显著高于无联胺组 [(6 6 47± 3 2 5 ) μm]、化学促动组 [(6 7 0 3± 6 83)μm]和随机移动组 [(6 5 40± 3 36 ) μm ,F =40 4 31,P <0 0 5 ],提示经联胺刺激的条件培养基内含有具趋化活性的物质。加入山羊抗人MIP 1α多克隆抗体后 ,联胺组条件培养基所致的单核细胞迁移距离降至 (82 80± 6 88) μm(F =192 2 5 ,P <0 0 5 ) ,说明经联胺刺激的条件培养基内含有具趋化活性的MIP 1α。结论 脂质过氧?
- 杨丽敏祝学卫赵霞邓仲端
- 关键词：动脉硬化血管内皮细胞脂质过氧化诱导剂
- 脂质过氧化诱导培养的内皮细胞表达白细胞介素-1被引量：2
- 2002年
- 为探讨脂质过氧化能否诱导内皮细胞表达白细胞介素 - 1(IL - 1)及其是否具有对单核细胞的趋化活性 ,用不同浓度 (1、 5和 10 μmol/ L)的联胺诱发培养的内皮细胞脂质过氧化 ,用硫代巴比妥酸微量荧光测定法测定样品中的丙二醛含量 ;用免疫细胞化学检测 IL - 1β蛋白的表达 ;用单核细胞趋化实验观察脂质过氧化诱导的白细胞介素 - 1的趋化活性。结果显示 ,随着联胺浓度的增高 ,细胞内的丙二醛含量逐渐升高 ,分别为对照组的 2 .6 0倍、 5 .88倍和 11.6 7倍(F=12 9.10 ,P<0 .0 5 )。免疫细胞化学显示 ,正常内皮细胞可表达低水平 IL- 1β,加联胺后 ,各组 IL- 1β蛋白表达明显增加 ,分别为对照组的 1.78倍、 2 .70倍和 5 .0 2倍 (F=2 93.83,P<0 .0 5 )。趋化实验显示 ,经联胺刺激的条件培养基引起的单核细胞迁移距离明显大于非联胺条件培养基和随机移动组 (F=6 12 .5 5 ,P<0 .0 5 ) ,在联胺刺激的条件培养基中加入抗 IL - 1α或抗 IL - 1β抗体后 ,单核细胞迁移距离皆明显缩短 (F=4 37.0 3,P<0 .0 5 )。结果提示 ,联胺可诱发内皮细胞的脂质过氧化 ,诱导其表达和分泌 IL- 1,并初步证明 IL- 1可招引单核细胞迁移 ,从而在动脉内膜单核
- 祝学卫杨丽敏赵霞邓仲端朱大和
- 关键词：脂质过氧化内皮单核细胞白细胞介素-1趋化作用
- 脂质过氧化对培养的人内皮细胞血管细胞粘附分子-1表达的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 :观察脂质过氧化对培养的人内皮细胞血管细胞粘附分子 - 1表达的影响。方法 :培养的人脐静脉内皮细胞随机分为实验组和对照组。实验组与不同浓度联胺 (1μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L)作用 8h ,对照组不加联胺。细胞原位杂交和细胞酶联免疫吸附法分别测定内皮细胞血管细胞粘附分子 - 1mRNA和蛋白表达。结果 :细胞原位杂交结果图像分析表明 ,实验组平均吸光度值分别为 0 .14 7± 0 .0 13、0 .2 92± 0 .0 2 0和 0 .396± 0 .0 2 2 ,是对照组 (0 .0 77± 0 .0 11)的 1.91倍、3.79倍和 5 .14倍。方差分析表明 ,各组间两两比较有显著差异 (P <0 .0 1)。细胞酶联免疫吸附测定结果 ,实验组平均吸光度值分别是 0 .15 8± 0 .0 0 8、0 .2 2 0± 0 .0 17和 0 .32 1± 0 .0 2 3,为对照组 (0 10 4±0 0 16 )的 1.5 3倍、2 .12倍和 3.0 9倍。各组间两两比较有显著差异 (P <0 .0 1)。结论 :人脐静脉内皮细胞脂质过氧化增加血管细胞粘附分子 - 1mRNA和蛋白表达 ,这可能促进单核细胞粘附血管内皮 ,在动脉粥样硬化发生发展中起重要作用。
- 邹飞雁王淑秀祝学卫邓仲端
- 关键词：内皮细胞二酰胺脂质过氧化作用
- 脂质过氧化诱导培养的内皮细胞产生单核细胞趋化因子RANTES被引量：9
- 2001年
- 为探讨脂质过氧化损伤是否诱导内皮细胞产生单核细胞趋化因子RANTES ,使培养的人脐静脉内皮细胞暴露于 5 μmol/L联胺后收取其条件培养基。继之 ,将其放在截留分子质量分别为 3.5kDa(外层 )和 10kDa(内层 )的双层透析袋中 ,间层注入适量的 0 .0 1mol/LPBS ,再将透析袋悬在装有PBS的锥形瓶内进行透析。透析完毕 ,取出间层液体 ,即为分子质量为 3 .5～ 10kDa的条件培养基 ,其中含RANTES。用微孔滤膜法进行单核细胞趋化实验 ,并应用鼠抗人RANTES抗体 ,以证明条件培养基中RANTES的趋化活性。结果发现 ,经联胺刺激的条件培养基引起的单核细胞迁移距离 (89.75± 11.33μm)明显大于不经联胺刺激的条件培养基 (77.30± 11.5 3μm)和随机移动组 (76 .18± 10 .5 0 μm)。方差分析显示 ,组间差异有极显著性 (F =47.2 0 ,P <0 .0 1)。加入鼠抗人RANTES抗体后 ,单核细胞迁移距离明显缩短 (F =2 1.31,P <0 .0 1)。结果提示 ,从功能实验方面表明脂质过氧化损伤能诱导内皮细胞产生RANTES增强 ,并可能在动脉粥样硬化病变的发生过程中起一定作用。
- 赵霞祝学卫杨丽敏邓仲端朱大和
- 关键词：脂质过氧化RANTES血管内皮单核细胞
- 人载脂蛋白A-Ⅰ半胱氨酸突变体的二级结构和脂质结合能力的比较被引量：1
- 2005年
- 为探讨人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ,apolipoproteinA-Ⅰ)α螺旋不同位点的半胱氨酸突变后,对蛋白二级结构和脂质结合能力的影响,利用定点诱变技术构建apoA-Ⅰ的天然半胱氨酸突变体apoA-ⅠMilano(R173C),及其它α螺旋片段上的半胱氨酸突变体,分别为apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),和apoA-Ⅰ(L195C).观察比较各种野生型及突变apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量和二级结构稳定性及其脂质结合能力.结果显示,野生型apoA-Ⅰ,apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),apoA-ⅠMilano和apoA-Ⅰ(L195C)的α螺旋含量分别为54±4%,49±4%,50±2%,51±6%,56±4%,52±3%,和54±1%,各种蛋白的α螺旋含量无显著性差异(P>0.05).野生型apoA-Ⅰ的变性标准自由能(ΔG0D)为10.5kJ/mol;apoA-Ⅰ(S52C)和apoA-ⅠMilano的ΔG0D比野生型低2.1kJ/mol;而apoA-Ⅰ(K129C)的ΔG0D比野生型apoA-Ⅰ高1.6kJ/mol.与野生型apoA-Ⅰ相比,apoA-Ⅰ(K129C)和apoA-Ⅰ(L195C)两个突变体与脂质结合能力明显下降(P<0.05),而其它半胱氨酸突变体(包括apoA-ⅠMilano)在脂质结合动力学方面与野生型apoA-Ⅰ无明显差异.以上结果提示,不同位点发生的半胱氨酸突变对apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量无明显影响,但对蛋白的二级结构稳定性和脂质结合能力影响不尽相同.
- 祝学卫吴刚曾武威薛红陈保生
- 人载脂蛋白A-I的原核表达及二级结构和功能鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的为获得高产量并具有正常结构和生物学活性的原核表达人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)。方法利用DNA重组技术对人apoA-Ⅰ的前8个氨基酸引入沉默突变,以pET-30b(+)为原核表达载体,在apoA-Ⅰ多肽链C-末端引入6×组氨酸标签,采用镍亲和层析对表达蛋白进行纯化。分别使用圆二色分析、浊度澄清试验和胆固醇外流试验对重组apoA-Ⅰ的α螺旋含量、脂质结合动力学及促细胞胆固醇外流能力进行评价。结果获得高表达产量的重组apoA-Ⅰ(12 mg纯化apoA-Ⅰ蛋白/L菌液);重组蛋白的α螺旋含量为(54±4)%,脂质结合动力学速率常数k1/2为0.059±0.002 min-1,胆固醇外流百分比为(16.68±1.77)%。结论可获得高产量并具有生物学活性的重组人apoA-Ⅰ;为构建apoA-Ⅰ其他突变体提供模式。
- 祝学卫吴钢曾武威薛红陈保生
- 关键词：原核表达
